Приготовление питательной среды Мюллера Хинтона

⇐ ПредыдущаяСтр 5 из 5

Агаровая среда Мюллера Хинтона представляет собой стандартную питательную среду соответствующую нормам ВОЗ.
на 1000 мл дистиллированной воды:
- Лиофилизат настоя, приготовленного из 300 гр. говяжьего мяса
- Гидролизат казеина: 17, 5 г
- Кукурузный крахмал: 1, 5 г
- Агар-агар: 10 г
- рН 7, 3 ± 0, 1 после автоклавирования

Содержание двухвалентных катионов

ионов Mg2+ содержится от 20 до 35 мг/л.
ионов Са2+ содержится от 50 до 100 мг/л.

Концентрация тимидина • должна быть меньше 50 нг/л
Агар Мюллера Хинтона выпускается микробиологическими фирмами производителями (в частности фирмой bioMerieux*) в нескольких видах:

в чашках Петри, готовых к использованию, с добавками для роста микроорганизмов со сложными питательными потребностями или без них.
во флаконах различного объема, содержимое которых необходимо растапливать и разливать в лаборатории по чашкам Петри
в сухом виде для приготовления среды в лабораторных условиях

· Диски с антибиотиками

Диски выпускаются фирмами-производителями (в частности фирмой bioMerieux*) в стандартной упаковке ( с 50 дисками или в стандартной таре, содержащей 4, 10 или 18 упаковок. Упаковки удобны для пользователя, герметичны, содержат поглотитель влаги.

Диаметр дисков, согласно рекомендациям ВОЗ, составляет 6, 35 мм. На каждый диск нанесена аббревиатура, состоящая из 1, 2 или 3 букв. Хранить диски необходимо в сухом месте при + 2-8°С

Приготовленный таким образом инокулят наносят в количестве 1 – 2 мл на поверхность чашки Петри с питательной средой, равномерно распределяют по поверхности покачиванием и удаляют избыток жидкости пипеткой. Приоткрытые чашки подсушивают при комнатной температуре в течение 10 – 15 мин.

Аппликация дисков

Разместить диски с соответствующими антибиотиками на поверхности агара, выдерживая расстоянии 15 мм от края чашки и не менее 30 мм между дисками.

Расстояние между центрами дисков (30 мм) позволяет обычно избегать интерференции между антибиотиками, но иногда в антибиограмме может быть обнаружен синергизм или антагонизм. Так, расположенные на расстоянии больше 60 мм между центрами, диски с триметопримом и с сульфамидом определяют чувствительность каждый к своему препарату. При расположении их на более близком расстоянии наблюдается эффект синергизма при слиянии зон просветления. Синергизм (несимметричные зоны) могут также наблюдаться в случае устойчивости к одному или другому из компонентов.

Оценка результатов

Для интерпретации полученных результатов используют таблицы, в которых приведены пограничные значения зон ингибиции роста, позволяющие отнести исследуемую культуру микроорганизма к одной из трех категорий: “чувствительный”, “промежуточный”, “устойчивый”.

1. При отнесении штамма к категории “чувствительный” предполагается, что лечение инфекционной болезни, вызванной данным микроорганизмом, соответствующим антибиотиком в обычных терапевтических дозах будет, скорее всего, успешным.
2. При отнесении штамма к категории “промежуточный” предполагается, что лечение инфекционной болезни, вызванной данным микроорганизмом, соответствующим антибиотиком может быть успешным лишь при использовании повышенных доз препарата или при локализации инфекции в тех локусах человеческого организма, где антибиотик способен концентрироваться в силу его фармакокинетических особенностей (моча).
3. При отнесении штамма к категории “резистентный” предполагается, что лечение инфекционной болезни, вызванной данным микроорганизмом, соответствующим антибиотиком даже в повышенных дозах будет, скорее всего, неудачным.

Микроорганизмов Количество
1 Enterococcus faecalis 10^5 КОЕ/мл
2 Escherichia coli 10^4 КОЕ/мл

Микроорг. 1 Микроорг. 2
Азитромицин Устойчивый
Амикацин Чувствительный
Амоксиклав Чувствительный
Ампициллин Чувствительный
Ампициллин/ сульбактам Чувствительный
Бензилпенициллин Чувствительный
Ванкомицин Чувствительный
Доксициклин Чувствительный
Кларитромицин Устойчивый
Клиндамицин Устойчивый
Левофлоксацин Чувствительный Чувствительный Меропинем Чувствительный
Моксифлоксацин Чувствительный Чувствительный Нитрофурантоин Чувствительный Чувствительный Норфлоксацин Чувствительный
Офлоксацин Чувствительный Чувствительный Рифампицин Чувствительный
Рокситромицин Устойчивый
Тобрамицин Чувствительный
Хлорамфеникол Чувствительный Чувствительный Цефепим Чувствительный
Цефоперазон Чувствительный
Цефотаксим Устойчивый

Антибиотики для оценки возбудителей кишечных инфекций

Микроорганизмы, выделенные при локализованных кишечных инфекциях	Микроорганизмы, выделенные при генерализованных кишечных инфекциях
Ампициллин. Ко-тримоксазол Норфлоксацин Ципрофлоксацин (офлоксацин)	Ампициллин.Ко-тримоксазол Норфлоксацин.Ципрофлоксацин (офлоксацин).Цефотаксим (цефтриаксон)Хлорамфеникол.

Внутрибольничные инфекции (также госпитальные, нозокомиальные ) — согласно определению ВОЗ, любые клинически выраженные заболевания микробного происхождения, поражающие больного в результате его госпитализации или посещения лечебного учреждения с целью лечения, либо в течение 30 дней после выписывания из больницы (например, раневая инфекция), а также больничный персонал в силу осуществления им деятельности, независимо от того, проявляются или не проявляются симптомы этого заболевания во время нахождения данных лиц в стационаре.

Инфекция считается внутрибольничной, если она впервые проявляется через 48 часов или более после нахождения в больнице, при условии отсутствия клинических проявлений этих инфекций в момент поступления и исключения вероятности инкубационного периода. На английском языке такие инфекции называются nosocomial infections, от др.-греч. ν ο σ ο κ ο μ ε ί ο ν — госпиталь (от ν ό σ ο ς — болезнь, κ ο μ έ ω — забочусь).

Госпитальные инфекции следует отличать от часто смешиваемых с ними смежных понятий ятрогенных и оппортунистических инфекций.

Ятрогенные инфекции — инфекции, вызванные диагностическими или терапевтическими процедурами.

Оппортунистические инфекции — инфекции, развивающиеся у больных с поврежденными механизмами иммунной защиты

Примеры внутрибольничных инфекций

· Вентилятор-ассоциированная пневмония (ВАП)

· Туберкулез

· Инфекции мочевыводящих путей

· Госпитальная пневмония

· Гастроэнтерит

· Золотистый стафилококк

· Метициллин-резистентный золотистый стафилококк (MRSA)

· Синегнойная палочка

· Acinetobacter baumannii

· Stenotrophomonas maltophilia

· Ванкомицин-резистентные энтерококки

· Clostridium difficile

Эпидемиология

В США, по оценкам Центров контроля и профилактики заболеваний, около 1, 7 миллиона случаев внутрибольничных инфекций, вызванных всеми типами микроорганизмов, приводят или сопутствуют 99 000 смертям ежегодно.

В Европе, по результатам проведенных госпитальных исследований, смертность от внутрибольничных инфекций составляет 25 000 случаев в год, из них две трети вызваны грам-отрицательными микроорганизмами.

В России фиксируется около 30 тысяч случаев ежегодно, что свидетельствует о недостатках статистики

Внутрибольничными агентами могут вызываться тяжёлые пневмонии, инфекции мочевыводящих путей, крови и других органов.

Для ВБИ характерны свои особенности эпидемиологии, отличающие ее от классических инфекций. К ним относятся: своеобразие механизмов и факторов передачи, особенности течения эпидемиологического и инфекционного процессов, важная роль медицинского персонала ЛПУ в возникновении, поддержании и распространенииочагов ВБИ.

Многие типы инфекций трудно поддаются лечению по причине антибиотикорезистентности, которая постепенно начинает распространяться и среди грам-отрицательных бактерий, опасных для людей во внебольничной среде^].

Для возникновения ВБИ необходимо наличие следующих звеньев инфекционного процесса:

· источник инфекции (хозяин, пациент, медработник);

· возбудитель (микроорганизм);

· факторы передачи

· восприимчивый организм

Источниками в большинстве случаев служат:

· медицинский персонал;

· носители скрытых форм инфекции;

· больные с острой, стёртой или хронической формой инфекционных заболеваний, включая раневую инфекцию;

Посетители стационаров очень редко бывают источниками ВБИ^[1].

Факторами передачи чаще всего выступают пыль, вода, продукты питания, оборудование и медицинские инструменты.

Ведущими путями заражения в условиях ЛПУ являются контактно-бытовой, воздушно-капельный и воздушно-пылевой. Также возможен парентеральный путь (характерно для гепатитов B, С, D и др.)

Механизмы передачи инфекции: аэрозольный, фекально-оральный, контактный, гемоконтактный^].

Способствующие факторы

К факторам внутрибольничной среды, способствующим распространению ВБИ относятся:

· недооценка эпидемической опасности внутрибольничных источников инфекции и риска заражения при контакте с пациентом;

· перегрузка ЛПУ;

· наличие невыявленных носителей внутрибольничных штаммов среди медперсонала и пациентов;

· нарушение медперсоналом правил асептики и антисептики, личной гигиены;

· несвоевременное проведение текущей и заключительной дезинфекции, нарушение режима уборки;

· недостаточное оснащение ЛПУ дезинфекционными средствами;

· нарушение режима дезинфекции и стерилизации медицинских инструментов, аппаратов, приборов и т. д.;

· устаревшее оборудование;

· неудовлетворительное состояние пищеблоков, водоснабжения;

· отсутствие фильтрационной вентиляции.

Группа риска

Лица с повышенным риском заражения ВБИ:

1. Больные:

· без определенного места жительства, мигрирующее население,

· с длительными не долеченными хроническими соматическими и инфекционными заболеваниями,

· не имеющие возможность получать специальную медицинскую помощь;

2. Лица, которым:

· назначена терапия, подавляющая иммунную систему (облучение, иммунодепрессанты);

· проводятся обширные хирургические вмешательства с последующей кровезаместительной терапией, программный гемодиализ, инфузионная терапия;

3. Роженицы и новорождённые, особенно недоношенные и переношенные;

4. Дети с врождёнными аномалиями развития, родовой травмой;

5. Медперсонал ЛПУ.

Сепсис

...или: Заражение крови

Сепсис — это общее инфекционное заболевание, вызванное распространением бактериальной флоры из очага инфекции в кровяное русло.
Патогенные формы, попадая в организм человека, формируют первичный очаг. Дальнейшее развитие инфекционного процесса зависит от многих факторов: способности организма человека сопротивляться болезни, своевременной диагностики, адекватного лечения.

Симптомы сепсиса

· Признаки интоксикации проявляются:

o лихорадкой (чаще протекает на фоне чередования высоких скачков температуры тела до 39-40° С с периодами нормализации температуры. Постоянная лихорадка встречается реже);

o выраженным ознобом;

o периоды без температуры сменяются чувством жара и выраженным потоотделением.

· В самом начале процесса характерно возбуждение, которое в дальнейшем сменяется заторможенностью.

· Кожа бледно-желтушного оттенка.

· Частый пульс, до 120-150 ударов в минуту.

· Сниженное артериальное давление.

· Одышка на фоне отсутствия патологий органов дыхания.

· Кожная сыпь в виде точечных кровоизлияний и пузырьков, наполненных кровянистым содержимым (признак того, что развивается геморрагический синдром, сопровождающийся множественными кровоизлияниями).

· Кровоизлияния также возможны в склеры глаз (проявляется покраснением белка глаза, « кроличьи глаза») и слизистые ротовой полости.

Инкубационный период

От нескольких часов до нескольких дней.

Формы

В зависимости от места проникновения микроба и локализации первичного очага выделяют:

· чрескожный сепсис — развивается при попадании возбудителя в организм через поврежденные кожные покровы в виде мелких ранок, царапин, травм, также из фурункулов (болезненные, заполненные гноем полости в коже);

· акушерско-гинекологический сепсис — развивается в основном после родов и абортов (у женщин);

· в результате первичной инфекции в полости рта (например, при тяжелом течении стрептококковой, реже — стафилококковой ангины) развивается тонзиллярный сепсис;

· в результате инфекции зубов, протекающей с осложнением, может развиться одонтогенный сепсис;

· отогенный сепсис развивается в результате распространения инфекции из полости уха (например, как осложнение гнойного воспаления среднего уха — отит);

· криптогенный (также идиопатический, эссенциальный, генуинный) сепсис, то есть сепсис неизвестного происхождения: первичный очаг гнойного воспаления неизвестен.

По клиническому течению:

· острейший (молниеносный) сепсис. Данная форма сепсиса протекает бурно, с поражением целых систем органов и развитием полиорганной недостаточности (почечной, сердечной и др.). Летальный исход наступает в течение 1-2 дней;

· острый сепсис: продолжается до 4 недель;

· подострый сепсис: длится до 3-4 месяцев;

· рецидивирующий сепсис. Протекает в виде обострений, сменяющихся периодами нормального самочувствия и утихания клинических проявлений заболевания (то есть в виде обострений и ремиссий), длится до 6 месяцев;

· хрониосепсис характеризуется длительным течением — до года и более.

В зависимости от вида возбудителя:

· стафилококковый сепсис, который является самой распространенной формой сепсиса (на него приходится до половины всех случаев заболевания);

· пневмококковый сепсис;

· сальмонеллезный сепсис;

· анаэробный сепсис, который развивается при наличии анаэробных бактерий, обычно при тяжелых ранениях, на фоне больших кровопотерь. Также данная форма сепсиса является осложнением, характерным для абортов.

Причины

Сепсис развивается при наличии факторов, угнетающих иммунную систему человека:

· при наличии каких-либо заболеваний (заболеваний крови, онкологических, ВИЧ-инфекций, врожденных дефектов иммунной системы и др.);

· на фоне приема иммунодепрессивных препаратов (препаратов, подавляющих иммунную систему), противоопухолевых препаратов (цитостатиков), на фоне лучевой терапии;

· сепсис может развиться как осложнение при ранениях, ожогах на фоне присоединения бактериальной инфекции, вызванной синегнойной палочкой (Pseudomonas aeruginosa);

· сепсис может развиться как осложнение после абортов;

· сепсис достаточно часто развивается на фоне внутрибольничных инфекций (возбудители могут передаваться через перевязочный материал, медицинский инструмент (особенно опасны катетеры, установленные в сосуд на длительное время), а также через воздух: патогенные микроорганизмы обнаруживаются в 50-60% проб воздуха, забранного в обычных палатах).

Диагностика

Диагностика основывается на анализе симптомов (высокая температура, нарушение сердечного ритма (частота сердечных сокращений больше 90 ударов в минуту), частота дыхания (больше 20 в минуту), сниженное давление (верхнее — ниже 90 мм.рт.ст) и др.).

К лабораторным методам относятся:

· выделение возбудителя из крови (при этом забирают не менее двух проб крови из разных вен и проводят посев на питательную среду. Через 5-7 дней оценивается количество выросших колоний микроорганизмов, проводится идентификация возбудителя. Кроме того, в ходе посева определяется чувствительность возбудителя к антибиотикам (атибиотикограмма), что позволяет подобрать адекватную антибактериальную терапию;

· экспресс методы, основанные на принципе полимеразно-цепной реакции (метод выделения генетического материала возбудителя в крови). Данным методом в течение 1, 5 часов можно идентифицировать до 25 различных бактерий и грибов, которые в большинстве случаев являются причиной развития сепсиса;

· прокальцитониновый тест – определение уровня прокальцитонина (предшественника гормона щитовидной железы) в крови больного: его определение является характерным признаком развития сепсиса.

При постановке диагноза также учитываются изменения в общем и биохимическом анализе крови:

· прогрессирующая анемия (малокровие);

· повышенное содержание лейкоцитов;

· пониженное содержание тромбоцитов (тромбоцитопения);

· повышенное содержание билирубина и остаточного азота в крови;

· сниженое содержание кальция и хлоридов в крови и др.

В моче обнаруживаются белок, лейкоциты, эритроциты, содержание мочевины и мочевой кислоты повышено.

Лечение сепсиса

· Антибактериальная терапия зависит от типа установленного или предполагаемого возбудителя и его выявленной чувствительности к антибиотикам.

· Назначают дезинтоксикационную терапию в виде внутривенных инфузий (вливаний) водно-солевых растворов и растворов глюкозы.

· Противовоспалительные терапия.

· В некоторых случаях переливают донорскую плазму и тромбоцитарную массу.

Осложнения и последствия

· Возможны инфаркты легкого, абсцесс (образование полости, наполненной гнойным содержимым) и гангрена (омертвление ткани органа) легкого, гнойный плеврит.

· Распространение инфекции в почки может сопровождаться циститами (воспаление мочевого пузыря), паранефритами (воспаление почек).

· При поражении головного мозга наблюдаются абсцессы (образование полостей с гнойным содержимым).

· При поражении мозговых оболочек развивается гнойный менингит.

· Развитие сердечной недостаточности.

· Развитие септического шока, сопровождающегося нарушением функции легких, печени и почек.

· ДВС-синдром (внутрисосудистое свертывание крови) с развитием обширных внутренних кровотечений и полиорганной недостаточности.

· Риск летального исхода.

Профилактика сепсиса

Профилактика сепсиса основана на:

· своевременном лечении местных гнойных процессов;

· соблюдении асептических условий при проведении операций и других медицинских манипуляций;

· сокращении времени пребывания катетеров в венах и мочевом пузыре;

· грамотном назначении антибиотиков (необходимо помнить, что патогенные микроорганизмы способны развивать устойчивость к лекарственным средствам. Антибиотики должны назначаться только специалистом после постановки точного диагноза);

· соблюдении правил гигиены как пациентами, так и работниками лечебных стационарных учреждений (тщательная обработка инструментария, помещений, своевременная изоляция инфекционных больных);

· иммунизация лиц группы риска (например, людей с патологиями селезенки, иммунодефицитами, хроническими заболеваниями легких и сердца) от пневмококковой инфекции (причина воспаления легких, воспаления мозговых оболочек).

Дополнительно

Риск развития сепсиса также зависит от особенностей возбудителя и способа заражения. Так, например, при эпидемических вспышках пищевого сальмонеллеза (кишечная инфекция, вызванная бактерией сальмонеллой) сепсис разовьется лишь у меньшинства заболевших. В случаях с внутрибольничными инфекциями (например, при стафилококковой инфекции) риск развития сепсиса у ослабленных лиц в стационаре достаточно высок.

Сепсис нельзя путать с таким понятием, как бактеремия (кратковременное или длительное присутствие возбудителя в кровеносном русле). Бактеремия может сопровождать даже легкие формы таких заболеваний, как ангина, пневмония (воспаление легких). На фоне нормального иммунитета включаются защитные реакции, которые направлены на санацию (очищение) крови от возбудителя. Основным отличием сепсиса от бактеремии является образование вторичных инфекционных процессов в органах, которые поражает возбудитель, циркулирующий по кровеносному руслу.

Метастазы могут представлять собой:

· гнойные поражения различных органов в виде гнойного менингита (поражения оболочки спинного и головного мозга), эмпиемы (скопления гноя внутри полого органа или полостях тела) и т.д;

· очаги кровоизлияний в различных органах и тканях. Кровоизлияния также являются следствием тяжелого отравления организма продуктами жизнедеятельности микроорганизма – токсинами.

Локализация вторичных очагов при септическом процессе зависит от:

· возбудителя. Так, например, при стрептококковом сепсисе часто поражаются клапаны сердца и почки, а при гонококковом — опорно-двигательный аппарат (суставы, сухожилия);

· локализации первичного очага. Например, при первичной инфекции клапанов левого отдела сердца часто вторичные процессы развиваются в мозге и почках; при локализации очагов в других отделах сердца развиваются мелкие инфаркты и вторичные очаги в легких.

Ряд зарубежных фирм выпускают специальные питательные среды для исследования крови. В большинстве случаев они аналогичны “двухфазной среде” и “среде для контроля стерильности”. В качестве примера можно привести среды Haemoline Performance фирмы bioMеrieux. В набор для посева крови, выпускаемый указанной фирмой входят 2 среды. Среда Haemoline Performance diphasique - отличается от отечественной прописи двухфазной среды наличием в ее составе факторов роста: факторы X и V - необходимые для H.influenzae, Cardiobacterium, Actinobacillus и витамин В₆ - стимулирующий рост стрептококков. Кроме того пространство над поверхностью питательной среды во флаконе заполнено углекислым газом. Среда Haemoline Performance anaerobie предназначена для выделения анаэробов и содержит соответствующий набор факторов роста (аргинин, пируват, витамин К и др.), пространство над средой также заполнено углекислым газом.

В зарубежной практике исследование крови на гемокультуру является одним из наиболее массовых видов лабораторных исследований. В связи с этим там уделяется большое внимание созданию автоматизированных систем для индикации микробного роста в посевах крови. Их применение позволяет ускорить получение результата и, тем самым, способствует более раннему назначению адекватной терапии. Приборы для этой цели выпускаются многими фирмами. Они отличаются друг от друга производительностью, уровнем автоматизации, но главное - способами детекции микробного роста. Детекция микробного роста может осуществляться по продукции СО₂, изменению рН, электропроводности, окислительно-восстановительного потенциала или мутности питательной среды. В некоторых случаях одновременно учитывается несколько показателей. Одним из наиболее популярных в Европе автоматизированных бактериологических анализаторов для детекции культур крови является прибор VITAL, предлагаемый фирмой bioMerieux. Этот прибор позволяет одновременно исследовать до 1200 образцов. Проба крови, объемом 5-10 мл засевается во флакон со специальной питательной средой, обеспечивающий рост как аэробных, так и анаэробных микроорганизмов, включая медленно растущие виды со сложными пищевыми потребностями^[1]. Флакон устанавливается в блок детекции прибора и инкубируется при осторожном встряхивании. Каждые 15 минут с помощью специальной флюоресцентной технологии прибор осуществляет детекцию микробного роста по продукции СО₂, изменению рН и модификации окислительно-восстановительного потенциала среды. Информация о получении положительного сигнала отражается звуковым сигналом, выводится на монитор компъютера и дублируется внутри модуля детекции, рядом с нужным флаконом. Время детекции от 9 до 120 часов (для медленно растущих видов).

Обнаружение в крови эндотоксина представляется в настоящее время не менее, а в отдельных случаях даже более ценным диагностическим пособием, чем классическое бактериологическое исследование. Для этой цели используют два основных методических подхода:

1. Люмулюс (ЛАЛ) тест. Тест основан на способности лизата амебоцитов краба Lumulus polyphemus образовывать гель в присутствии эндотоксина [80]. Чувствительность теста достигает 0, 002 мг/л, что сопоставимо с чувствительностью физических методов анализа и достаточно для обнаружения эндотоксина в клинических образцах. К сожалению, люмулин, основной реагент для постановки теста, мало доступен в нашей стране.

2. РИФ. С помощью РИФ можно обнаружить эндотоксин, адсорбированный на поверхности микрофагов. Для этого используют сыворотки к общему антигену грамотрицательных бактерий (ядро липида А). Препараты для этих целей серийно не выпускаются.

Отсутствие возможности определения эндотоксина в условиях практических лабораторий вызывает сожаление, так как количество эндотоксина в плазме имеет важное прогностическое значение.

⇐ Предыдущая 1 2 3 45