Определение групп крови с помощью цоликлонов

⇐ ПредыдущаяСтр 3 из 9Следующая ⇒

В последнее время определение групп крови человека системы АВО проводят с помощью цоликлонов Анти-А и Анти-В (антитела моноклональные Анти-А и Анти-В), которые применяют или взамен или параллельно с поликлональными иммунными сыворотками. Моноклональные Анти-А и Анти-В антитела продуцируются двумя мышиными гибридомами и принадлежат к иммуноглобулинам класса М. Цоликлоны изготавливаются из асцитной жидкости мышей-носителей анти-А и анти-В гибридом. Технология изготовления реагента исключает возможность его контаминации патогенными для человека вирусами.

Проведение работы. Нанесите на пластину индивидуальными пипетками цоликлоны Анти-А и Анти-В по одной большой капле. Рядом с каплями антител нанесите по одной маленькой капле исследуемой крови. Наблюдайте за ходом реакции с цоликлонами визуально при лёгком покачивании пластины в течение 3 минут. Агглютинация эритроцитов с цоликлонами обычно наступает в первые 3-5 сек, но наблюдение следует вести 3 мин ввиду более позднего появления агглютинации с эритроцитами, содержащими слабые разновидности антигенов А или В. Положительный результат выражается в агглютинации эритроцитов. При отрицательной реакции капля остаётся равномерно окрашенной в красный цвет.

Знаком плюс (+) обозначено наличие агглютинации, знаком минус (-) - отсутствие агглютинации.

Определение резус-фактора

1. На пластинку со смачиваемой поверхностью нанесите большую каплю (около 0, 1 мл.) реагента. Рядом поместите маленькую каплю 0, 01-0, 05 мл. исследуемой крови и смешайте кровь с реагентом.

2. Реакция агглютинации начинает развиваться через 10-15 с., четко выраженная агглютинация наступает через 30-60 с.

3. По наличию или отсутствию агглютинации сделать заключение о наличии или отсутствии в эритроцитах исследуемой крови резус-агглютиногена.

Цоликлон Анти-Д предназначен для выявления Д антигена системы резус в эритроцитах человека.

Пластинку после смешения реагента с кровью рекомендуется не сразу, а через 20-30 с., что позволяет за это время развиться более полной крупной лепестковой агглютинации.

Определение скорости оседания эритроцитов

1. Рассмотреть капилляр Панченкова (рис. 3), разобрать все его цифры и метки (О - на уровне 100 мм; Р- на уровне 50 мм).

2. Налить немного цитрата на часовое стекло или тигелек, промыть им капилляр.

3. Удалить продуванием образовавшиеся в капилляре пузырьки, чтобы предотвратить возникновение воздушных пробок при последующем наборе в капилляр.

4. Отметить этим же капилляром 50 мм раствора цитрата натрия, набрав его до метки Р, и выпустить на чистое часовое стекло.

5. Проколоть палец и, сняв первую каплю, приступить к взятию крови.

6. Быстро набрать 100 мм крови без пузырьков (до метки К). Растекающиеся капли стереть влажной ваткой, смоченной раствором цитрата.

7. Осторожно, не допуская пузырей, выдуть всю порцию крови в отмеренный раствор цитрата и тщательно перемешать концом капилляра.

8. Вновь промыть капилляр раствором цитрата, еще раз набрать в него кровь до метки К и осторожно выдуть на то же стекло.

9. Все хорошо перемешать и затем набрать часть получившейся смеси (без пузырьков воздуха) в капилляр до метки К. Разведение 1: 4.

10. Кровь набирать самотеком, для чего капилляр наклонить несколько ниже горизонтального уровня по отношению к часовому стеклу с разведенной кровью

11. Зажать указательным пальцем правой руки верхний конец капилляра, повернуть его вертикально и вставить в штатив. Палец можно отпустить только после того, как вы твердо убедились в том, что нижний конец капилляра прижат к резинке на стойке прибора Панченкова.

12. Засечь время установки капилляра в штатив. Штатив с места не сдвигать.

13. Судить о величине СОЭ по высоте столбика плазмы (мм), освободившейся от эритроцитов за один час стояния крови (прозрачный слой).

Определение СОЭ (скорость оседания эритроцитов): кровь и цитрат натрия (антикоагулянт) в соотношении 4: 1 – в стеклянном капилляре оставляют на 1 час в строго вертикальном положении. Эритроциты оседают и в верхней части капилляра появляется столбик светлой плазмы крови. СОЭ в норме от 2 до 15 мм/час. СОЭ зависит от состава плазмы и свойств эритроцитов. Например, глобулины и фибриноген (крупномолекулярные белки) при хроническом воспалении, беременности способствуют образованию «монетных столбиков» и увеличивают СОЭ; альбумины (низкомолекулярные белки) препятствуют образованию «монетных столбиков» и уменьшают СОЭ.

Определение времени свёртывания крови по Сухареву и Альтгаузену

Методика по Сухареву

1. Проколоть палец, снять первую каплю крови сухой ваткой.

2. Погрузить конец капилляра в каплю крови.

3. Слегка опустив наружный конец капилляра, набрать 20-30 мм крови и перевести этот столбик крови на середину.

4. Держа капилляр двумя пальцами, произвести плавное покачивание его в обе стороны с амплитудой 40-45⁰.

Свободное смещение столбика крови говорит о том, что свертывание еще не наступило. Замедленное движение крови при наклоне капилляра характеризует начало свертывания, при этом на внутренней стенке капилляра появляются небольшие сгустки.

Момент полной остановки движения столбика крови в капилляре соответствует наступлению окончательного свертывания крови. По предлагаемой методике скорость свертывания крови в норме: начало свертывания происходи через 30 с – 2 мин., полное свертывание – через 3-5 мин.

Методика Альтгаузена

1. Проколоть палец так, чтобы на поверхность кожи выступила капля крови.

2. Стеклянной палочкой перенести каплю на парафинированное стекло.

3. Через каждые 30 с, погружая стеклянный крючок в каплю крови, следить за образованием нитей фибрина.

4. Интервал времени между нанесением капли крови на стекло и появлением фибриновых нитей принимать за время свертывания.

5. Необходимо учесть, что по данной методике время свертывания в норме составляет около 3-5 мин.

⇐ Предыдущая 1 234 5 6 7 8 9 Следующая ⇒