|
Архитектура Аудит Военная наука Иностранные языки Медицина Металлургия Метрология Образование Политология Производство Психология Стандартизация Технологии |
|
|
Архитектура Аудит Военная наука Иностранные языки Медицина Металлургия Метрология Образование Политология Производство Психология Стандартизация Технологии |
Ускоренный метод диагностики возбудителей
Газовой гангрены по способу Комковой Исследуемый материал вносят в 10 пробирок с полужидкой средой и затем 5 пробирок прогревают при 80º C 20 минут. После этого в каждую пробирку добавляют различные моновалентные противогангренозные сыворотки. Обнаружение через 10-18 часов микробов стрептобациллярной формы и роста их изолированными колониями подтверждает соответствие возбудителя типу сыворотки. Диффузный рост и беспорядочное расположение бацилл указывает на несоответствие возбудителя типу сыворотки. МЕТОДЫ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКИ БОТУЛИЗМА А. Бактериологический (по классической схеме с последующей биологической пробой – см. ниже).
Б. Биологический Для обнаружения токсина и его типа в реакции нейтрализации. Для обнаружения токсина двум мышам вводят исследуемый фильтрат в количестве 0, 5 мл внутрибрюшинно, другим двум мышам вводят смесь, состоящую из 0, 5 мл фильтрата и 0, 2 мл смеси диагностических моновалентных противоботулинических сывороток типа А, В, С, Е (соединяют по 0, 5 мл сыворотки каждого типа). Перед введением смесь испытуемого материала и сывороток выдерживают при комнатной температуре в течение 30 минут. Наблюдение за животными ведут в течение 4 дней. При наличии токсина погибают первые две мыши, остальные остаются живы. При обнаружении токсина ставят развернутую реакцию нейтрализации для определения типа токсина. Для этого в 5 пробирок разливают по 2, 4 мл испытуемого фильтрата и в каждую пробирку прибавляют по 0, 6 мл сыворотки раздельно типа А, типа B, типа С и типа Е. В 5-ю пробирку прибавляют 0, 6 мл физиологического раствора. Смесь после 30 минут выдерживания при комнатной температуре вводят внутрибрюшинно по 1 мл 2 мышам из каждой пробирки отдельными шприцами. Наблюдают за животными в течение 4 дней. При наличии токсина выживают мыши, получившие смесь токсина и гомологичной сыворотки, остальные мыши гибнут. Тип сыворотки, нейтрализующей токсин, указывает на типовую принадлежность токсина. В. Ускоренные методы диагностики ботулизма а) обнаружение токсина с помощью РПГА (на эритроцитах адсорбируют антитоксин) б) обнаружение токсина с помощью реакции угнетения фагоцитоза. Ботулинический токсин резко угнетает фагоцитарную способность лейкоцитов в связи с наличием у токсина лейкотоксических свойств. При этом фагоцитарный показатель уменьшается в 3, 5, 10 и даже 20 раз. При добавлении к крови, содержащей токсин, гомологичной антитоксической сыворотки фагоцитарная способность лейкоцитов восстанавливается. НЕКЛОСТРИДИАЛЬНАЯ АНАЭРОБНАЯ ИНФЕКЦИЯ Эта инфекция, часто встречающаяся в медицинской практике, в том числе как проявление госпитальной инфекции, вызывается неклостридиальной анаэробной микрофлорой и развивается в подавляющем большинстве случаев как аутоинфекция. К неклостридиальной анаэробной микрофлоре относят не образующие спор грамотрицательные бактерии — представители родов Bacteroides, Fusobacterium, Porphyromonas, Prevotella, Selenomonas. Грамположительные не образующие спор бактерии относят к роду Bifidobacterium и Lactobacillus. Существуют анаэробы и среди грамположительных (семейства Micrococcaceae и Streptococcaceae), и грамотрицательных (род Veillonella, класс Clostridia) кокков. Бактероиды, превотеллы и фузобактерии — анаэробные грамотрицательные прямые и изогнутые палочки, широко распространенные в природе. Основной средой их обитания являются слизистые оболочки ротовой полости, желудочно-кишечного тракта, мочеполовых путей человека и животных. При определенных условиях эти бактерии могут стать причиной гнойно-воспалительных заболеваний различной локализации: аппендицита, перитонита, сепсиса, парапроктита, гангрены отдельных органов, раневой инфекции и т. п. Очень часто эти процессы вызываются бактероидами, превотеллой и фузобактериями (аспорогенная анаэробная микрофлора) в ассоциации с другими микроорганизмами (факультативные анаэробы и облигатные спорогенные анаэробы). Особенностью течения заболевания при такой микст-инфекции являются быстрота развития процесса, некротизация тканей, признаки выраженной интоксикации, трудности диагностики и лечения. Все это — следствие синергизма, когда патогенные свойства различных микроорганизмов взаимно усиливаются. Довольно редко бактероиды, превотеллы и фузобактерии выделяются из патологического материала в чистой культуре, обычно рост наблюдается в ассоциации с другими бактериями. В чистой культуре эти возбудители чаще выделяются посевом крови при сепсисе и посевом спинномозговой жидкости — при менингите. Важным условием для развития инфекции, вызываемой бактероидами, превотеллами или фузобактериями, служит наличие предрасполагающих факторов, приводящих к снижению уровня кислорода или окислительно-восстановительного потенциала в тканях. Такими факторами могут быть травма, спазмы и сужения сосудов, некроз, сопутствующие инфекции, вызванные другими бактериями. Общими предрасполагающими факторами следует считать также хирургические вмешательства (особенно при операциях на кишечнике или в полости рта), лейкозы, злокачественные новообразования, диабет, артериосклероз, алкоголизм, использование антибиотиков, иммунодепрессантов и кортикостероидов, рентгеновское и гамма-облучение. При лабораторной диагностике заболеваний, вызванных неклостридиальной микрофлорой, можно использовать микроскопический, бактериологический и биологический методы. Для бактериологического исследования берут гной из язв на поверхности тела или из полостей при поражении внутренних органов, трупный материал. Посев производят на специальные среды, инкубируют в анаэробных условиях. Перспективным методом диагностики является газовая хроматография. Лечение проводят антибиотиками, к которым данный штамм чувствителен, в сочетании с парентеральным введением метронидазола (метрогила).
ЗАНЯТИЕ № 8 Дата________________ Тема: МИКРОБИОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА ИНФЕКЦИЙ, ВЫЗЫВАЕМЫХ КОРИНЕБАКТЕРИЯМИ, АКТИНОМИЦЕТАМИ, ЛИСТЕРИЯМИ План занятия 1. Изучение морфологии и культуральных свойств дифтерийной палочки. Макро- и микроскопия культур бактерий. 2. Типы дифтерийных бактерий. Разбор особенностей роста культур соответствующих типов на теллуритовых средах. 3. Биохимические свойства коринебактерий. Дифференциация истинных дифтерийных бактерий от псевдодифтерийных и дифтероидов по биохимическим свойствам. Демонстрация и разбор. 4. Правила взятия и пересылки материала от больного дифтерией для бактериологического исследования. Разбор. 5. Бактериологическая диагностика дифтерии. Разбор схемы исследования дифтеритической пленки (или материала от бактерионосителя). 6. Определение токсигенности дифтерийных бактерий реакцией преципитации в агаре и биопробой на морской свинке. Разбор и демонстрация. 7. Изучение морфологии и культуральных свойств Listeria monocytogenes. 8. Изучить морфологию возбудителя актиномикоза на демонстрационных препаратах. Познакомиться с культуральными особенностями возбудителя актиномикоза. 9. Разобрать схему бактериологической диагностики актиномикозов Методические указания 1. Изучение морфологии и культуральных свойств дифтерийной палочки. Макро- и микроскопия культур бактерий Готовые фиксированные мазки из чистой культуры дифтерийной палочки окрасить синькой Леффлера и по Нейссеру. Дифтерийные бактерии окрашиваются неравномерно, более интенсивно окрашиваются зерна волютина. При окраске синькой Леффлера зерна валютина (зерна Бабеша-Эрнста) красятьс в более темный цвет чем тело, это явление назваеться метахромазией. По способу Нейссера зерна окрашиваются в темно-синий, почти черный цвет, а тело бактерий - желтый. Дифтерийные палочки располагаются под углом друг к другу в виде римской цифры V. Препараты промикроскопировать и зарисовать. Знакомство с характером роста возбудителя дифтерии на свернутой сыворотке, на теллуритовых средах. 2. Типы дифтерийных бактерий. Разбор особенностей роста культур соответствующих типов на теллуритовых средах Разбор особенностей колоний различных типов дифтерийной палочки на теллуритовой среде – форма, размеры, цвет, блеск. Характер их роста на жидких средах - помутнение, осадок, пленка. 3. Биохимические свойства коринебактерий. Дифференциация истинных дифтерийных бактерий от псевдодифтерийных и дифтероидов по биохимическим свойствам. Демонстрация и разбор Знакомство с биохимическими свойствами дифтерийной палочки по биохимическим наборам. Демонстрация и разбор. Заполнить таблицу. Таблица 1. Свойства дифтерийной палочки и близких к ней коринебактерий
Обозначить знаками + или -. Знак + означает наличие признака. Знак – означает отсутствие признака. 4. Правила взятия и пересылки материала от больного дифтерией для бактериологического исследования. Разбор Исследованию подвергаются слизь или пленка из зева, носа, носоглотки, миндалин. Реже исследуется материал с конъюнктивы глаза, со слизистой оболочки половых органов или с поверхности ран. Материал берут двумя стерильным тампоном. Один используют для приготовления препарата- мазка. Другой для бактериологического исследования, его погружают в стерильную пробирку с этикеткой, на которой указаны фамилия, имя, отчество, возраст больного и из какого места (полости) взят материал. Пробирки с материалом помещают в металлические пеналы и с нарочным отправляют в лабораторию для доследования. Разбор методики взятия материала из зева, носа и других мест и посева его при дифтерии. 5. Бактериологическая диагностика дифтерии. Разбор схемы исследования дифтеритической пленки (или материала от бактерионосителя) С помощью стерильного ватного тампона произвести друг у друга забор материала со слизистой зева или носа и сделать посев на сывороточную среду с теллуритом. Произвести макро- и микроскопическое изучение выросших подозрительных колоний. Препараты окрасить синькой Леффлера, по Граму и по Нейссеру. Результаты зарегистрировать в тетради. При обнаружении коринебактерий сделать посев на среды с глюкозой, сахарозой, цистином и мочевиной. Одновременно сделать посев для определения токсигенности бактерий. 6. Определение токсигенности дифтерийных бактерий реакцией преципитации в агаре и биопробой на морской свинке. Разбор и демонстрация. Методика определения токсигенных свойств возбудителя дифтерии преципитацией в агаре заключается в следующем. Полоски фильтровальной бумаги размером 1, 5x8 см, простерилизованные в автоклаве, смачивают антитоксической противодифтерийной сывороткой, разведенной стерильным физиологическим раствором до содержания 500 АЕ в 1 мл. Смоченную сывороткой бумажку стерильным пинцетом переносят на поверхность питательной среды в чашку Петри. Чашку подсушивают в термостате 15-20 минут. Испытуемые культуры засевают бляшками по обе стороны от фильтровальной бумажки. На одну чашку засевают несколько штаммов, один из которых заведомо токсигенный и служит контролем. Чашки с посевом помещают в термостат при температуре 37°С. Результат учитывают в течение 48 часов. В месте взаимодействия антитоксина с токсином образуется линия преципитации. Если исследуемая культура образует токсин, то ее линия преципитации сливается с линией преципитации контрольного штамма, образуя сплошную белую полоску. При неспецифической преципитации линия, образуемая исследуемым штаммом, пересекает или имеет тенденцию к пересечению с линией контрольного штамма. Демонстрация чашек с культурами токсигенной и нетоксигенной дифтерийной палочки. Зарисовать схему определения токсигенных свойств возбудителя дифтерии. Определить токсигенные свойства дифтерийной палочки можно также методом биопробы. Для опыта берут двух морских свинок, накануне одной из них вводят 500-1000 АЕ антитоксической противодифтерийной сыворотки. Затем свинкам вводят подкожно (0, 2 мл) или внутрикожно (0, 1 мл) исследуемую культуру. Если испытуемая культура токсигенна, то при подкожном введении опытная свинка через 2-5 дней погибает. При вскрытии обнаруживается отек в месте введения культуры, экссудат в брюшной и грудной полостях и в перикарде. Особенно характерным симптомом является увеличение и гиперемия надпочечников. Контрольная свинка остается живой. При внутрикожном введении токсигенной культуры у опытной свинки в месте инъекции наблюдается покраснение, отечность, а в дальнейшем - некроз. У контрольной морской свинки никаких изменений не отмечается. 7.Изучение морфологии и культуральных свойств Listeria monocytogenes Промикроскопировать готовый препарат-мазок из культуры листерий, окршенный по Граму и зарисовать. Знакомство с характером роста возбудителя листериоза на сывороточном МПА, сахарном МПБ. 8. Изучить морфологию возбудителя актиномикоза на демонстрационных препаратах. Познакомиться с культуральными особенностями возбудителя актиномикоза. Промикроскопировать готовый препарат-мазок из чистой культуры актиномицетов и друзу актиномицета, окршенный по Граму и зарисовать. Знакомство с характером роста возбудителя актиномикоза на среде Сабуро.
Контрольные вопросы 1. Какие микробиологические методы применяются для диагностики дифтерии? 2. Какой материал берется для исследования при подозрении на дифтерию и при обследовании на бактерионосительство? 3. Какие морфологические признаки присущи дифтерийной палочке? 4. Каковы тинкториальные особенности возбудителя дифтерии? 5. По каким признакам дифференцируют типы гравис, митис и интермедиус? 6. По каким биохимическим признакам отличают дифтерийную палочку от дифтероидов? 7. В чем заключается сущность пробы Пизу? 8. Какими методами и как определяют токсигенность возбудителя дифтерии? 9. Каковы пути и способы заражения дифтерией? 10. Какова роль дифтерийного батерионосительства в эпидемиологии дифтерии? 11. Как используют РПГА для обнаружения в сыворотке детей антитоксина? 12. Почему для микробиологической диагностики дифтерии необходимо выделение чистой культуры возбудителя и изучение его свойств? 13. Каковы морфологические, тинкториальные, кулътуральные и биохимические признаки листерий? 14. Какие методы микробиологической диагностики применяют при листериозе? 15. Как проводится бактериологическая и серологическая диагностика листериоза? 16. Какими факторами патогенности обладает возбудитель дифтерии? 17. Каковы способы и пути передачи возбудителя дифтерии? 18. Что поражает (какие органы и системы органов) дифтерийный токсин? 19. Каковы особенности генетического контроля синтеза токсина у возбудителя дифтерии? 20. Каковы природа и структура дифтерийного токсина? 21. Каков молекулярный механизм действия дифтерийного токсина и какой процесс в клетке он блокирует? 22. Каким образом осуществляется активация дифтерийного токсина? 23. Каким образом возможно превращение нетоксигенной дифтерийной бактерии и токсигенную? 24. Каковы особенности современной классификации дифтерийных бактерий, и какие критерии с этой целью используются? 25. Каковы морфологические, тинкториальные и кулътуральные признаки актиномицетов? 26. Какие методы микробиологической диагностики применяют при актиномикозов? 27. Как проводится бактериоскопический, бактериологическая и серологическая диагностика актиномикоза? 28. Какими факторами патогенности обладает возбудитель актиномикоза? ПРИЛОЖЕНИЕ К ЗХАНЯТИЮ № 8 МЕТОДЫ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКИ ДИФТЕРИИ А. Бактериологический
МЕТОДЫ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКИ ЛИСТЕРИОЗА А. Бактериоскопический Имеет второстепенное значение, в связи с отсутствием морфологических особенностей. Применяют для изучения органов павших животных, а также новорожденных, погибших от листериоза. Готовят мазки-отпечатки, фиксируют смесью Никифорова, окрашивают по Романовскому-Гимзе или по Граму. Листерии имеют вид грамположительных коротких, умеренно толстых палочек, иногда нитей или кокков, расположенных одиночно или в форме частокола. Б. Бактериологический (на ранних стадиях заболевания). Материал для исследования на листерии — кровь, СМЖ, слизь из зева, пунктаты увеличенных лимфатических узлов, у новорождённых дополнительно — меконий, пупочная кровь; секционный материал (кусочки мозга, печени, селезёнки, лимфатические узлы). Посевы рекомендуют делать в первые 7-10 сут. болезни. Кровь и СМЖ засевают на плотные среды (глюкозный, глюкозо-печёночный или КА с глюкозой), в 100-200 мл глюкозного, глюкозно-печеночного или глюкозно-глицеринового бульона. Материал плотной консистенции эмульгируют в изотоническом растворе хлорида натрия и сеют на глицериновый или кровяной агар с теллурита калия или полимиксина (1-5 мкг / мл). Если изучаемый материал очень загрязнен посторонней микрофлорой, лучше сначала ввести его белым мышам или гвинейским свинкам и после их гибели печени и селезенки сделать мазки-отпечатки и посевы. Засеяны среды инкубируют при 37° С в течение 7 суток, ежедневно контролируя наличие роста путем бактериоскопии. Выросшие колонии отбирают для дальнейших исследований по наличию гемолитической активности (на средах с кровью) либо по способности приобретать сине-зелёную окраску при косом освещении. Идентификацию выделенных культур осуществляют по морфологическим, тинкториальным, культуральным, биохимическим, антигенным свойствам. Листерии каталазоположительны, ферментируют до кислоты глюкозу, мальтозу, салицин, не разлагаются маннит и глицерин. Свежие культуры дают положительную конъюнктивальную пробу в гвинейских свинок. Через 2 часа после внесения капли бульонной культуры листерий в конъюнктивальный мешок развивается гнойное воспаление конъюнктивы. В. Серологический Проводят со второй недели заболевания. С сывороткой крови больного и стандартным антигеном ставят РСК (диагностический титр 1: 5 и выше). Применяют РНГА (для выявления хронического листериоза). AT сохраняются не менее 1 - 2лет после выздоровления (реакция может быть использована для ретроспективного анализа). Г. Биологический Для биологической диагностики листериоза лучше всего использовать белых мышей, иммуносупрессированных введением кортизона (4-5 мг в/м за 4 ч до заражения). После гибели животного (обычно на 2-6-е сутки) проводят посев материала из различных органов. Следует помнить, что листе-рии размножаются в мёртвых тканях, и для избежания диагностических ошибок часть патологического материала следует поместить в стерильные пробирки и хранить в течение 5 - 10 сут при температуре 4-6° С, а затем подвергнуть повторному исследованию. Д. Ускоренная диагностика ПЦР. Применяют тест-ситемы для определения вирулентных Listeria monocytogenes в клинических образцах, молоке и других пищевых продуктах. В качестве праймера ичпользуют последовательность генов листериолизина О. Чувствительность метода – 5-50 клеток в пробе.
МЕТОДЫ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКИ АКТИНОМИКОЗА А. Бактериоскопический Бактериоскопию проводят для выявления друз. Наиболее распространённый метод лабораторной диагностики актиномицетов — обнаружение друз A. israelii в экссудате или гнойном отделяемом из очагов поражения. Последние могут достигать значительных размеров, образуя так называемые серные гранулы или тельца Боллингера размером в среднем 0, 3-2 мм. Для поиска более мелких друз исследуемый материал (гнойное отделяемое, мокрота, биоптаты и СМЖ) помещают на предметное стекло в каплю 10-20% раствора КОН или NaOH, подогревают, покрывают покровным стеклом и микроскопируют. Друзы актиномицетов имеют плотную, каменистую консистенцию и скрипят как песок при надавливании на покровное стекло. Друзы актиномицетов также можно исследовать методом «раздавленной» капли либо в препаратах, окрашенных по Романовскому-Гимзе или Граму. Они образованы агрегатами мицелия, имеющими вид округлых или овальных базофильных масс с эозинофильными включениями (очевидно, что это AT) на поверхности. Б. Бактериологический Патологический материал от больных, как правило, загрязнен посторонней микрофлорой. Для избавления от нее материал центрифугируют в растворе пенициллина и стрептомицина, затем отмывают от антибиотиков 0, 85% раствором NaCl. Для освобождения от сопутствующей флоры можно внести в пробирку 50% раствор глицерина и выдержать 2-3 суток при 37 ° С. Для выделения чистых культур актиномицетов проводят посев на кровяной и сывороточный агары, среды Сабуро или Чапека, тиогликолевую среду, сердечно-мозговой МПА. Посевы актиномицетов инкубируют в аэробных и анаэробных условиях в течение 1 - 2 нед. По периферии образующихся микроколоний имеются многочисленные ветвящиеся нити. Через 1-2 недели формируются плоские морщинистые или бугристые зрелые колонии. Идентификация выделенной культуры проводится по совокупности биологических свойств. В. Серологический Серологическая диагностика проводится редко. Используют реакции связывания комплемента и непрямой гемагглютинации. Антигеном служит актинолизат. Но обе реакции могут давать положительные результаты и при других заболеваниях (рак легких, тяжелые гнойные процессы). Несколько большее диагностическое значение имеют иммунологические тесты: реакция торможения миграции лейкоцитов и аллергическая проба с актинолизатом, а также количественное определение иммунокомпетентных клеток. Внутрикожная проба при висцеральном актиномикозе часто бывает отрицательный. Г. Аллергический Аллергическую пробу со стандартным корпускулярным антигеном, или антигеном, полученным путем кислотного гидролиза культуры листерий, ставят на 6-9-й день заболевания. Его вводят внутрикожно в объеме 0, 1 мл. Результат учитывают через 24-48 часов. Пробу считают положительной, если возникает гиперемия кожи и инфильтрат диаметром 1-2 см. ЗАНЯТИЕ № 9 Дата________________ Тема: МИКРОБИОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА ТУБЕРКУЛЕЗА, МИКОБАКТЕРИОЗОВ, ЛЕПРЫ План занятия 1. Правила взятия и пересылки в лабораторию патологического материала от больного туберкулезом. 2. Морфология туберкулезных бактерий - микроскопия готовых препаратов. 3. Культуральные свойства туберкулезных бактерий. Рост туберкулезной палочки на жидких и твердых питательных средах (демонстрация). 4. Бактериоскопическая диагностика туберкулеза. Микроскопия материала с окраской по Цилю-Нильсену. Методы обогащения. 5. Бактериологическая диагностика туберкулеза. Применение метода микрокультур (метод Прайса) для ускоренной диагностики туберкулеза (разбор и демонстрация). 6. Палочка проказы - микроскопия готовых препаратов. 7. Изучение иммунопрепаратов, применяемых для диагностики и профилактики туберкулеза.
Методические указания 1. Правила взятия и пересылки в лабораторию патологического материала от больного туберкулезом Материалом для исследования чаще служит мокрота. Реже используются моча, гной, спинномозговая жидкость, испражнения. Материал собирают в стерильную баночку, закрывают пробкой. К присылаемому на анализ материалу прилагается бланк лечебного учреждения, в котором четко указывается название материала, цель исследования и предполагаемый диагноз. Кроме того, указывается фамилия, имя, отчество и возраст больного. 2. Морфология туберкулезных бактерий - микроскопия готовых препаратов Промикроскопировать готовые препараты-мазки туберкулезных бактерий, окрашенных по Цилю-Нильсену. Препараты зарисовать.
3. Культуральные свойства туберкулезных бактерий. Рост туберкулезной палочки на жидких и твердых питательных средах (демонстрация) Демонстрация роста туберкулезных бактерий на глицериновом бульоне, яичной среде Петраньяни и других средах. 4. Бактериоскопическая диагностика туберкулеза. Микроскопия материала с окраской по Цилю-Нильсену. Методы обогащения Перед исследованием мокроту выливают в чашку Петри, поставленную на темном фоне. Из мокроты необходимо выбрать гнойные комочки, приготовить препарат-мазок, окрасить по Цилю-Нильсену. Промикроскопировать, обратив внимание на наличие прямых или слегка изогнутых тонких палочек, часто зернистых, расположенных одиночно или группами. Палочки окрашены в красный цвет, а лейкоциты, посторонние бактерии и слизь - в синий. Препарат зарисовать. Если содержание туберкулезных бактерий настолько мало, что их не удается обнаружить в мазках, поэтому ранее широко пользовались одним из методов обогащения - методом осаждения или методом флотации. Метод осаждения. К мокроте добавляют равное по объему количество однопроцентного едкого натра, плотно закрывают склянку и встряхивают ее в течение 5-15 минут до полного растворения мокроты, центрифугируют, сливают жидкость, осадок нейтрализуют 1-2 каплями десятипроцентного раствора соляной кислоты. Из осадка, в котором сконцентрированы туберкулезные бактерии, приготовляют мазки, окрашивают по Цилю-Нильсену и микроскопируют. Метод флотации. Мокроту помещают во флакон или колбу с резиновой пробкой емкостью в 250 мл, добавляют равное количество 0, 5-1% едкого натра, встряхивают 5-10 минут до полной гомогенизации. Колбу помещают в водяную баню и прогревают при 55°С в течение 30 минут, затем добавляют около 100 мл дистиллированной воды и 1-2 мл ксилола, бензина или газолина. Смесь встряхивают в течение 5-10 минут, еще вливают в колбу около 100 мл дистиллированной воды (до установления уровня жидкости в узкой части горловины) и оставляют при комнатной температуре на 20-30 минут. Образовавшийся сливкообразный слой переносят пипеткой на предметное стекло, которое кладут на крышку водяной бани, нагретой до 60°С. На высохший мазок наносят новые порции материала до тех пор, пока весь флотационный экстракт не будет перенесен на предметное стекло. Сухой препарат промывают эфиром для удаления ксилола или бензина, фиксируют на пламени, красят по Цилю-Нилъсену и микроскопируют. 5. Бактериологическая диагностика туберкулеза. Применение метода микрокультур (метод Прайса) для ускоренной диагностики туберкулеза (разбор и демонстрация) Знакомство с методом микрокультур (метод Прайса) для ускоренной диагностики туберкулеза. Демонстрационный препарат микрокультуры туберкулезной палочки промикроскопировать и зарисовать. Микрокультура возбудителя туберкулеза выглядит в виде тяжей или скоплений, похожих на канат или косу и состоящих из туберкулезных палочек. 6. Палочка проказы - микроскопия готовых препаратов Промикроскопировать и зарисовать готовые препараты палочки проказы. В отличие от туберкулезной палочки возбудитель проказы располагается параллельными рядами (в виде пачек сигар), преимущественно внутри клеток. 7. Ознакомление с составом и назначением следующих иммунопрепаратов: туберкулин Коха, очищенный туберкулин РРD-L, вакцина БЦЖ. Методы микробиологической диагностики туберкулеза А. Бактериоскопический
Б. Бактериологический
В. Биологический
Г. Аллергический – Проба Манту, Пирке.
Контрольные вопросы 1. Каковы морфологические особенности туберкулезной палочки? 2. Каковы тинкториальные свойства возбудителя туберкулеза? 3. Как растут туберкулезные палочки на жидких и твердых питательных средах? 4. Какие существуют типы туберкулезной палочки, и какова их роль в патологии человека? 5. По каким свойствам различают патогенные типы туберкулезных палочек? 6. Как классифицируют микобактерии по скорости роста и фотоактивации пигментообразования? 7. Почему возбудители туберкулеза относительно устойчивы к воздействию внешних факторов? 8. Какие лабораторные животные чувствительны к туберкулезной палочке? 9. Как происходит заражение человека туберкулезом? 10. Каков характер фагоцитоза при туберкулезе? 11. Какова природа иммунитета при туберкулезе? 12. Какую роль играют лимфоциты в реакции повышенной чувствительности замедленного типа при туберкулезе? 13. Какова природа туберкулина, его назначение и применение? 14. Каковы факторы патогенности туберкулезной палочки? 15. Какие микробиологические методы применяются для диагностики туберкулеза? 16. Как осуществляется бактериоскопическая диагностика туберкулеза? 17. Какие методы используют для обогащения материала при бактериоскопической диагностике туберкулеза? 18. Как ставится биологическая проба для диагностики туберкулеза? 19. Как осуществляется ускоренная диагностика туберкулеза (метод микрокультур)? 20. Каково значение туберкулиновых проб в диагностике туберкулеза? 21. Какие препараты применяются для диагностики и специфической профилактики туберкулеза? 22. Что такое микобактериозы? Их возбудители? 23. Каковы морфологические свойства возбудителя проказы? 24. Какие микробиологические методы используются для диагностики проказы? 25. Какие методы применяются для дифференциации палочки Гансена от туберкулезной палочки? 26. Какие иммунологические реакции используются для диагностики проказы? 27. По каким признакам отличают истинные туберкулезные бактерии от потенциально патогенных и сапрофитных микобактерий? 28. Почему необходимо определять чувствительность туберкулезных бактерий к антибиотикам?
ПРИЛОЖЕНИЕ К ЗАНЯТИЮ 9 А. Микобактерии, потенциально патогенные для человека: M. africanum M. intracellulare M. paratuberculosis M. asiaticum M. kansasii M. scrofulaceum M. avium M. leprae M. senegalense M. bovis M. lepraemurium M. szulgai M. chelonei M. malmoense M. tuberculosis M. farcinogenes M. marinum M. ulcerans M. fortuitum M. microti M. xenopi M. haemophilium M.porcinum M. vaccae Б. Схема идентификации микобактерий Скорость роста субкультур Медленно растущие Быстро растущие (свыше 7 дней) (менее 7 дней) Пигментообразование Нехромогенные Хромогенные Образование ниацина Ниацинпозитивные Ниациннегативные Фотоактивация пигментообразования Нет эффекта Фотохромогены Скотохромогены Mycobacterium tuberculorsis относится к медленно растущим нефотохромогенным ниацинпозитивным микобактериям. Mycobacterium bovis относится к медленно растущим нефотохромогенным ниациннегативным микобактериям. Для идентификаций других патогенных для человека микобактерий используются дополнительные тесты. В. Методы дифференцирования истинных туберкулезных бактерий от потенциально патогенных и сапрофитных микобактерий
ЗАНЯТИЕ № 10 Дата________________ Тема: МИКРОБИОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЕЙ ИППП (серологический, молекулярно-биологический методы) План занятия 1. Знакомство с классификацией возбудителей ИППП. 2. Микроскопия препарата-мазка окрашенного по Рамоновскому-Гимза, изучение морфологических и тинкториальных свойств возбудителя сифилиса. 3. Знакомство с особенностями серологической и бактериологической диагностики сифилиса. 4. Промикроскопировать мазки из гнойного отделяемого уретры больного гонореей окрашенных по Граму и метиленовой синькой. 5. Изучение морфологии возбудителя трихомониаза. Методические указания |
Последнее изменение этой страницы: 2017-04-12; Просмотров: 687; Нарушение авторского права страницы
Среда с теллуритом
Микроскопия
окраска по Граму, по Нейссеру и синькой Леффлера,
Свернутая
сыворотка
Определение токсигенности
преципитацией в агаре
Биохимические свойства – среды с глюкозой, сахарозой, крахмалом, цистином, мочевиной
Фаготипирование
Определение серотипа
Посев на среды
Цитратная кровь
(3-7 дней)
Определение чувствительности
к антибиотикам
Заражение морской свинки