РАБОТА № 1. ОПРЕДЕЛЕНИЕ МОЧЕВИНЫ В СЫВОРОТКЕ КРОВИ

 

ОБОСНОВАНИЕ ВЫПОЛНЕНИЯ РАБОТЫ: мочевина - продукт, образующийся в печени при обезвреживании аммиака. Мочевина - основной конечный продукт обмена белков. Примерно 50 % небелкового, остаточного азота крови приходится на долю мочевины.

ПРИНЦИП МЕТОДА: мочевина образует с диацетилмонооксимом в сильнокислой среде в присутствии тиосемикарбазида и ионов трехвалентного железа комплексное соединение красного цвета, по интенсивности окраски которого определяют ее концентрацию.

 

ХОД РАБОТЫ: взять три пробирки: опыт, стандарт, контроль

 

ОТМЕРИТЬ	ОПЫТ	СТАНДАРТ	КОНТРОЛЬ
Рабочий раствор Сыворотка крови Дистилл. вода Стандартный раствор мочевины(16, 65 ммоль/л)	2, 0 мл 0, 1 мл -   -	2, 0 мл - -   0, 1 мл	2, 0 мл - 0, 1 мл   -

 

Все пробирки поместить в водяную баню при температуре 100^оС в течение 5 минут.

Охладить и произвести измерение экстинкции против контроля при 500-560 нм; кювета 10 мм. Измерения проводят в пределах 15 минут.

 

РЕЗУЛЬТАТ:

 

 

КОНЕЧНЫЙ РЕЗУЛЬТАТ: рассчитывают по формуле:

 

А ₁

Х = ----- х 16, 65 = ммоль/л

А ₂

 

где Х - концентрация мочевины, ммоль/л.

А₁ - экстинкция опытной пробы (Ехо).

А₂ - экстинкция стандартной пробы (Ех ст.).

РАСЧЁТ:

КЛИНИКО-ДИАГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ,

Нормальное содержание мочевины в сыворотке крови у взрослых 2, 5 - 8, 32 ммоль/л; в моче 333 - 582 ммоль/сут.

 

Незначительное повышение концентрации мочевины в сыворотке крови наблюдается при избыточном питании белковыми продуктами, при старении;

Значительное увеличение концентрации мочевины в сыворотке крови (уремия) наблюдается при: почечной недостаточности, обезвоживании (рвота, понос), шоке, усиленном распаде белков, сепсисе.

Пониженное содержание мочевины в сыворотке крови отмечается при: паренхиматозном гепатите, циррозе (резкое снижение мочевинообразовательной функции печени), эклампсии, во время беременности.

Пониженное содержание мочевины в моче отмечается при: нефрите, ацидозе, паренхиматозной желтухе, циррозе печени

 

ВЫВОД:

 

Дата ________________

ЗАНЯТИЕ № 31

САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ АУДИТОРНАЯ РАБОТА

ПО ТЕМЕ «ОБМЕН И ФУНКЦИИ АМИНОКИСЛОТ. ОБМЕН НУКЛЕОТИДОВ»
Дата: ________________

ЗАНЯТИЕ № 33

РАБОТА № 1. КАЧЕСТВЕННОЕ И КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ БИЛИРУБИНА (ПО МЕТОДУ ЙЕНДРАШИКА)

 

ОБОСНОВАНИЕ ВЫПОЛНЕНИЯ РАБОТЫ: при разрушении эритроцитов (у человека через 100-120 дней) в клетках ретикулоэндотелиальной системы костного мозга, селезенки, печени происходит распад гемоглобина. Конечным продуктом распада гема гемоглобины, является непрямой билирубин, который поступает в кровь и транспортируется альбуминами в печень, где происходит его обезвреживание с образованием прямого билирубина и выведение из организма.

В сыворотке крови имеется два вида билирубина. Основная форма - это непрямой (свободный) билирубин, который не связан с глюкуроновой кислотой и дает непрямую диазореакцию. Незначительное количество в крови содержится прямого (связанного) билирубина - этот билирубин связан с глюкуронатом и дает прямую диазореакцию. Сумма обоих пигментов дает общий билирубин.

Нарушение обмена билирубина сопровождается развитием желтухи. В связи с этим раздельное количественное определение общего, прямого и непрямого билирубина в сыворотке крови имеет значение для дифференциальной диагностики различных типов желтух.

 

ПРИНЦИП МЕТОДА: диазореактив дает с прямым билирубином розовое окрашивание. Непрямой билирубин переводят в растворимое состояние добавлением к сыворотке кофеинового реактива, после этого общий билирубин определяется диазореакцией. Интенсивность окраски прямо пропорциональна концентрации билирубина в пробе.

 

ХОД РАБОТЫ: взять три пробирки: опыт 1, 2 и контроль

 

ОТМЕРИТЬ	ОПЫТ1	ОПЫТ2	КОНТРОЛЬ
	ПРЯМОЙ БИЛИРУБИН	ОБЩИЙ БИЛИРУБИН
СЫВОРОТКА КРОВИ NaCl 0, 9% ДИАЗОРЕАКТИВ КОФЕИНОВЫЙ РЕАКТИВ	0, 5 мл 1, 75 мл 0, 25 мл	0, 5 мл   0, 25 мл 1, 75 мл	0, 5 мл 0, 25 мл   1, 75 мл

Содержимое пробирок перемешать и инкубировать

при температуре 18оС.

 

 

ОПЫТ₁ - фотометрия через 10 минут

против контроля

ОПЫТ₂ - фотометрия через 20 минут

 

Длина волны: 530-550 нм, кювета 5 мм.

РЕЗУЛЬТАТ:

 

КОНЕЧНЫЙ РЕЗУЛЬТАТ: находят по калибровочному графику, по разнице между количеством общего и прямого билирубина определяют уровень непрямого билирубина.

 

КЛИНИКО-ДИАГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ.

Нормальное содержание общего билирубина в сыворотке крови 8, 5 - 20, 5 мкмоль/л; связанного билирубина (прямого) – 2, 2 - 5, 1 мкмоль/л; свободного билирубина (непрямого) – 1, 7 – 17, 1 мкмоль/л.

 

Повышенное содержание общего билирубина в сыворотке крови отмечается при: желтухе новорожденных, повреждении гепатоцитов (воспалительном, токсическом), закупорке желчных протоков, гемолитической болезни

 

При паренхиматозной желтухе:

- в крови повышается содержание прямого и непрямого билирубина;

- в моче появляется прямой билирубин и уробилиноген.

 

При обтурационной (механической) желтухе:

- в крови повышается содержание прямого билирубина;

- в моче появляется прямой билирубин (темная моча);

- уменьшается выделение стеркобилина (бесцветный кал).

 

При гемолитической желтухе:

- в крови повышается содержание непрямого билирубина;

- в моче повышается содержание стеркобилиногена;

- увеличивается выделение стеркобилина (темный кал).

 

ВЫВОД:

 

 

Дата: ________________

ЗАНЯТИЕ № 34

⇐ Предыдущая1234567Следующая ⇒

Поделиться: