Кольорові реакції з білками на виявлення циклічних амінокислот

Принцип методу . Для якісного виявлення залишків циклічних амінокислот у складі молекули білка використовують характерні для цих амінокислот реакції. Так, для виявлення залишків ароматичних амінокислот використовують ксантопротеїнову реакцію, залишків тирозину – реакцію Мілона, залишків триптофану – реакції Адамкевича та Вуазене, залишків гістидину та тирозину – реакцію Паулі.

Обладнання та реактиви: Штатив із пробірками, піпетки градуйовані, бюретка, скляні палички, крапельниці, термометр лабораторний, годинник, ванночка з льодом, 1 %-ий розчин яєчного білка, концентрована сірчана кислота, 10 %-ий розчин карбонату натрію, 2,5 %-ий розчин формальдегіду, 1 %-ий розчин сульфанілової кислоти в 5 %-ому розчині соляної кислоти, 0,5 %-ий розчин нітриту натрію.

Хід роботи :

А. Реакція Вуазене. В пробірку внести 2 мл розчину яєчного білка та 1 краплю розчину формальдегіду. До отриманої суміші, ретельно перемішуючи та охолоджуючи пробірку в ванночці з льодом, обережно краплями за допомогою бюретки додати 6 мл концентрованої сірчаної кислоти. Через 10 хв. у пробірку влити, перемішуючи, 10 крапель розчину нітриту натрію. При цьому спостерігається утворення синьо-фіолетового забарвлення.

Б. Реакція Паулі. В пробірку внести 1 мл розчину сульфанілової кислоти в розчині соляної кислоти, 2 мл розчину нітриту натрію та, після ретельного перемішування, 2 мл розчину яєчного білка й 6 мл розчину карбонату натрію. Після перемішування суміш забарвлюється в вишнево-червоний колір.

 

Реакції осадження білків

Принцип методу . Під впливом різноманітних факторів білки втрачають свою нативну структуру, денатурують і внаслідок цього переходять у нерозчинний стан. Осадження білків спостерігається, наприклад, при їх нагріванні, при дії органічних розчинників, алкалоїдних речовин, нейтральних солей високої концентрації, солей важких металів, мінеральних та органічних кислот і інших факторів. 

Обладнання та реактиви: Штатив із пробірками, піпетки градуйовані, крапельниці, шпатель, 1 %-ий розчин яєчного білка, 5 %-ий розчин ацетату свинцю, 5 %-ий розчин сульфату міді (ІІ), 3 %-ий розчин нітрату срібла, кристалічний хлорид натрію, 96 %-ий етиловий спирт, 95 %-ий ацетон, концентрована соляна кислота, концентрована сірчана кислота, концентрована азотна кислота, 20 %-ий розчин сульфосаліцилової кислоти, 5 %-ий розчин трихлороцтової кислоти.

Хід роботи :

А. Осадження білків солями важких металів. У три пробірки внести по 3 мл розчину яєчного білка. В першу з них краплями додати розчин ацетату свинцю, в другу – розчин сульфату міді (ІІ), в третю – розчин нітрату срібла. При цьому спостерігається випадання осаду білка. В першу та другу пробірки додати надлишок відповідно розчину ацетату свинцю та розчину сульфату міді (ІІ). При цьому осад зникає.

Б. Осадження білків органічними розчинниками. В пробірку внести 2 мл розчину яєчного білка, додати декілька кристаликів хлориду натрію та 2 мл етилового спирту. Вміст пробірки добре збовтати. При цьому спостерігається випадання осаду білка. Аналогічну реакцію проробити з ацетоном.

В. Осадження білків мінеральними кислотами. В три пробірки обережно налити по 1 мл, відповідно, концентрованих соляної, сірчаної та азотної кислот. Нахиливши пробірки, по їх стінці долити 1 мл розчину яєчного білка. На межі двох рідин спостерігається поява осаду білка у вигляді мутнобілого кільця. Вміст кожної з пробірок обережно струсити. При цьому відбувається розчинення осаду в надлишку кислот.

Г. Осадження білків органічними кислотами. В дві пробірки внести по 1 мл розчину яєчного білка. В одну з них додати 2 мл розчину сульфосаліцилової кислоти, в іншу – 1 мл розчину трихлороцтової кислоти. При цьому спостерігається випадання осаду білка.

 

⇐ Предыдущая11121314151617181920Следующая ⇒

Поделиться: