Метод получения плазмы и сыворотки крови.

Метод получения плазмы и сыворотки крови.

ПОЛУЧЕНИЕ ПЛАЗМЫ: Кровь кролика собирают в стеклянный стаканчик с 3, 8р-ом цитрата натрия (соотношение консерванта и крови 1: 9). Кровь разливают в центрифужные пробирки уравновешивая их. Центрифугируют при 1000 об/мин 20мин. Плазму переносят в пенициллиновые флаконы и используют для дальнейших исследований. ПОЛУЧЕНИЕ СЫВОРОТКИ: Кровь кролика собирают в несколько центрифужных пробирок и перемешивают пастеровской пипеткой...Процедуру периодически повторяют. Ставят пробирки в холодильник на 1 час при температуре 4 градуса. уравновешивают пробирки и цетрифугируют 20мин при 1000 об/мин. Сыворотку крови переносят в пенициллиновые флаконы.22: 48: 38

Методы подсчета эритроцитов с использованием счетной камеры Горяева.

Берут заполненный меланжер для эритроцитов, зажав его концы 3 и 1пальцами, в течение одной минуты встряхивают. После тщательного перемешивания, выпустив предварительно наружу 1-2капли, наносят небольшую капельку на сетку камеры, предварительно путем притирания плотно закрытую покровным стеклышком. Излишки р-а при этом стекают в желобки. Заполнив камеры, ставят ее под микроскоп. Если фор. эл-ты расположены равномерно, приступает к подсчету эритроцитов. Чтобы получить данные необходимо подсчитать число э. в пяти больших квадратах, расположенных в разных местах сетки, например: по диагонали.

Методы подсчета лейкоцитов с использованием камеры Горяева.

Берут заполненный меланжер для лейкоцитов, зажав его концы 3и 1 пальцами, в течение одной мин встряхивают его, после перемешивания, выпустив предварительно наружу 1-2 капли крови наносят небольшую капельку на сетку камеры, предварительно путем притирания плотно закрытую покровным стеклышком. Излишки р-а стекают в желобки. Для получения результатов подсчет произв в 25 больших квадратах, что составляет 400мал.квадратиков.Формула для вычисления кол-ва лейкоцитов в 1мл крови. X=B*400*20 и это все разделить на 400, где x-искомое число лейкоцитов в 1мл крови, в число лейк в 20больших квадратах.

Определение кол-ва гемоглобина в крови методом Сали.

В среднюю пробирку наливают 0, 1н р-р хлористо-водородной кислоты до метки. Пипеткой берут 20мм в кубе крови из пальца сразу выдувают кровь на дно пробирки, так, чтобы верхний слой к-ты оставался неокрашенным. Не вынимая пипетку споласкивают ее кислотой. После содержимое пробирки перемешивают ударяя пальцем по дну пробирки. Затем ставят в штатив на 5-10 мин. За это время гемоглобин полностью превращается в солянокислый гематин. Затем в пробирку добавляем по каплям дистил. воду, перемешивая р-р стеклянной палочкой, до тех пор пока цвет р-а не будет одинаков цветом стандарта. цифра, стоящая на уровне полученного р-а показывает содержание гемоглобина в испытуемой крови.

Определение кол-ва гемоглобина в крови, с помощью фотокалориметра.

Для опред. сод. гемоглобина кровь берут обычным способом из пальца и смешивают ее в пробирки с 4 мл р-а I. В эту пробирку добавляют 0, 1 мл р-а III. Смесь перелив в кювету. Через 1-2 мин происходит гемолиз. Гальванометр соед со стабилизатором, а его вкл в сеть. Отмечают положение стрелки гольванометра, которое показывают отн.сод. гемоглобина в крови в %.на основании полученных данных, рассчитывают абсол. сод. гемоглобина в крови.

Определение гематокритного числа.

Кровь для анализа берут из пальца руки чел или проделывают работу с кровью кролика. Гематокритные капилляры промыв р-Ом цитрата натрия и заполн кровью. Цетрифугируют 30мин при3000 об/мин. При этом под действием центробежной силы фор. эл-ты смещаются к кроям капилляров. Ближе к оси центрифуги остается столбик плазмы.

Определение времени свертыв. крови.

Кровь для анализа берут из пальца руки чел. Набирают в капилляр 25-30 мл крови. Отмечают по секундомеру время. Держа капилляр двумя пальцами, покачивает его на 30-45 градусов в обе стороны. Свободное смещение крови показыв, что свертывание еще не наступило. Полное свертывание крови соответствует моменту полной остановки движения крови.

Определение цветового показателя крови.

Определив в крови содержание гемоглобина и кол-во э.высчитывают цветовой пок по формуле. ЦП= гемоглобин, гр/л разделить на число э.в одном микролитре крови ( первые три цифры) это все * на 3. В одном мкл крови в норме сод.166* 10 в -6 гемоглобина. Следов, содержание гемоглобина в одном эритроците = 33*10 в -12 гр или 33пг. ЦП это соотн между кол.гемоглобина в крови и числом эритроцитов. ЦП позволяет оценить степень насыщения эритроцитов гемоглобина. При пат.состояниях ЦП может быть больше 1 или меньше 1.

9) приготовление мазка крови.
Взяв предметное стекло прикасаются его поверхностью капли крови. Предметное стекло держит в левой руке, а правой рукой представл шлифовальное стекло узким краем к стеклу с кровью слева от капли под углом 45 градусов и продвигают его вправо до соприкосновения его с кровью. Выжидают пока кровь расплывется по всему ребру шлифовального стекла и затем легким быстрым движением ведут его справа налево до тех пор пока не будет исчерпана вся капля. Капля крови должна быть небольшой.мазок должен помещаться на стекле, не доходя одного см до его края. Хорошо сделанный мазок тонок, имеет желтоватый цвет

10) определение лейкоцитарной формулы.
Процентное соотношение разл видов лейкоцитов, выявленных в мазке крови, опр-ся как лейкоцитарная формула.
Общее кол-во в 1 л. крови: 4-9 умножить на 10 в девятой.
Эозинофилы: 0, 5-5.
Базофилы: 0-1.
Нейтрофилы: юные - 0-1; палочкаяд.-1-6; сегментояд.- 47-72.
Моноциты 3-11.
Лимфоциты - 19-37

Определение СОЭ.

Капилляр промывают 5%р-ром цитрата натрия. Затем набирают 50мл. цитрат натрия и выдувают его на часовое стекло. В этот же капилляр двукратно набирают кровь из пальца чел. Обе порции крови выпускают на часовое стекло, смешивая с имеющимся там цитратом натрия. Полученную смесь набирают в капилляр и ставят в штатив. Через час смотрим высоту в мм образовавшейся плазмы в капилляре. Его величина и явл. мерой СОЭ. В норме СОЭ сост. от 4 до 10 мм/ч

12) метод определения группы крови с исп гемаглютин.сывороток.

Предметное стекло помещают на белую бумагу и наносят по капле станд.сыворотки I, II, III групп, сод.соотв.агглютинины.
I-альфа и бетта; II-бетта и III-альфа. Переносим небольш.кол.крови в каплю сыворотки 1группы. Затем, такое же кол.крови переносят в сыворотку 2 группы. 3-юю каплю переносят в сыворотку 3-ей группы. Каждый раз тщательно размешиваем кровь в капле сыворотки пока смесь не примет равномерно розового цвета. Реакция агглютинации наступает через 1-5 мин. При наличии агглютинации капля становится прозрачной, а эритроциты склеиваются.
1. Отсутствие агглютинации говорит об отсутствие агглютиногенов, что явл св-Ом эритроцитов 1 группы.
2. Если агглют.произошла с сыв. первой и третьей групп, то э.исследуемой крови, содержат А-агглютиноген, следов эта кровь второй группы.
3. Если агглют.проищошла с сыв. первой и второй групп это говорит о наличии В-агглютиногена в эритроцитах-3 группа крови.
4. При наличии агглютинации сыв.второй и третьей групп эритроциты содержат А и В агглютиногены-4 группа крови.

13. Методика определения резус-антигена D универсальным реагентом анти- D.

На дно пробирки вносят 1 каплю стандартного реагента антнрезус;

добавляют каплю исследуемой крови (или эритроцитов);

содержимое пробирки перемешивают встряхиванием;

медленно поворачивают пробирку, наклоняя ее почти до горизонтали таким образом, чтобы содержимое растекалось по стенкам. Такое распределение крови по стенкам пробирки делает реакцию более выраженной; агглютинация наступает в течение первой минуты, но для образования устойчивого комплекса антиген-антитело и четко выраженной агглютинации, а также ввиду возможности замедленной реакции при наличии антигена D, контакт эритроцитов с реагентом при перевертывании следует проводить не менее 3 мин;

для исключении неспецифической агрегации эритроцитов в пробирку добавляют 2-3 мл физиологического раствора и перемешивают, не взбалтывая, путем 2-3 -кратного перевертывания пробирки;

оценку производят визуально.

14) анализ ПСС. Опыт Станиуса.
Обездвиж.ляг избегая сил.кровотеч.обнаж.сердце и перевяз.первой лигатурой обе дуги аорты после чего перерез.их выше места перевязки. Подсчит.число сокращ.в одну мин. Запрокид.сердце и наход.границу синуса на его дорс.стороне. Пров.лигат.подвеноз.синус и на границе между син.и предс.делаем перевязку. ( первая лиг.станиуса). Частота сокращ.венозн.синуса не меняется, а предс и желуд.останавл. Подсчит.число сокращ.венозного синуса. Если после первой лигатуры сокращ.предс и жел.не восстан.самост., то дел 2 перевяз. ( 2 лиг.станиуса) отдел предс от жел. Теперь, буд сокр веноз синус и жел. Частота сокращ его будет более редкой по отн к перв. Затем деляют 3 перевязку( 3 лиг.станиуса) отдел яя от всего сердца нижнюю треть жел. ( верхушку сердца), кот перест.сокращ. Если отрезать верхушку сердца и поместить в каплю р-а Рингера, то нанося ей мех.раздраж.( укол иглой) можно наблюд ее способность сокращ.

Анализ ЭКГ.

Анализ сердечного ритма и проводимости:

1) оценка регулярности сердечных сокращений;

2) подсчет ЧСС;

3) определение источника возбуждения;

4) оценка функции проводимости.

II. Определение поворотов сердца вокруг переднезадней, продольной и поперечной осей:

1) определение положения электрической оси сердца во фронтальной плоскости;

2) определение поворотов сердца вокруг продольной оси;

3) определение поворотов сердца вокруг поперечной оси.

III. Анализ предсердного зубца Р.

IV. Анализ желудочкового комплекса QRST:

1) анализ комплекса QRS;

2) анализ сегмента RS–Т;

3) анализ зубца Т;

4) анализ интервала Q–Т.

V. Электрокардиографическое заключение.

Анализ регулярности сердечных сокращений

Регулярность сердечных сокращений оценивается при сравнении продолжительности интервалов R–R между последовательно зарегистрированными сердечными циклами. Интервал R–R обычно измеряется между вершинами зубцов R (или S).

Подсчет ЧСС.

При правильном ритме ЧСС определяют по формуле:

ЧСС=60/R–R

где 60 — число секунд в минуте, R–R — продолжительность интервала, выраженная в секундах.

Рефлекс Гольца.

Это уменьшение частоты сердечных сокращений или даже полная остановка сердца при раздражении механорецепторов органов брюшной полости или брюшины.

Рефлекс Ашнера-Даниини.

Глазосердечный рефлекс— уменьшение пульса на 4-8 сердечных сокращений в минуту при надавливании на глазные яблоки. Рефлекс обусловлен связями тройничного и блуждающего нервов парасимпатической нервной системы. Афферентные пути идут по глазничной ветви тройничного нерва, хотя обнаружены пути и по верхне- и нижнечелюстной ветвям.[1] Эти афферентные пути образуют синаптические связи с висцеральным двигательным ядром блуждающего нерва, расположенного в ретикулярной формации ствола мозга. Эфферентные пути в составе блуждающего нерва идут от сердечно-сосудистого центра продолговатого мозга к сердцу. Повышенная стимуляция этого центра приводит к подавлению функции синусового узла.[2] Этот рефлекс особенно выражен у новорождённых и детей. Его следует учитывать во время офтальмохирургической операции у детей, особенно при коррекции косоглазия.[3] Брадикардия, несинусовый ритм, асистолия и очень редко смерть[4] могут быть вызваны этим рефлексом.

Пневмотахометрия.

Это метод функционального исследования лёгких с оценкой проходимости бронхов по величине объёмной мощности вдоха и выдоха с помощью пневмотахометра.

Исследования пневмотахометрии дают возможность диагностировать наличие скрытых (ранних) нарушений бронхиальной проходимости, о чём свидетельствует снижение показателей пневмотахометрии по сравнению с нормой на 15%. Регистрация параметров воздушной струи вдыхаемого и выдыхаемого воздуха на протяжении дыхательного цикла проводится с помощью пневмотахографа.Пневмотахометрию используют также для оценки динамики течения бронхолёгочных заболеваний и более точного суждения об эффективности лечения.

Определение остроты зрения.

Для исследования остроты зрения используют специальные таблицы, содержащие буквы, цифры или значки различной величины, а для детей - рисунки. Их называют оптотипами. таблица имеет 12 рядов букв или знаков, величина которых постепенно уменьшается от верхнего ряда к нижнему. В построении таблицы использована десятичная система: при прочтении каждой последующей строчки острота зрения увеличивается на 0.1 Справа от каждой строчки указана острота зрения, которой соответствует распознавание букв в этом ряду. Слева против каждой строки указано то расстояние, с которого детали этих букв будут видны под углом зрения 1’, а вся буква- под углом зрения 5’. Так, при нормальном зрении, принятом за 1.0, верхняя строка будет видна с расстояния 50 м, десятая- с расстояния 5 м.

метод получения плазмы и сыворотки крови.

12 Следующая ⇒