Специальные типы микроскопии.

Стр 1 из 17Следующая ⇒

Темнопольная. Используют специальный конденсор, выделяющий контрастирующие структуры неокрашенного материала. Темнопольная микроскопия позволяет наблюдать живые объекты. Наблюдаемый объект выглядит как освещенный на темном поле. При этом лучи от осветителя падают на объект сбоку, а в линзе микроскопа поступают только рассеянные лучи.

Фазово-контрастная микроскопия позволяет изучать живые и неокрашенные объекты. При прохождении света через окрашенные объекты изменяется амплитуда световой волны, а при прохождении света через неокрашенные – фаза световой волны, что и используют для получения высококонтрастного изображения в фазово-контрастной и интерференционной микроскопии.

Поляризационная микроскопия – формирование изображения неокрашенных анизотропных структур (например, коллагеновые волокна и миофибриллы).

Интерференционная микроскопия объединяет принципы фазово-контрастной и поляризационной микроскопии и применяется для получения контрастного изображения неокрашенных объектов.

Люминесцентная микроскопия применяется для наблюдения флюоресцирующих (люминесцирующих) объектов.

Электронная микроскопия. С помощью электронного микроскопа можно изучить тончайшее строение ультрамикроструктур тканей и клеток. Главным отличием электронного микроскопа от светового микроскопа является то, что в нем вместо света применяется поток электронов, а обычные стеклянные линзы заменены электромагнитными полями. Для исследования в электронном микроскопе применяют ультратонкие срезы с помощью ультрамикротома. Обработка кусочков органов и тканей размерами 1× 1 мм для электронной микроскопии принципиально сходна. Особенностью является то, что фиксация производится осмиевой кислотой, солями марганца при определенной Рн среды, а заливка осуществляется в органические смолы.

Гистохимический метод. В основе гистохимического метода лежит применение химических реакций для выявления распределения химического вещества в структурах клеток, тканей и органов. Современные гистохимические методы позволяют выявлять в структурах аминокислоты, белки, нуклеиновые кислоты, углеводы, липиды, активность ферментов.

Метод авторадиографии позволяет наиболее полно изучить обмен веществ в структурах клетки. В основе метода лежит использование радиоактивных элементов или меченых ими соединений. В организм животных вводят один из радиоактивных элементов и через определенные промежутки времени определяют его содержание в тканях и органах. Выявление радиоактивных элементов в гистологических срезах производят с помощью фотоэмульсии, которую прикладывают к препарату и затем проявляют. В участках препарата, где содержится радиоактивный элемент, имеет место радиоактивное излучение. Под влиянием этого излучения происходит восстановление бесцветного бромистого серебра в черное металлическое серебро. В фотоэмульсии на соответствующих участках наблюдается появление хорошо видимых черных зерен серебра. С помощью этого метода можно определить скорость включения аминокислот в белки, образование нуклеиновых кислот, обмен йода в клетках щитовидной железы и т.д.

Культура тканей. Изучение культуры тканей может производиться как вне организма, так и в составе организма. Метод культуры тканей вне организма заключается в том, что клетки и ткани выращиваются вне организма, при этом клетки способны к движению, размножению, дифференцировке.

Правила работы с микроскопом:

1.Установить микроскоп у края стола перед собой.

2. Установить (до защелкивания) объектив малого увеличения и осветить поле зрения вогнутой стороной зеркала.

3. Поместить препарат на предметный столик обязательно вверх покровным стеклом и установить фокус вращением макроскопического винта.

4. Передвигая препарат рукой, рассмотреть его при малом увеличении. Винты столика при этом не используются.

5. Установить нужное место препарата в центре поля зрения и лишь после этого перевести микроскоп на большое увеличение. Найти изображение объекта осторожным вращением (не более 1 оборота! ) макрометрического винта. Вращение микрометрического винта необходимо для рассмотрения препарата на всю его глубину. Винты столика служат только для перемещения препарата в пределах одного поля зрения. Для улучшения освещенности и контрастности препарата допускается перемещение конденсора (винт справа ниже столика).

6. Закончив работу, перевести микроскоп на малое увеличение. Наибольшее увеличение дают иммерсионные объективы – 90 х и 100 х. Их фронтальные линзы погружают в среду (иммерсионное масло), которая препятствует рассеиванию лучей, что улучшает качество изображения. При работе с иммерсионным объективом допустим лишь незначительный поворот микрометрического винта, так как расстояние между покровным стеклом и фронтальной линзой объектива очень мало.

Общее увеличение микроскопа равно произведению увеличений объектива и окуляра.

Контрольные вопросы:

1. Этапы приготовления гистологического препарата.

2. Цель и принципы фиксации.

3. Цель и способы заливки. Изготовление срезов.

4. Методы и принципы окрашивания препаратов. Основные и кислые красители.

5. Понятие об оксифилии и базофилии.

6. Методы микроскопирования.

7. Методы, дающие количественную и функциональную оценку структур препарата.

8. Правила работы с микроскопом.

Практическое занятие.

Тема: «Органоиды общего, специального назначения и включения».

1. Актуальность темы. Клетка как структурная единица организма несет значительную функциональную нагрузку. Рост организма, его строение, функционирование и смерть есть выражение кооперативной работы клеток нашего организма. Выявление структурных проявлений в функциональной активности клеток.

2. Цель занятия. Изучить микро- и ультрамикроскопическое строение и функциональное значение органелл общего назначения, специального назначения и включения.

Для достижения конечной цели студент должен знать:

а) основные положения современного учения о клетке как элементарной живой системе, основы формообразования всего органического мира;

б) строение основных структурных компонентов клетки (ядро, цитоплазма, цитолемма) и мелких структурных компонентов (органелл и включений).

Должен иметь:

а) понятие о секреторном цикле клетки; б) понятие о жизненном цикле клетки (рост, дифференцировка, старение и смерть клетки); в) понятие о регенерации, митотическом цикле и его фазах; г) понятие о методах исследования живых и фиксированных клеток.

3. Ориентировочное время для самоподготовки – 135 мин.

4. Место проведения самоподготовки читальный зал библиотеки, кабинет самоподготовки кафедры.

5. Оснащение: микроскопы, микропрепараты, таблицы, электронные микрофотографии, методические пособия, атласы.

Контрольные вопросы:

1. Расскажите историю создания и основные положения клеточной теории.

2. Дайте определение клетки, какой формы могут быть клетки.

3. Каковы строение, химический состав и физико-химические свойства биологической мембраны и плазмолеммы?

4. Какие способы транспорта веществ через плазмолемму вам известны? Что такое фагоцитоз и пиноцитоз?

5. Перечислите неклеточные структуры. Расскажите об их строении. Приведите примеры.

6. Структуры поверхности клеток. Микроворсинки или щеточная каемка как органоиды, участвующие в процессе всасывания питательных веществ клетками. Строение и значение контактов между клетками.

7. Химический состав, основные физико-химические и биологические свойства цитоплазмы.

8. Строение интерфазного ядра. Значение ядра в жизнедеятельности клетки.

9. Классификация, строение и функциональная характеристика органелл общего и специального назначения.

10. Дайте определение включений.

11. Включения клетки: классификация, гистохимическая и морфологическая характеристика.

12. Функциональные особенности включений.

Учебные микропрепараты.

1. Комплекс Гольджи – нервные клетки спинномозгового узла. Импрегнация солянокислым серебром.

При большом увеличении найти крупные округлой формы нервные клетки (сконцентрированные по периферии среза) с центрально расположенным ядром. Комплекс Гольджи выявляется в виде сети или зерен, расположенные в цитоплазме, концентрируясь вокруг ядра.

Зарисовать 3-5 клеток и обозначить: ядро, клеточная оболочка, комплекс Гольджи в цитоплазме.

2. Митохондрии в эпителии кишки. Окраска по Альтману.

При малом увеличении найти срез эпителиального слоя кишки.

При большом увеличении микроскопа рассмотреть высокие призматической формы эпителиальные клетки. В базальной части этих клеток располагаются овальной формы ядра со слабой окрашиваемостью. Границы клеток также трудно различимы. В цитоплазме выявляются скопления митохондрий в виде зерен и палочек, разбросанных по всей цитоплазме и с некоторой концентрацией в апикальной части клетки.

Зарисовать 3-5 клеток и обозначить на рисунке: ядро эпителиальной клетки, оболочка клетки, цитоплазма клетки, митохондрии.

3. Жировые включения в клетках печени. Окраска осмиевая кислота + сафранин.

При малом увеличении микроскопа найти срез органа, импрегнированный осмием. Установить срез в центре поля зрения.

При большом увеличении рассмотреть клетки полигональной формы с розовыми ядрами и четкими темными границами. В цитоплазме хорошо видны жировые включения в виде черных капель различной величины.

Зарисовать 3-5 клеток и обозначить: цитоплазма, ядро и жировые включения.

4. Включения гликогена в клетках печени. Окраска ШИК-реакция.

При большом увеличении микроскопа рассмотреть в цитоплазме клеток печени гранулы гликогена, окрашенные в малиновый цвет.

Зарисовать и обозначить: цитоплазма, ядро, гранулы гликогена.

12 3 4 5 6 7 8 9 10 Следующая ⇒