Объекты и материал для диагностики

⇐ ПредыдущаяСтр 8 из 8

Для этого производится забор пищевых продуктов, рвотных масс, промывных вод. испражнений на бактериологические исследования.

общавшиеся в очаге в течение 2 суток после выявления больного подвергаются однократному бактериологическому обследованию на носительство (испражнения, моча).

при подозрении распространения инфекции из какого-либо пищевого объекта, данный объект временно закрывается, реализация его продукции запрещается, с оборудования, посуды и других предметов делают смывы на обнаружение сальмонелл, проводится тщательная уборка и мытьё оборудования с применением дезсредств.

Для предупреждения заболеваний сальмонеллезами в мед.учреждениях и больницах предусматриваются основные положения:

при поступлении детей в возрасте до 3 лет, состоящих на диспансерном учете по кишечным инфекциям, в детские соматические стационары обеспечить их изоляцию в диагностические палаты;

в районных и участковых больницах, где не могут быть выделены диагностические палаты, предусмотреть возможность перепрофилирования других отделений, с целью избежать перегрузки;

усилить наблюдение за людьми с повышенным риском заболевания (контроль санитарного режима, режим питания, санитарно-просветительная работа: расширить показания к бактериологическому обследованию детей и взрослых с повышенным риском заболевания;

расширить показания к бактериологическому обследованию беременных женщин и других взрослых, имеющих нарушение деятельности кишечника; у рожениц, перенесших острые кишечные заболевания в течение 3-х месяцев до родов, роды принимать в обсервационном отделении;

доноров грудного молока в родильных домах формировать из числа родильниц, не болевших сальмонеллезом в течение 3-х месяцев до родов и обследованных бактериологически;

предусмотреть в каждом родильном отделении специально оборудованный пункт сбора, разлива и пастеризации грудного молока, с закрепленным за ним медработником.

Мероприятия, направленные на предупреждение заноса инфекции в стационары и возникновение госпитальных сальмонеллезов:

раннее выявление и изоляция больных сальмонеллезом (контроль за состоянием стула ребенка);

своевременное бактериологическое обследование больных при появлении первых признаков заболевания желудка и кишечника;

полное использование методов диагностики, в том числе серологических исследований и метода гемокультуры;

рациональное, своевременное (курсО применение антибиотиков (сальмонеллы могут приобретать устойчивость к антибиотику в течение одного курса лечения);

своевременно начатые и полно проведенные противоэпидемические мероприятия в связи со своевременной информацией о первых случаях заболевания и но другим причинам;

соблюдение санитарно-гигиенического и противоэпидемического режима в стационарах, правил уборки помещений, сбора, хранения, обеззараживания и стирки белья;

прекращение свободного общения больных между собой, переводы из палаты в палату или из отделения в другое отделение только строго обоснованные (по эпидемиологическим показаниям);

при наличии в лечебных учреждениях достаточного числа помещений, необходимых для изоляции выявленных больных (боксы, изоляторы и т.д.); санитарно-просветительская работа с госпитализированными и обслуживающим персоналом.

Приложение № 8

Классификация семейства Vibrionaceae

Род Aeromonas

Род Plesiomonas

Род Photobacterium

Род Vibrio

а) Вид V.cholerae 01 (2 биовара: классический и Эль-Тор)

б) Вид V.cholerae не 01 (от 02 до 0139, НАГ, RО)

в) Виды: V.metschnikovii V.vulnificus

V.harveyi V.marinus

V.parahaemolyticus V.minicus

V.alginolyticus и другие – всего 34 вида.

Возбудителями холеры являются вибрионы 01 и 0139 групп.

Остальные вибрионы вызывают острые кишечные инфекции типа гастроэнтеритов и раневые инфекции, отдельные виды – например, V.vulnificus, - септицемии, раневые инфекции, пневмонии, эндометриты, V.alginolyticus - ОКИ, отиты, раневые инфекции.

Основные дифференциальные признаки возбудителей холеры

№ п/п	Признаки	Азиатика	Эль-Тор	Серовар 0139
1.	Р. Фогес-Проскауэра	± (чаще -)	± (чаще +)	± (чаще +)
2.	Чувствительность к полимиксину В	+	- Ж	-
3.	Гемолиз эритроцитов барана	-	+	-
4.	Агглютинация куриных эритроцитов	-	± (чаще +)	± (чаще +)
5.	Чувствительность к классическому монофагу	+	-	-
6.	Чувствительность к монофагу Эль-Тор	-	+	-
7.	Гексаминовый тест	-	+	-

Реакция Фогес-Проскауэра: В среду Кларка засеваем культуру, затем добавляем креатинин (альфа-нафтол с КОН) – в положительном случае бульон окрашивается в розовый цвет.

Среда Кларка: МПБ + 1 % глюкозы + К₂НРО₄. При ферментации глюкозофосфатного бульона Кларка (глюкозы) микробами образуется ацетилметилкарбинол (ацетоны), окрашивающий среду в красный цвет при взаимодействии с креатинином (альфа-нафтол с едким калием).

Тест на оксидазную активность: Оксидаза окисляет фенилендиамин,

что приводит к появлению синего окрашивания. 1 каплю 1% раствора параминодиметиланилина (гидрохлорида или оксалата) наносят на поверхность 18-часовой агаровой культуры в чашке Петри + 1 каплю 1% спиртового раствора альфа-нафтола. В положительных случаях через 1-3 минуты получаем синее окрашивание.

Гексаминовый тест: Берем глюкозо-гексаминовую среду 1% раствор гексамина (уротропина) в 100 мл МПБ + 1% глюкозы + индикатор бромтимоловый синий (исходный цвет среды зеленоватый) + засеваем культуру. Вибрион Эль-Тор через 6-8 часов окрашивает среду в желтый цвет, истинный холерный вибрион цвет среды не изменяет.

Развернутая дифференциальная характеристика

холерных 01 и основных видов холерных не 01 вибрионов

№ п/п	Признаки	Холерный вибрион	Эль-Тор	0-139 не 01 вибр.	НАГ не 01 вибр.
1.	Рост на 1% п.в.	Равномерное помутнение, пленка на поверхности серовато-голубоватые, гладкие, диаметр 1-1, 5 мм и более. Серо-голубые, синевато-зеленые, могут быть в центре красноватые, розоватые. Встречаются колонии с ярко-красным центром и прозрачным синевато-голубоватым краем. Колонии не играют, не сверкают, цвет приглушен. Грам отрицательные палочки полиморфные, прямые и изогнутые.
2.	Морфология колоний на щелочном агаре
3.	Морфология колоний в косопроходящем свете
4.	Морфология микроба в мазках по Граму
5.	Подвижность	+	+	+	+
6.	Среда Клиглера (двухсахарная) столбик/косяк	к/-	к/-	к/-	к/- (столбик желтый)
7.	Глюкоза	к	к	к	К
8.	Лактоза	-	-	-	-
9.	Маннит	к	к	к	к
10.	Сахароза	к	к	к	±
11.	Манноза	к	к	к	±
12.	Арабиноза	-	-	-	±
13.	Инозит	-	-	-	-
14.	H₂S	-	-	-	-
15.	Индол	+	+	+	+
16.	Диастаза	+	+	+	+ на крахмал
17.	Желатиноза	+	+	+	+
		Воронкообразное через 48-72 часа
18.	Оксидаза	+	+	+	+
19.	Лецитиназа	±	±	±	±
20.	Гемотоксин	- -	± +	- (+) +	± проба ± Грейга
21.	Агглютинация с Инаба, Огава АТ	+	+	-	-
		В зависимости от серовара		-	-
	c RO	-	±	-	-
22.	Люминесцентное свечение	ххх	ххх	-	-
23.	Чувствительность к бактериофагам-классическим	+	-	-	-
	Эль-Тор	-	+	-	- (+)
	ХДФ 3, 4, 5	-	±	-	- (+)

24.	Тест Хью-Лейфсона (расщеплен. глюкозы в аэроб/анаэроб.усл.)	к/к	к/к	к/к	к/к
25.	Аргинин-дегидролаза	-	-	-	-
26.	Лизин-декарбоксилаза	+	+	+	+
27.	Орнитин-декарбоксилаза	+	+ (-)	+	+ (-)
28.	Чувствительность к полимиксину (30 ед.)	+	-	-	-
29.	РА с холерной агглютинирующей сывороткой 0-139	-	-	+	-
30.	Р. Фогес-Проскауэра	-	+	+	+
31.	Среда Олькеницкого	к/к	к/к	к/к	к/к
32.	Среда Ресселя	к/-	к/-	к/-	к/-
33.	Наличие полисахаридной капсулы	-	-	+	-

Чувствительность холерных вибрионов и 0139 к антибактериальным препаратам

Асплоксацин

Офлоксацин

Цефотаксин

Ципрофлоксацин

Гентамицин

Левомицитин

Рафампецитин

Доксициклин

Тетрациклин

Стрептомицин

Ампициллин

Фуразомидон %

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100

Приложение №9

СХЕМА

бактериологического исследования (начальный этап)

Материал

1.Рвотные массы 4.Кровь 6.Отделяемое ран

2.Промывные воды желудка (дефибриниров.)

3.Испражнения 5.Спинномозговая жидкость

1-2г или мл

первая среда

обогащения 1 мл

50 мл 1% п.в. Э.С.

Щ.А.М. с 1, 5% NaCl

1-й день через 6-8 часов через 6-8 часов

исследования инкубации при инкубации при

37^оС 9 мл 37^оС п.в.

МПБ с с 1, 5%

1, 5% NaCl NaCl

Э.С.

вторая среда

обогащения

10 мл 1% п.в. Щ.А.М.

Щ.А.М. Щ.А.М.

вторая среда

обогащения

1% п.в. с

1, 5% NaCl

__________________________________________________________________

1-й день 1. Посев на щелочной агар (Щ.А.М.) и на одну элективную среду

(Э.С.)

2-й день 2. Отбор колоний, подозрительных на вибрионы с посевов

предыдущего дня:

а) подозрительные на холерные вибрионы колонии агглютинируют холерными 01, RО и 0139 сыворотками; при

положительных результатах проводят исследования, направленные на выделение и идентификацию возбудителя холеры.

б) подозрительные на холерные не 01 группы и др.виды вибрионов колонии на щелочном агаре и элективной среде отсеивают одной петлей на среду Ресселя и в 1% пептоновую воду без NaCl и с 5-10 % NaCl.

3-й день 1. Изучение посевов со 2-го пептона и выделение подозрительных

колоний (культур) проводят так же, как и с 1-го пептона.

2. Учет роста культур в 1% пептонной воде без NaСl и на среде

Ресселя.

3. Постановка пробы на индофенолоксидазу с культурой со среды Ресселя и реакция агглютинации с холерным 01 и 0139 сыворотками на стекле с культурами, выросшими в 1% п.в. без NaCl и давшие характерные изменения на среде Ресселя.

4. Изучение морфологии клеток в мазках, окрашенных по Граму.

5. Посев отобранных культур (галофильных вибрионов) в дифференциально-диагностические среды, содержащие 1, 5% NaCl.

6. Определение чувствительности культур к вибриостатику 0/129.

4-й день 1. Учет результатов тестов идентификации. Определение вида выделенных культур вибрионов.

2. Идентификация культур, выделенных со второго пептона.

5-й день Учет результатов исследования. Выдача ответа (окончательного).

__________________________________________________________________

Примечание: в связи с высокой энергией роста холерных вибрионов учет результатов на каждом этапе проводят несколько раз, через 4-8 часов.

Приложение №10

Ускоренный метод диагностики холеры

Вид: Микроскопическое изучение Кал, рвотные массы, желчь,

(рисового отвара)

I этап:

Грам «- » вибрионы Раздавленная капля Иммунофлюоресценция

Подвижность РИФ, РНИФ

Посев на комплект сред:

Б/фаг

Мукарджи IV

Пептон 1% пепт. 1% пепт. 5% кров. Щелочной МПА с

1% вода вода + вода + МПА с дисками антибиотиков

01 сывор. 0, 5% эритроцитами (полимиксин) и б/фагом

крахмала барана

II этап: Учет по принципу I этапа каждые 4-6 часов в течение суток.

Пленчатый рост Агглютинат 01 При добавлении Гемолиз Индивид. рез-ты

Грам «-» вибрион вибриона йода: V.eltor Х.в. – чувств к

Подвижны Нет его – при Нет синевы при Нет его - полимиксину и

не 01 вибрионах х.в. 01 холерный б/фагу;

Синева – при вибрион Эль-Тор – нет

вибр. Эль-Тор.

За сутки этим методом можно получить окончательные результаты

Экспресс-методы диагностики вибрионов

1. Люминесцентно-серологический (РИФ, РНИФ).

2. Иммобилизация вибрионов типовыми сыворотками.

3. Иммобилизация вибрионов типовыми бактериофагами.

4. Развернутая реакция агглютинации в бульоне.

5. Метод микроагглютинации материала.

6. Выявление вибрионов в воде реакцией агглютинации.

7. Исследование воды путем подращивания на мембранных фильтрах с помощью люминесцентной микроскопии.

Особенности иммунолюминисцентной диагностики холеры –

РИФ и РНИФ

РИФ – реакция прямой иммуно-флюоресценции при холере ставится по классической методике путем микроскопического выявления возбудителя в зафиксированном и обработанном ФИТЦ – препаратом мазке. Эта особенность (обязательная фиксация) связана с эпидемической опасностью работы с ООИ.

РНИФ – непрямая реакция иммунофлюоресценции ставится в случае отсутствия меченой ФИТЦ противохолерной иммунной сыворотки, но при наличии специфической не меченой и меченой противоиммуноглобулиновой видовой к белкам того вида животного, который использован для получения иммунных противохолерных антител. Эта реакция разработана Кунсом. Она выявляет антитела к Ig в иммунной сыворотке, среагировавшие в мазке с возбудителем.

Приложение № 11

Питательные среды

I. Жидкие среды обогащения:

1. 1% пептонная вода.

2. Пептонная вода с теллуритом калия.

II. Плотные среды:

1. Щелочной агар (рН = 8-8, 2).

2. Щелочной агар с теллуритом калия.

3. Желточно-солевой агар (ЖАС).

4. Среда Дьедонне (щелочной МПА с дефибринированной кровью быка или барана).

5. Среда Монсура (таурохолат-теллуритовая).

6. Среда Аронсона (щелочной агар с сахарозой, сернокислым натрием, фуксином). Холерные вибрионы дают розовые колонии.

7. Среда Оттоленги (щелочной МПБ с бычьей желчью).

8. Теллурит-калиевая среда.

9. Висмут-сульфитная среда Рида.

10. Висмут-сульфитная среда с маннозой Вильсона и Рейли, рН-8, 8.

III. Консервирующие среды:

1. Среда Венкатрамена и Рамакришнона (щелочной бульон с морской солью).

2. 2% раствор поваренной соли (морская соль).

3. 1% пептонная вода.

Приложение №12

Фаготипирование холерными диагностическими бактериофагами ХДФ холерных вибрионов Эль-Тор с одновременной дифференциацией их патогенности

Серотип	Вирулентность	Чувствительность к монофагам			Гемолиз эритроцитов барана
Серотип	Вирулентность	ХДФ-3	ХДФ-4	ХДФ-5	Гемолиз эритроцитов барана
Огава, Гикошима	Высокая	+ + - +	+ + + -	+ - + +	- - - -
	Слабая	+ + + -	+ + - -	+ - + +	+ + +(-) +(-)
	Авирулентные	- + -	- - +	- - -	+(-) +(-) +(-)
Инаба	Высокая	+ + - - +	+ + + - -	+ - + + -	- - - - -
	Слабая	+ + - + - +	+ + + - - -	+ - + + + -	+ + + + + +
	Авирулентные	- -	- +	- -	+(-) +(-)

Примечание: ХДФ – холерный диагностический фаг.

Фаготипирование энтеротоксигенных неагглютинирующих вибрионов (НАГ) не 01 группы типовыми бактериями ТЭПВ к энтеропатогенным вибрионам

Фаготипы вибрионов НАГ	Типирующие фаги
Фаготипы вибрионов НАГ	ТЭПВ - 1	ТЭПВ - 2	ТЭПВ - 3	ТЭПВ - 4	ТЭПВ - 5	ТЭПВ - 6	ТЭПВ - 7
1	+
2		+
3			+
4				+
5					+
6						+
7							+

Примечание: ТЭПВ – типовые фаги к энтеропатогенным вибрионам НАГ. Типируют методом агаровых слоев.

Методика: испытуемую культуру засевают в пробирку с 4 мл МПБ, инкубируют при + 37^о С в течение 3 часов. Затем 0, 3 мл бульонной культуры вносят в пробирку с 4 мл. 0, 7% расплавленного и остуженного до + 45^оС МПА, перемешивают и выливают вторым тонким слоем в стерильную чашку с первым застывшим слоем 2% МПА, после этого на поверхность МПА петлей или каплей из пипетки наносят типовые бактериофаги в цельном виде, а при необходимости – в разведении от 10^-1 до 10^-4. Каплям фага дают подсохнуть, впитаться, после чего пробы помещают в термостат при +37^оС на 4-18 часов. Контроль – физ.раствор.

Учет результатов ведут при наличии стерильных пятен в связи с лизисом чувствительных к фагу культур. В контроле и при нечувствительности культуры лизиса нет.

Ускоренный метод. Из подготовленной бульонной культуры делают штриховой высев на 8 секторов МПА, а сверху наносят бактериофаг. Режим инкубации и учет результатов те же.

Приложение №13

Характеристика генетической основы патогенности

Кассета генов патогенности в хромосоме холерных вибрионов 01	Реализация кассеты в тестах
Vct⁺ ген патогенности	- токсигенность Vct (in vitro, in vivo)
TOX’T ген-код синтеза токсического белка	- гемотоксин “Haem-tox 01” к бараньим эритроцитам
CT⁺синтез токсигена, реализует	- патогенность для крольчат в
TCP⁺ токсиноиндуцирующие пили	изолированной клетке
адгезии для CTXф	- агглютинация куриных эритроцитов
CTXф - переносчик Vct⁺
Кассета холерных свободно живущих вибрионов не 01
TOX R – передавемый код
tep A – кодирует и реализует TCP с помощью восприимчивого организма.

Приложение №14

Галофильные вибрионы

К патогенным для человека вибрионам, кроме возбудителей холеры, относятся морские галофильные вибрионы, вызывающие пищевые отравления, связанные с употреблением в пищу продуктов моря, холеро- и дизентериеподобные заболевания, септицемии, раневые инфекции.

К ним относятся: V. parahaemolyticus, V. alginolyticus, V. vulnificus, V. minicus и др. Они инфицируют человека алиментарно-энтеральным и контактным (с морской водой) путями.

Основные свойства некоторых морских галофильных и не галофильных вибрионов, патогенных для человека

Признаки	V.parahaemoly ticus	V.alginaly ticus	V.vulnifi cus	V.mimi cus
Наличие индофенолоксидазы	+ +	+ +	± ±	+ +
Лизиндекарбоксилаза	+	+	+	+
Орнитиндекарбоксилаза	-	-	-	-
Аргининдегидролаза	-	-	-	+
Рост в 1% п.в. без NaCl с 3% NaCl	+ +	+ +	+ +т	+ +
Ферментация глюкозы без газа	-	-	+	-
Лактозы	-	+	-	-
Сахарозы	+	+	+	+
Маннозы	+, -	-, +	- т	-
Арабинозы	+	+	+, -	+
Маннита	+	+	+	+
Мальтозы	+	+	+	+
Крахмала	-	-	-	-
Инозита
Образование ацетил-метил	-	+	-	-
карбинола	+	+	+	+
индола	-	-	-	-
сероводорода	+	+	+	+
лецитиназы	-	-	-	-
уреазы	+	+	+	+
Редукция NO3 в NO2	+	+	+	+
Подвижность

⇐ Предыдущая 1 2 3 4 5 6 78

Последнее изменение этой страницы: 2019-04-09; Просмотров: 401; Нарушение авторского права страницы