В. Иммунологический метод диагностики

Менингококковых заболеваний

Для диагностики менингококковых инфекций помимо классического бактериологического способа используют также различные серологические реакции, позволяющие обнаружить антигены возбудителя в спинномозговой жидкости и в крови. С этой целью применяют реакции коагглютинации, латекс-агглютинации, встречного иммуноэлектрофореза, реакцию пассивной гемагглютинации и эритроиммуноадсорбцию. Последний метод предложен, в частности, для обнаружения полисахаридного антигена серогруппы А (наиболее частого возбудителя менингита). Суть метода заключается в том, что луночки полистиролового планшета сенсибилизируют противоменингококковыми антителами, затем в них добавляют исследуемый материал, содержащий искомый антиген. Смесь инкубируют при 37°C в течение 30-60 мин для связывания антигена антителами. После отмывания в луночки добавляют эритроцитарный диагностикум (эритроциты, несущие антитела к менингококку группы А). В качестве положительного контроля в одну из луночек добавляют полисахарид группы А, отрицательного - эритроциты без антител. Реакцию учитывают через 20 мин седиментации при 22°C визуально и оценивают по 4-х крестной системе. В случае положительной реакции комплекс антитело-антиген взаимодействует с сенсибилизированными эритроцитами, в результате образуется гомогенный слой эритроцитов, фиксированных на стенках луночек. При отрицательной реакции эритроциты скатываются на дно, образуя компактный осадок.

МЕТОДЫ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКИ

ГОНОКОККОВЫХ ИНФЕКЦИЙ

А. Бактериоскопический

Материал: гной из мочеполовых органов, с конъюнктивы глаза
По Граму	Метиленовым синим

Б. Бактериологический

Материал: гной из мочеполовых органов, конъюнктивы глаза, синовиальная жидкость, кровь
	u 76anRxDRTPHPDL/4jA4VM+39iXQQvYJ5mrOT7ylXYj3LFxmIPQ/zZQayKuX/BtUPAAAA//8DAFBL AQItABQABgAIAAAAIQC2gziS/gAAAOEBAAATAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAABbQ29udGVudF9UeXBl c10ueG1sUEsBAi0AFAAGAAgAAAAhADj9If/WAAAAlAEAAAsAAAAAAAAAAAAAAAAALwEAAF9yZWxz Ly5yZWxzUEsBAi0AFAAGAAgAAAAhAGcm3oYpAgAANAQAAA4AAAAAAAAAAAAAAAAALgIAAGRycy9l Mm9Eb2MueG1sUEsBAi0AFAAGAAgAAAAhANVVt0/fAAAACQEAAA8AAAAAAAAAAAAAAAAAgwQAAGRy cy9kb3ducmV2LnhtbFBLBQYAAAAABAAEAPMAAACPBQAAAAA= " fillcolor="#ff6"/>
Асцит-агарСывороточный агар+ ристомицин, + мальтоза, +водный голубой
	Специальная питательная среда
Микроскопия	Пестрый ряд	Чувствительность к антибиотикам

В. Серологический – РСК, РНГА со стандартным гонококковым антигеном.

Г. Экспресс диагностика: 1) иммуно-люминесцентная микроскопия

2) ПЦР; мультиплексная ПЦР – комбинированный тест на выявление Neisseria gonorrhoeae, Chlamidia trachomatis и Trichomonas vaginalis.

МЕТОДЫ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКИ

МИКОПЛАЗМЕННЫХ ИНФЕКЦИЙ

А. Бактериоскопический

Материал: мокрота, мазки из зева, смывы из носоглотки, биоптаты легочной ткани, плеральная жидкость, моча, отделяемое уретры и влагалища, режесиновиальная жидкостьа
По Граму	По Романовскому -Гимза

Ввиду полиморфизма возбудителей вактериоскопический метод носит второстепенный (ориентировочный характер).

Б. Бактериологический

Материал: гной из мочеполовых органов, конъюнктивы глаза, синовиальная жидкость, кровь G Z8Lcd0jsHX3vTGTZV9L2ZuRy18qHJEmlMw3xhdp0+FZj+a0Hp6DcfSxJd+P7/lUPXuvtcXtGqdT9 3fTyDCLiFP/CcMFndCiY6eAHskG0ClZpuuCoghkP9q/6wMvTCmSRy/8PFL8AAAD//wMAUEsBAi0A FAAGAAgAAAAhALaDOJL+AAAA4QEAABMAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAFtDb250ZW50X1R5cGVzXS54 bWxQSwECLQAUAAYACAAAACEAOP0h/9YAAACUAQAACwAAAAAAAAAAAAAAAAAvAQAAX3JlbHMvLnJl bHNQSwECLQAUAAYACAAAACEA/h8s3GECAAB4BAAADgAAAAAAAAAAAAAAAAAuAgAAZHJzL2Uyb0Rv Yy54bWxQSwECLQAUAAYACAAAACEAY8OcYNwAAAAIAQAADwAAAAAAAAAAAAAAAAC7BAAAZHJzL2Rv d25yZXYueG1sUEsFBgAAAAAEAAQA8wAAAMQFAAAAAA== " adj="-214383, -1, -214383" strokeweight="2.25pt">
МПА + лошадиная сыворотка + дрожжевой экстракт
	Специальная питательная среда
РИФ	Пестрый ряд	Чувствительность к антибиотикам

В. Серологический.

В связи с широким распространением носительства микоплазм результат бактериологического метода подтверждают серологическим. Для серологической диагностики ставят РСК, РНГА, ИФА, реация ингибиции метаболизма с использованием метода парных сывороток (диагностическое значение имеет увеличение титра поздней сыворотки в 4 и более раз).

Г. Экспресс диагностика: 1) иммуно-люминесцентная микроскопия;

2)ПЦР;

3) метод гибридизации на основе ДНК-зондов.

ЗАНЯТИЕ № 3

Дата________________

Тема: МИКРОБИОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА БРЮШНОГО ТИФА И САЛЬМОНЕЛЛЕЗОВ

План занятия

1. Изучение морфологических, культуральных и биохимических свойств сальмонелл.

2. Бактериологическое исследование крови брюшнотифозного больного. Посев крови на среду с желчью (разбор с демонстрацией).

3. Бактериологическое исследование испражнений брюшнотифозного больного: посев на среду обогащения и дифференциально-диагностические среды (разбор схемы).

4. Реакция Видаля. Постановка реакции агглютинации с O- и Н-диагностикумами. Регистрация результатов реакции Видаля (разбор с демонстрацией).

5. Исследование пищевых продуктов на наличие возбудителей пищевых токсикоинфекций (разбор схемы).

6. Исследование пищевых продуктов на наличие энтеротоксигенного стафилококка и обнаружение стафилококкового энтеротоксина. Разбор методов.

7. Разобрать особенности антигенного строения и принципы современной серологической классификации сальмонелл (демонстрация схемы).

 

Методические указания

1. Изучение морфологических, культуральных и биохимических свойств сальмонелл

Промикроскопировать препараты-мазки из культур бактерий - возбудителей брюшного тифа, паратифа А, S. enteritidis и кишечной палочки, окрашенных по Граму. Сравнить морфологию бактерий во всех препаратах и отметить морфологическое сходство их друг с другом. Препараты зарисовать.

Исследовать характер роста возбудителей брюшного тифа, паратифа А, S. enteritidis и кишечной палочки на МПА, МПБ, Эндо.

Изучить и записать в тетрадь биохимические свойства бактерий тифо-паратифозной группы по готовым демонстрационным наборам посевов на среды " пестрого ряда".

2. Бактериологическое исследование крови брюшнотифозного

больного. Посев крови на среду с желчью (разбор с демонстрацией).

Взятая из вены больного кровь в количестве 8-10 мл для выделения гемокультуры засевается в среду с желчью (МПБ + 10 процентов желчи + 1 процент глюкозы + индикатор Андреде).

Посев крови производят непосредственно у постели больного в десятикратный (по отношению к количеству крови) объем питательной среды. Посев помещают в термостат при 37°C, а на следующие сутки производят высев на скошенный агар и на дифференциально-диагностические среды (Левина, Плоскирева, висмут-сульфит-агар, Эндо).

Отметить изменения, наступившие в среде Рапопорт в результате роста возбудителей брюшного тифа (покраснение среды) и паратифов или других возбудителей сальмонеллёзов (покраснение среды и наличие газа). Пересев культуры бактерий со среды Рапопорт на скошенный МПА и среды Плоскирева, Эндо, Левина (демонстрация).

Окончательная идентификация проводится по биохимическим свойствам и антигенным свойствам – агглютинация на стекле с монорецепторными Vi-, О- и Н-сыворотками.

Рис. 1. Возбудитель брюшного тифа Salmonella typhi	Рис. 2. Возбудитель паратифа А S. paratyphi А
Ub ybJ3dJPRgeXUymbSFy43g0yiaC2N7i0vdHqk547qU3U2CLt2W61nqUKqjrvXkJ6+9m8qRry9WbZP IAIt4S8Mv/iMDiUzHdzZNl4MCI9ZxkkExQfYVvdZDOKAkKQqAVkW8v+B8gcAAP//AwBQSwECLQAU AAYACAAAACEAtoM4kv4AAADhAQAAEwAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAW0NvbnRlbnRfVHlwZXNdLnht bFBLAQItABQABgAIAAAAIQA4/SH/1gAAAJQBAAALAAAAAAAAAAAAAAAAAC8BAABfcmVscy8ucmVs c1BLAQItABQABgAIAAAAIQCDpfWIJgIAADIEAAAOAAAAAAAAAAAAAAAAAC4CAABkcnMvZTJvRG9j LnhtbFBLAQItABQABgAIAAAAIQDALEsI3QAAAAgBAAAPAAAAAAAAAAAAAAAAAIAEAABkcnMvZG93 bnJldi54bWxQSwUGAAAAAAQABADzAAAAigUAAAAA "/>
Рис. 3. Возбудитель паратифа В S. enteritidis	Рис. 4. Кишечная палочка Escherichia coli

3. Бактериологическое исследование испражнений брюшнотифозного больного: посев на среду обогащения и дифференциально-диагностические среды (разбор схемы)

Испражнения брюшнотифозного больного засевают на одну из сред обогащения (среда магниевая, среда с селенитом) и одновременно на дифференциально-диагностические среды: Эндо, Плоскирева, Левина или висмут-сульфит-агар. Через 8-10 часов инкубирования в термостате со среды обогащения также производится посев на плотную дифференциально-диагностическую среду.

На чашках с посевами находят бесцветные прозрачные колонки, типичные для возбудителей тифо-паратифозной группы. Половину колонии используют для приготовления препарата-мазка (окрасить по Граму), оставшуюся часть колонки засевают на среды " пестрого ряда", среду Пешкова (для исследования подвижности) и на скошенный МПА.

Окончательная идентификация проводится по биохимическим свойствам и антигенным свойствам – агглютинация на стекле с монорецепторными Vi-, О- и Н-сывоторками.

⇐ Предыдущая12345678910Следующая ⇒

Поделиться: