|
Архитектура Аудит Военная наука Иностранные языки Медицина Металлургия Метрология Образование Политология Производство Психология Стандартизация Технологии |
|
|
Архитектура Аудит Военная наука Иностранные языки Медицина Металлургия Метрология Образование Политология Производство Психология Стандартизация Технологии |
Газовыми и другими нагревательными приборамиСтр 1 из 7Следующая ⇒
Ф.и.о. Учебный год Гродно 2008 УДК 577.1 ББК 28.902 Л84
Рекомендовано Центральным научно-методическим советом ГрГМУ (протокол № 6 от 01.07.2004 г.)
Авторы: зав. каф. биохимии проф. В.В. Лелевич, доц. И.О. Леднева, асс. М.Н. Курбат, доц. Н.Э.Петушок, доц. А.А. Масловская.
Рецензент: зав. каф. общей и биоорганической химии УО «ГрГМУ», кандидат хим. наук В.В. Болтромеюк
Лелевич В.В.
ISBN985-496-168-0
Руководство для выполнения лабораторных работ по биологической химии для студентов высших медицинских учебных учреждений содержит весь перечень лабораторных работ в соответствии с действующей учебной программой, а также референтные величины для основных биологических показателей и рекомендуемую учебную литературу.
Все права на данное издание защищены. Воспроизведение любым способом руководства не может быть осуществлено без предварительного разрешения авторов.
УДК 577.1 ББК 28.902
ISBN 985-496-168-0 ©В.В. Лелевич, доц. И.О. Леднева, асс. М.Н. Курбат и др., 2007
В связи с динамическим развитием биохимии как науки, совершенствованием обучающих технологий в медицинских вузах периодически обновляются и методические документы, обеспечивающие учебный процесс. Данное руководство отражает лабораторно-практический аспект изучения биохимии в течение всего учебного года. Оно включает лабораторные работы, которые в соответствии с учебным планом и действующей учебной программой выполняются на лечебном, педиатрическом и медико-псиъхологическом факультетах. Рекомендуемое руководство содержит: · краткое обоснование выполнения конкретной лабораторной работы; · химический механизм (принцип метода) выполняемой методики; · схему этапов выполняемой работы (ход работы); · последовательность расчетов при обработке полученных результатов; · нормальные величины определяемых биохимических показателей и возможные их отклонения при физиологических состояниях, болезнях и применении лекарств. Предлагаемое руководство облегчит студентам понимание цели и задачи лабораторного практикума, позволит им с большим интересом и самостоятельностью выполнять биохимические методики и покажет важное значение определения биохимических показателей в диагностике заболеваний человека. Готовый макет лабораторной части протокола позволит студенту уменьшить затраты времени на внеаудиторную подготовку к занятию. Надеемся, что подготовленное коллективом кафедры руководство помогут студентам успешно овладеть программными знаниями по биологической химии.
Коллектив авторов
МЕТОДИЧЕСКИЕ СОВЕТЫ СТУДЕНТАМ
При подготовке к выполнению лабораторной работы следует вначале изучить рекомендуемый теоретический раздел по учебнику и лекции, что облегчит понимание цели и задач предстоящего биохимического исследования. Необходимо внимательно прочитать и понять указанную в руководстве информацию по выполнению лабораторной работы. Знание обоснования и химического механизма методики, нормы и диагностического значения определяемых показателей, являются обязательными условиями, позволяющими преподавателю допустить студента к выполнению лабораторной работы. В процессе выполнения лабораторной работы в учебном практикуме в рабочем протоколе необходимо записать: - наблюдения или регистрируемые на приборах данные (экстинкцию); - математические расчеты или найти результат по калибровочному графику: - конечный результат исследования; - выводы. Авторы надеются, что регулярная самоподготовка, осмысленное и грамотное выполнение лабораторных работ позволит студентам успешно овладеть программным материалом, расширить и закрепить знания по биологической химии.
ТЕХНИКА ЛАБОРАТОРНЫХ РАБОТ Приступая к работе в биохимической лаборатории, каждый исследователь должен познакомиться с правилами техники безопасности и информацией о технике лабораторных работ. Меры охраны труда являются обязательными и соблюдение их необходимо при всех видах работ в лаборатории. При работе в лаборатории необходимо соблюдать правила обращения с:
1. Биологическим материалом 1.1. При работе с биологическим материалом (кровь, моча, слюна, желудочный сок, спинномозговая жидкость, гомогенаты тканей и другие) необходимо соблюдать максимальную аккуратность и осторожность. Работу следует выполнять в перчатках. Это необходимо для исключения передачи различных вирусных, инфекционных болезней (СПИД, сифилис, гепатит и другие). После выполнения работы тщательно вымыть руки.
2. Реактивами 2.1. На всех склянках с реактивами всегда должны быть этикетки с указанием названия реактива и его концентрации. Склянки плотно закупорены. 2.2. Следует соблюдать особую осторожность при обращении с ядовитыми, огнеопасными веществами, с концентрированными кислотами и щелочами. Работать с такими реагентами следует под включенной вытяжкой. 2.3. Реактивы необходимо предохранять от загрязнения. 2.4. Реактивы следует расходовать экономно. 2.5. Недопустимо набирать реагенты в мерные пипетки ртом.
Электрическими приборами 3.1. Измерительные приборы (фотоэлектроколориметры, спектрофотометры и другие) должны быть заземлены, технически исправны. 3.2. Водяные термостаты, сухожаровые шкафы, центрифуги должны быть в рабочем состоянии, заземлены. Крышки этих аппаратов во время работы прибора должны быть закрыты. 3.3. Необходимо следить за тем, чтобы в водяном термостате всегда была вода. 4. Центрифугами в лабораторном практикуме 4.1. В центрифугу помещают парное (четное) количество уравновешенных пробирок. 4.2. Ось симметрии между двумя пробирками должна проходить через центр ротора. 4.3. Проверяют, чтобы центрифужная камера была закрыта крышкой. 4.4. Устанавливают необходимую скорость вращения ротора центрифуги. 4.5. Включают центрифугу и наблюдают за ее работой в течение всего времени центрифугирования. 4.6. Во время работы центрифуги запрещается открывать крышку камеры. 4.7. После отключения центрифуги необходимо дать возможность ротору остановиться, запрещается тормозить ротор рукой. 4.8. После остановки ротора центрифуги достаньте пробирки из ячеек ротора и продолжите работу на своем рабочем месте.
Водопроводом 6.1. При использовании водопровода по окончании работы в лаборатории всегда необходимо проверять, выключены ли краны холодной и горячей воды. Для выполнения методик 7.1. Стеклянная химическая посуда (пробирки, пипетки, колбочки, мерные цилиндры и др.) требует осторожного обращения. В противном случае она может разбиться и травмировать осколками стекла работающего и окружающих. 7.2. Автоматические пипетки должны находиться в штативах-подставках. Пластик, из которого они сделаны, достаточно хрупкий, при неосторожном обращении, ударах эти точные измерительные приборы могут быть выведены из строя.
Дата: __________________
ЗАНЯТИЕ № 1 ЗАНЯТИЕ № 2 РАБОТА № 1. ЦВЕТНЫЕ РЕАКЦИИ НА БЕЛКИ И АМИНОКИСЛОТЫ Обоснование выполнения работы: цветные реакции на белки и аминокислоты позволяют обнаружить присутствие белка в биологических жидкостях, установить аминокислотный состав. Эти реакции применяют как для качественного, так и для количественного определения белков и аминокислот.
1. Биуретовая реакция на белки.
Принцип метода: раствор белка в щелочной среде в присутствии сульфата меди (NaOH/CuSO4) окрашивается в сине-фиолетовый цвет. Окраска определена образованием комплексного соединения ионов меди с пептидными группами белка, которых должно быть не менее двух. Таким образом, эта реакция открывает все белки, а также низкомолекулярные пептиды. Ход работы: взять опытную пробирку.
РЕЗУЛЬТАТ:
В Ы В О Д:
2. Нингидриновая реакция.
Принцип метода: аминокислоты, пептиды и белки при кипячении с раствором нингидрина дают синее окрашивание (комплекс Руэмана). Реакция характерна для аминогрупп, находящихся в альфа-положении.
СО2
АМИНОДИКЕТОГИДРИНДЕН + НИНГИДРИН КОМПЛЕКС РУЭМАНА (СИНЕ-ФИОЛЕТОВОГО ЦВЕТА)
Ход работы: взять опытную пробирку.
РЕЗУЛЬТАТ:
В Ы В О Д:
3. Ксантопротеиновая реакция Мульдера (на ароматические аминокислоты).
NH2 NO2 NH2
тирозин динитротирозин
Принцип метода: ароматические аминокислоты (фенилаланин, тирозин, триптофан) при нагревании с азотной кислотой нитруются. Это проявляется развитием желтого окрашивания. Ход работы: взять опытную пробирку.
РЕЗУЛЬТАТ:
В Ы В О Д:
4. Реакция Фоля на цистеин. Принцип метода: реакция характерна для слабосвязанной серы в составе аминокислоты цистеин. Конечный продукт – сульфид свинца – черного цвета.
свинца
Ход работы: взять пробирку:
РЕЗУЛЬТАТ:
В Ы В О Д:
РАБОТА № 2. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОБЩЕГО БЕЛКА ПЛАЗМЫ БИУРЕТОВЫМ МЕТОДОМ Принцип метода: БЕЛОК + NaOH/CuSO4 = сине-фиолетовый цвет, интенсивность окраски раствора прямо-пропорциональна концентрации белка в сыворотке и определяется фотометрически.
Ход работы: взять две пробирки: контрольную и опытную.
РЕЗУЛЬТАТ: Измерение на колориметре проводят против контрольной пробы и отмечают экстинцию. Ex0 =
Конечный результат: определяют по калибровочному графику.
Co = г/л
КЛИНИКО-ДИАГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ. Нормальное содержание общего белка (общий белок крови = альбумины + глобулины + фибриноген) в сыворотке крови у взрослых - 65-85 г/л. Повышение концентрации общего белка сыворотки крови (гиперпротеинемия) характерно для: ревматоидного артрита, коллагенозов, бронхоэктатической болезни, миеломной болезни, гипериммуноглобулинемии, а также гипогидратации организма (рвота, понос) и венозного стаза; Снижение концентрации белка в сыворотке крови (гипопротеинемия) отмечается при: голодании, беременности, нефротическом синдроме (гломерулонефрит), хронических заболеваниях печени (гепатиты и циррозы), гастроэнтеропатиях, ожогах, раковой кахексии.
ВЫВОД:
Дата: ________________ ЗАНЯТИЕ № 3 РАБОТА № 1. ОСАЖДЕНИЕ БЕЛКОВ КОНЦЕНТРИРОВАННЫМИ МИНЕРАЛЬНЫМИ КИСЛОТАМИ
Обоснование выполнения работы: демонстрируют влияние химических факторов на устойчивость белков в растворах.
Принцип метода: белок осаждается вследствие химической денатурации белка и образования комплексной соли белка с кислотами.
Ход работы: взять опытную пробирку:
Наклонив пробирки под углом 45о, осторожно по стенке пробирки приливают раствор белка так, чтобы обе жидкости не смешивались.
РЕЗУЛЬТАТ:
В Ы В О Д:
РАБОТА № 2. РАЗДЕЛЕНИЕ АЛЬБУМИНОВ И ГЛОБУЛИНОВ ЯИЧНОГО БЕЛКА МЕТОДОМ ВЫСАЛИВАНИЯ
Обоснование выполнения работы: высаливанием обратимо осаждают белки, фракционируют их. Используют для выделения белков, в том числе ферментов. Принцип метода: при высаливании происходит дегидратация макромолекул белка и устранение заряда. Осаждение белка обратимо и зависит от молекулярной массы белка и дегидратирующей способности растворов нейтральных солей.
Ход работы: взять две пробирки: опыт 1 и опыт 2
В Ы В О Д:
Дата: _______________ ЗАНЯТИЕ № 4 РАБОТА № 1. КИСЛОТНЫЙ ГИДРОЛИЗ БЕЛКОВ
Обоснование выполнения работы: гидролиз белка – это расщепление биополимера с присоединением воды по месту разрыва пептидных связей под действием кислот, оснований или протеаз. Последовательность гидролиза белка показана на схеме. В лабораторных условиях гидролиз белков используется для определения первичной структуры, аминокислотного состава белков. Гидролизаты белков применяются в качестве лечебных препаратов при парентеральном питании. В организме человека и животных постоянно происходит гидролиз белков в пищеварительном тракте и клетках органов под действием протеолитических ферментов.
Принцип метода: большинство биополимеров в реакциях с водой распадаются на мономеры. Гидролиз катализируют протоны, ионы гидроксила и ферменты по механизму нуклеофильного замещения у углерода с карбонильной группой. Полный кислотный гидролиз белков при кипячении происходит в течение 12-96 часов.
Ход работы:
1. В химическую колбу внести 20 мл раствора яичного белка.
¯
2. Добавить 5 мл концентрированной НCl
¯
3. Отливают 0, 5 – 1 мл смеси в пробирку ( № 1), (5 капель) ¯
4. Колбу закрывают резиновой пробкой с длинной стеклянной трубкой (обратный холодильник)
¯
5. Содержимое колбы кипятить под вытяжкой в течение 45 минут
¯
6. После охлаждения отливают 0, 5 – 1 мл гидролизата в пробирку ( № 2) (5 капель)
¯
7. Нейтрализуют содержимое пробирок 20 % NaOH по лакмусу до голубой окраски
¯
8. Проводят биуретовую реакцию в пробирках № 1 и № 2.
РЕЗУЛЬТАТ:
В Ы В О Д:
РАБОТА № 2. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ПРОТЕОЛИТИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ ТРИПСИНА
Обоснование выполнения работы: протеолитический фермент трипсин осуществляет расщепление пищевых белков в содержимом двенадцатиперстной кишки в верхних отделах тонкого кишечника. Фермент используется также для расщепления белков в лабораторных условиях.
Принцип метода: протеолитическая активность трипсина регистрируется по количеству освобождающегося аргинина и лизина, которые с фенольным реактивом дают синюю окраску, измеряемую колориметрически. Ход работы: взять две центрифужные пробирки: контрольную и опытную.
РЕЗУЛЬТАТ:
В Ы В О Д:
Дата: _______________ ЗАНЯТИЕ № 5
РАБОТА № 1. ВЛИЯНИЕ ТЕМПЕРАТУРЫ НА АКТИВНОСТЬ АМИЛАЗЫ ОБОСНОВАНИЕ ВЫПОЛНЕНИЯ РАБОТЫ: позволяет охарактеризовать одно из свойств ферментов – зависимость протекания ферментативных реакций от температуры (термолабильность).
Принцип метода: амилаза амилаза Крахмал ---------® декстрины ------------® мальтоза.
Крахмал дает с иодом синий цвет. Декстрины дают с иодом фиолетовое, красно-бурое окрашивание. Мальтоза – желтый (цвет иода в воде).
ХОД РАБОТЫ: взять четыре пробирки, опыт 1-4. Развести слюну 1: 10. (1мл слюны в отдельной пробирке + 9мл Н2О)
РЕЗУЛЬТАТ:
ВЫВОД:
РАБОТА № 2. ВЛИЯНИЕ АКТИВАТОРОВ И ИНГИБИТОРОВ НА АКТИВНОСТЬ АМИЛАЗЫ СЛЮНЫ
ОБОСНОВАНИЕ ВЫПОЛНЕНИЯ РАБОТЫ: активаторы и ингибиторы регулируют действие ферментов. Эти сведения используют для изучения влияния ксенобиотиков и изучения воздействия на энзимы изменяющихся концентраций нормальных метаболитов клетки.
Принцип метода: При активации идет конформационная перестройка активного центра фермента и увеличивается скорость реакции. Ингибиторы оказывают противоположное действие (механизмы различны: через аллостерический центр, путем ковалентного связывания, денатурации и т.д.). ХОД РАБОТЫ: взять три пробирки: контрольную и две опытные.
¯ Пробирки оставить при комнатной температуре на 5 минут (10, 15 минут). ¯ Добавляют по 2-3 капли раствора йода во все пробирки.
РЕЗУЛЬТАТ:
ВЫВОД:
РАБОТА № 3. ОПРЕДЕЛЕНИЕ АКТИВНОСТИ АМИЛАЗЫ (ДИАСТАЗЫ) В СЫВОРОТКЕ КРОВИ И МОЧЕ ПО МЕТОДУ КАРАВЕЯ ОБОСНОВАНИЕ ВЫПОЛНЕНИЯ РАБОТЫ: определение активности амилазы в моче и сыворотке крови используют для диагностики заболеваний поджелудочной железы.
Принцип метода: метод основан на колориметрическом определении концентрации крахмального субстрата до и после его ферментативного гидролиза. Степень расщепления крахмала оценивается пробой с 0, 01 н раствором йода.
ХОД РАБОТЫ:
Пробирки встряхнуть. Измерение на колориметре опытной и контрольной проб проводят против воды. Длина 630 – 690 нм (красный светофильтр), кювета 1 см. РАСЧЕТЫ: Расчет активности α -амилазы в граммах расщепленного крахмала на 1 л сыворотки за 1 час инкубации при 370 С производят по формуле Ек – Еоп Х = -------------------- х 240 Ек Ек - экстинкция контрольной пробы, Еоп – экстинкция опытной пробы.
РЕЗУЛЬТАТ:
КЛИНИКО-ДИАГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ. Активность α -амилазы в сыворотке крови в норме = 16 – 30 г/час/л, в моче – 28 – 160 г/час/л. Повышение активности фермента наблюдается при: паротите, панкреатите, раке поджелудочной железы, перитоните, циррозе печени, остром инфекционном гепатите, внематочной беременности, диабетическом кетоацидозе. Снижение активности α -амилазы отмечается при: атрофии поджелудочной железы, нарушении фильтрационной функции почек, кахексии. ВЫВОД:
Дата: _______________ ЗАНЯТИЕ № 6
ЗАНЯТИЕ № 7 САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ АУДИТОРНАЯ РАБОТА ПО ТЕМЕ «БЕЛКИ, ФЕРМЕНТЫ»
Дата: _______________ ЗАНЯТИЕ № 9
РАБОТА № 1. ГИДРОЛИЗ НУКЛЕОПРОТЕИДОВ ДРОЖЖЕЙ
ОБОСНОВАНИЕ ВЫПОЛНЕНИЯ РАБОТЫ: кислотный гидролиз используется для изучения химического состава нуклеопротеидов. ПРИНЦИП МЕТОДА: ЗАНЯТИЕ № 10
РАБОТА № 1. КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ МОЧЕВОЙ КИСЛОТЫ В МОЧЕ ОБОСНОВАНИЕ ВЫПОЛНЕНИЯ РАБОТЫ: мочевая кислота образуется из пуриновых оснований (аденин, гуанин). Выделение мочевой кислоты с мочой зависит от содержания пуринов в пище и от состояния обмена нуклеиновых кислот в организме. Мочевая кислота в виде кислого урата натрия входит в состав подагрических отложений в сухожилиях, хрящах, слизистых оболочках суставных сумок. Метаболит существует в виде 2-х таутомерных форм:
O
N N H Енольная форма Кетонная форма
ПРИНЦИП МЕТОДА: мочевая кислота в щелочной среде восстанавливает фосфорновольфрамовый реактив, который приобретает интенсивный синий цвет. Количество восстановленного фосфорновольфрамового реактива можно определить (титруя) раствором [K3Fe(CN)6]. При этом синий раствор обесцвечивается. Количество использованного K3[Fe(CN)6] эквивалентно содержанию мочевой кислоты.
ХОД РАБОТЫ: взять две пробирки:
Титрование каждой пробы раствором К3[Fe(CN)6] до исчезновения синего цвета. РЕЗУЛЬТАТ: записать объем K3[Fe(CN)6], пошедший на титрование.
ВЫЧИСЛЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТА. Пример:
На титрование стандарта использовано 2мл K3[Fe(CN)6] На титрование опыта – 3 мл K3[Fe(CN)6] Составляем пропорцию: 1 мг мочевой кислоты - 2 мл х мг мочевой кислоты - 3 мл
3 х 1 2 мл мочи содержит = Х = ----------- = 1, 5 мг/пробе Суточное выделение мочевой кислоты рассчитывают с учетом суточного диуреза (мужчины –1, 5, женщины – 1, 2 л.).
ВЫВОД:
КЛИНИКО-ДИАГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ: У взрослых здоровых людей с мочой за сутки выделяется 1, 6 – 6, 44 ммоль (0, 3 – 1, 2 г) мочевой кислоты. Повышенная экскреция мочевой кислоты ( гиперурикурия ) наблюдается при: заболеваниях, сопровождающихся ускоренной гибелью клеток (терапия раковых и лейкозных больных цитостатиками, гемобластозы, гемолитические процессы, псориаз, синдром длительного сдавления), токсикозах беременности, алкоголизации, потреблении богатых пуринами продуктов (печень, почки, икра рыб) Пониженное выведение мочевой кислоты ( гипоурикурия ) отмечается при: почечной недостаточности, подагре, нефритах, отравлениях свинцом и бериллием, синдроме Дауна.
Дата_______________ ЗАНЯТИЕ № 11 САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ АУДИТОРНАЯ РАБОТА ПО ТЕМЕ «БИОСИНТЕЗ БЕЛКОВ»
ЗАНЯТИЕ № 12
ЗАНЯТИЕ № 13
РАБОТА № 1. КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ МАКРОЭРГИЧЕСКИХ СОЕДИНЕНИЙ МЫШЦ ОБОСНОВАНИЕ ВЫПОЛНЕНИЯ РАБОТЫ: главный макроэрг клеток человека и животных - АТФ образуется в реакциях окислительного и субстратного фосфорилирования АДФ. В мышцах содержится креатинфосфат-макроэрг, образующийся с участием АТФ. Оба вещества обеспечивают энергией мышцы при их сокращении.
ПРИНЦИП МЕТОДА: богатые энергией два остатка фосфорной кислоты АТФ и фосфорный остаток креатинфосфата быстро отщепляются при гидролизе в кислой среде (лабильно связанный фосфор). Сравнение содержания неорганического фосфора, определяемого по цветной реакции с молибдатом аммония и аскорбиновой кислотой до и после гидролиза, указывает на количество лабильно связанного фосфора макроэргов, что отражает количество макроэргических соединений в мышцах. ХОД РАБОТЫ: А. Выделение макроэргов из мышц. 0, 5 г мышцы гомогенизируют в 5 мл охлажденной 2, 5 % ТХУ во льду. Фильтруют в мерную пробирку, осадок на фильтре промывают 5 мл холодной Н2О. Объем доводят до 10 мл.
Б. Определение лабильно связанного фосфора. Взять две пробирки: контроль и опыт
РЕЗУЛЬТАТ:
Расчеты: зная Ех, найти концентрацию фосфора в пробе по калибровочному графику. Конечный результат рассчитать по формуле: Содержание макроэргов в мг АТФ/100 г ткани = А × 3, 3 × 400 × 100
ВЫВОД:
Содержание АТФ в мышцах: » 5 мкмоль АТФ в 1 г мышечной ткани в состоянии покоя (молекулярная масса АТФ равна 507, 2 г/моль).
Дата________________ ЗАНЯТИЕ № 14 САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ АУДИТОРНАЯ РАБОТА ЗАНЯТИЕ № 16
РАБОТА № 1. КАЧЕСТВЕННАЯ РЕАКЦИЯ НА АДРЕНАЛИН ОБОСНОВАНИЕ ВЫПОЛНЕНИЯ РАБОТЫ: в мозговом слое надпочечников синтезируются катехоламины из аминокислоты тирозина. Адреналин и норадреналин способствуют распаду гликогена, стимулируют фосфорилазную активность в печени, мышцах, надпочечниках. ПРИНЦИП МЕТОДА: в молекулу адреналина и норадреналина входит пирокатехиновое кольцо. При его взаимодействии с хлорным железом наблюдается зеленое окрашивание. При добавлении NaOH – вишнево-красное окрашивание. ХОД РАБОТЫ: взять две пробирки: контроль и опыт.
РЕЗУЛЬТАТ:
ВЫВОД:
КЛИНИКО-ДИАГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ. Нормальное содержание адреналина в крови – до 6, 28 нмоль/л, в моче 27, 3 – 81, 9 нмоль/сут. Увеличение экскреции адреналина отмечается при: феохромоцитоме, гипертонической болезни (в период кризов), в острый период инфаркта миокарда, гепатитах и циррозах печени, обострении язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки, а также под влиянием курения, физической нагрузки и эмоционального стресса. Экскреция адреналина с мочой сниженапри: аддисоновой болезни, коллагенозах, острых лейкозах, остро протекающих инфекционных заболеваниях.
Дата: _______________ ЗАНЯТИЕ № 17
РАБОТА № 1. КАЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ 17-КЕТОСТЕРОИДОВ В МОЧЕ ОБОСНОВАНИЕ ВЫПОЛНЕНИЯ РАБОТЫ: кортикостероды – гормоны коры надпочечников. В коре надпочечников обнаружены эстрогены и андрогены. 17-кетостероиды являются конечным продуктом обмена гормонов коры надпочечников и выделяются с мочой. Определение продуктов обмена этих гормонов используется для диагностики болезней.
ПРИНЦИП МЕТОДА: 17-кетостероиды в щелочной среде взаимодействуют с m-динитробензолом. Образуется продукт конденсации вишнево-фиолетового цвета. ХОД РАБОТЫ: взять две пробирки: контроль и опыт
РЕЗУЛЬТАТ:
ВЫВОД:
КЛИНИКО-ДИАГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ: В норме экскреция 17-кетостероидов с мочой составляет 27, 7 – 79, 7 мкмоль/сут у мужчин и 17, 4 – 55, 4 мкмоль/сут у женщин. Выделение 17-кетостероидов с мочой увеличивается при: опухоли яичка и яичника, опухолях надпочечников, гиперплазии надпочечников. Уровень экскреции 17-кетостероидов с мочой снижается при: аддисоновой болезни, гипофизарном карликовом росте, гипотиреозе, синдроме остаточных гонад, анорхии, циррозе печени, нефротическом синдроме, истощении. Дата: ________________ ЗАНЯТИЕ № 18 РАБОТА № 1. КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ ВИТАМИНА С ОБОСНОВАНИЕ ВЫПОЛНЕНИЯ РАБОТЫ: витамин С участвует в окислительно-восстановительных процессах; в синтезе стероидных гормонов и катехоламинов в надпочечниках; как кофактор ферментов гидроксилаз (пролин в оксипролин); ускоряет всасывание железа, активирует пепсиноген. Недостаток витамина С в организме приводит к нарушению этих процессов. ПРИНЦИП МЕТОДА: метод основан на восстановлении витамином С 2, 6-дихлорфенолиндофенола (2, 6 – ДХФИФ), который в кислой среде имеет красную окраску, в щелочной среде синюю, а при восстановлении обесцвечивается. Исследуемый раствор титруют в кислой среде щелочным раствором 2, 6-ДХФИФ до розовой окраски.
|
Последнее изменение этой страницы: 2017-03-15; Просмотров: 290; Нарушение авторского права страницы
АМИНОКИСЛОТА + НИНГИДРИН ® ШИФФОВО ОСНОВАНИЕ
АЛЬДЕГИД
NO2
t 0100C
HO― ― CH2― CH― COOH + 2HNO3 → HO― ― CH2― CH― COOH
│ │ 
2Н2О
ЦИСТЕИН + 4NaOH + (СН3СОО)2 Рb СЕРИН + РbS + 4NaOH + 2CH3COOH ацетат свинца сульфид
C C
HO - C C N C C NH
H
