Серологическая диагностика сифилиса

Микрореакция преципитации

Микрореакцию преципитации ставят с кардиолипиновым антигеном. Принцип реакции заключается в том, что при добавлении к плазме или сыворотке крови больного сифилисом эмульсии кардиолипинового антигена образуется преципитат (комплекс антиген-антитело), который осаждается в виде хлопьев белого цвета. Пользуются такой методике: в лунку пластины вносят пипеткой три капли плазмы (или инактивированной сыворотки), затем добавляют одну каплю эмульсии стандартного кардиолипинового антигена. Компоненты реакции смешивают встряхиванием пластины в течение 5 мин, после чего добавляют три капли 0, 9% раствора хлорида натрия и оставляют при комнатной температуре еще на 5 мин. Обязательном контроле со слабоположительный сывороткой крови. Результаты оценивают невооруженным глазом над искусственным источником освещения. При появлении в лунке крупных хлопьев реакцию считают положительной (4 +, 3 +), средних и мелких - как слабоположительные (2 +, 1 +). При отрицательном результате преципитат не образуется. Микрореакцию преципитации можно проводить и количественным методом для установления титра преципитирующих антител и оценки на этой основе эффективности лечения. Более высокие титры МРП получают с плазмой, чем с сывороткой. За рубежом аналогом МРП с сывороткой больного является VDRL (Veneral disease research laboratoiy), а с плазмой - RPR (Rapid plasma reagin).

Реакция иммунофлюоресценции (РИФ)

К группе специфических реакций, которые широко употребляются для серологической диагностики сифилиса, относится непрямая реакция иммунофлюоресценции. Как антиген, в ней используют взвесь патогенных бледных трепонем штамма Никольса из паренхимы яичек кролика на 7-й день после заражения. Реакцию ставят в двух модификациях: РИФ-АБС и РИФ-200. В первом варианте используют сорбент антител (соникат) - ультраозвучений трепонемный антиген для РСК. При варианте РИФ-200 сыворотку больного разводят в 200 раз с целью снять влияние групповых протитрепонемних антител. Постановку РИФ-АБС проводят на тонких, хорошо обезжиренных предметных стеклах. На обратной стороне стекол стеклорезом обозначены 10 кружочков диаметром 0, 7 см. В рамках кружка на стекло наносят антиген - взвесь бледных трепонем - в таком количестве, чтобы в поле зрения их было 50-60. Мазки высушивают на воздухе, фиксируют над пламенем и 10 мин в ацетоне. В отдельную пробирку вносят 0, 2 мл сорбента (соникату) и 0, 5 мл сыворотки крови больного, хорошо перемешивают. Смесь наносят на мазок (антиген) так, чтобы равномерно его покрыть, выдерживают 30 мин во влажной камере при 37° С (II фаза реакции). После этого мазок промывают фосфатным буфером, высушивают и наносят на него антишобулинову флуоресцентных сыворотку на 30 мин, ставят во влажную камеру при 37° С (II фаза). Препарат вновь промывают фосфатным буфером, высушивают и исследуют под люминесцентным микроскопом. При положительной реакции бледные трепонемы излучают золотисто-зеленый свет, при отрицательной - не светятся. Техника постановки РИФ-200 такое же, как и РИФ-АБС, только сыворотку крови больного предварительно разводят в 200 раз фосфатным буфером. При проведении реакции иммунофлюоресценции со спинномозговой жидкостью больного сифилисом нервной системы используют РИФ-ц и РИФ-10, т.е. ликвор вводят в реакцию неинактивованим и разведенным, или разведенным 1: 10.

Реакция имобилизации бледных трепонем (PИБT)

Реакция имобилизации бледных трепонем (PИT) основан на феномене потери их подвижности в присутствии иммобилизирующие протитрепонемних антител сыворотки больного и комплемента в условиях анаэробиоза. Как антиген в реакции используют взвесь бледных трепонем из тестикулярной ткани кролика, зараженного лабораторным штаммом Никольса. Взвесь разводят стерильным 0, 85% раствором хлорида натрия так, чтобы в поле зрения было 10-15 спирохет. Для проведения реакции в стерильной пробирке смешивают 0, 05 мл сыворотки крови больного, 0, 35 мл антигена и 0, 15 мл комплемента. Опыт сопровождают контролями сыворотки, антигена и комплемента. Пробирки помещают в анаеростат, создают анаробни условия и выдерживают в термостате 18-20 ч при температуре 35° С. Затем из каждой пробирки готовят препарат надавленные капли, подсчитывают не менее 25 трепонем и отмечают, сколько из них подвижных и сколько неподвижных. Процент специфической иммобилизации бледных трепонем подсчитывают по формуле: х = (А-В) / В * 100, где X - процент иммобилизации, А - число подвижных трепонем в контрольной пробирке, В - число подвижных трепонем в опытной пробирке. Реакция считается положительной, когда процент иммобилизации составляет 50 и более, слабоположительный - от 30 до 50, сомнительной - от 20 до 30 и отрицательной - от 0 до 20. В практических лабораториях используют более простой меланжерний метод PIT за М.М. Овчинниковым. Анаэробные условия опыта создаются помещением реагирующей смеси (сыворотки, антиген, комплемент) в меланжеры, оба конца которого закрывают резиновым кольцом. Меланжерна методика позволяет обойтись без сложного оборудования и аппаратуры для создания анаэробиоза, но дает такие результаты, которые не посту паються классической микроанаеростатний методике. Реакции иммобилизации трепонем и иммунофлуоресценции считают наиболее специфичными в серологической диагностике сифилиса. И все же, PIT, несмотря на ее специфичность, не рекомендуют для использования в широкой практике из-за трудоемкости постановки.

Иммуноферментный анализ (ИФА)

Иммуноферментный анализ (ИФА) проводят как с кадриолипиновим антигеном (неспецифическая, отборочная реакция), так и трепонемным (специфическая реакция), которая подтверждает диагноз сифилиса. Принцип непрямого метода ИФА заключается в том, что в антигена, адсорбированного на твердой фазе в лунках планшета вносят исследуемую сыворотку. Если она содержит антитела против трепонем, образуется комплекс антиген-антитело (II фаза). После отмывания несвязанных неспецифических антител в лунки вносят антиглобулинову сыворотку, конъюгированные с ферментом (чаще всего с пероксидазой хрена). Конъюгат прочно присоединяется к комплексу антиген-антитело (II фаза). После отмывания несвязанного конъюгата в лунки добавляют окрашивающий субстрат ОФД - ортофенилендиамин (III фаза). Пероксидазную реакцию останавливают, добавляя серную кислоту. Для контроля ставят такие же пробы с положительным и заведомо отрицательной сыворотками. Учет результатов анализа проводят с помощью фотометра, который определяет оптическую плотность в двухволновом режиме (492 нм и 620 нм). Для постановки реакции ензиммичених антител, кроме фотометра, нужны одно-и восьмиканальные автоматические пипетки с полипропиленовым наконечником и соответствующие наборы диагностических тест-систем. Метод ИФА находит широкое применение в серологической диагностике сифилиса. Он одинаково эффективен для выявления болезни в инкубационном периоде (через 1-2 недели после инфицирования), при клинических проявлениях болезни и скрытых его формах. Очень часто ИФА используют при скрининговых обследованиях населения, особенно на станциях переливания крови. В лабораторной практике иногда применяют также реакцию иммунной прилипания (РИП) и реакцию непрямой гемагглютинации (РНГА). Первая из них основывается на том, что патогенные тестикулярные трепонемы штамма Никольса при смешивании с сывороткой больного в присутствии комплемента и эритроцитов человека прилипают к поверхности красных кровяных телец. РНГА достаточно широко используется для диагностики сифилиса благодаря своей методической простоте. Она становится положительной уже через три недели после заражения. Положительный результат реакции остается годами после выздоровления. Аналогом этой реакции за рубежом является ТРНА (Treponema pallidum haemoagglutination).

Прямой тест на Т. pallidum с флюоресцентными антителами (DFA-TP)

Использует флюоресцеинконъюгированные АТ для окраски организма в мазках и срезах тканей. DFA-TP не требует подвижных организмов, является более чувствительным и специфичным, но более дорогим и технически сложным, чем темнопольная микроскопия. На чувствительность обоих микроскопических методов может отрицательно повлиять давность возникновения или состояние повреждения, а также то, получал ли пациент лечение.

Биологический метод диагностики (RIT - заражение материалом от больных кроликов), несмотря на его высокую чувствительность, применяется весьма ограничено из-за таких факторов, как длительность получения результатов и высокая стоимость. Он практически не используется в настоящее время.

Полимеразная цепная реакция. К прямым методам определения Т. pallidum относятся методы, базирующиеся на амплификации нуклеиновых кислот, такие как ПЦР, которые могут определять наличие всего 10 трепонем в повреждениях, тканях плаценты и других тканях организма. Они существенно улучшили чувствительность и специфичность прямых методов детекции. Множественный ПЦР с одновременным определением Т. pallidum, вируса герпеса типа 2 и Haemophilis ducreyi используется для постановки этиологического диагноза у пациентов с GUD (genital ulcer disease), а также для обоснования алгоритмов синдромного лечения. Однако ПЦР-методики для сифилиса остаютьсякоммерчески недоступными, из-за дороговизны праймеров для ПЦР-диагностики.

ЗАНЯТИЕ № 11

Дата________________

Тема: ЧАСТНАЯ МЕДИЦИНСКАЯ БАКТЕРИОЛОГИЯ. ИТОГОВЫЙ КОНТРОЛЬ

Вопросы к итоговому занятию по частной медицинской микробиологии

для студентов 2 курса стоматологического факультета

 

1. Стафилококки. Морфологические, культуральные свойства. Факторы патогенности.

2. Экзотоксины стафилококков, разновидности, механизм действия.

3. Бактериологическая диагностика стафилококковых заболеваний.

4. Заболевания, вызываемые стафилококками.

5. Стрептококки, морфологические, тинкториальные, культуральные свойства. Классификация по отношению к эритроцитам.

6. Заболевания, вызываемые стрептококками. Роль стрептококков в развитии кариеса и других заболеваний полости рта.

7. Факторы патогенности стрептококков. Особенности патогенеза стрептококковых заболеваний.

8. Бактериологическая диагностика стрептококковых заболеваний.

9. Основные свойства энтерококков, роль в патологии человека.

10. Менингококки, основные свойства, вызываемые заболевания.

11. Гонококки, основные свойства, вызываемые заболевания.

12. Микробиологическая диагностика менингококковой инфекции.

13. Микробиологическая диагностика гонококковой инфекции.

14. Микоплазмы, основные свойства, роль в патологии человека.

15. Коринебактерии дифтерии, основные свойства. Экзотоксин, действие на организм.

16. Патогенез и клинические проявления дифтерии.

17. Микробиологическая диагностика дифтерии.

18. Актиномицеты, основные свойства, значение в стоматологии.

19. Микобактерии, основные свойства, патогенные виды, классификации по скорости роста и фотоактивации пигментообразования.

20. Туберкулезная палочка, особенности химического состава, факторы патогенности.

21. Особенности патогенеза и иммунитета при туберкулезе.

22. Микробиологическая диагностика туберкулеза.

23. Возбудитель проказы, основные свойства. МБ диагностика проказы.

24. Облигатные (строгие) анаэробы, состав группы. Распространенность в полости рта.

25. Клостридии, основные свойства, вызываемые ими заболевания.

26. Методы культивирования строгих анаэробов.

27. Причины чувствительности строгих анаэробов к молекулярному кислороду воздуха.

28. Сальмонеллы, основные свойства, вызываемые заболевания.

29. Классификация пищевых отравлений.

30. Представители каких семейств бактерий вызывают пищевые токсикоинфекции?

31. Антигенная классификация сальмонелл Кауфмана-Уайта.

32. Микробиологическая диагностика заболеваний, вызываемых сальмонеллами.

33. Шигеллы, основные свойства, классификация.

34. Особенности патогенеза и клиники дизентерии.

35. Микробиологическая диагностика дизентерии.

36. Биологическое, санитарное и медицинское значение кишечной палочки.

37. Эшерихиозы, определение понятия, классификация по категориям.

38. ETEC, факторы патогенности, особенности патогенеза и клиники.

39. EIEC, факторы патогенности, особенности патогенеза и клиники.

40. EPEC, факторы патогенности, особенности патогенеза и клиники.

41. EHEC, факторы патогенности, особенности патогенеза и клиники.

42. Микробиологическая диагностика эшерихиозов.

43. Холерный вибрион, основные свойства.

44. Факторы патогенности холерного вибриона. Холероген, структура, механизм действия.

45. Антигенные свойства холерного вибриона, серовары.

46. Отличия холерного вибриона от холероподобных вибрионов.

47. Особенности 7-й пандемии холеры.

48. Микробиологическая диагностика холеры.

49. Принципы лечения острых диарейных заболеваний.

50. Возбудитель сифилиса, морфология, основные свойства.

51. Особенности иммунитета при сифилисе. Клинические проявления сифилиса в полости рта.

52. Методы микробиологической диагностики сифилиса.

53. ИППП, возбудители, особенности эпидемиологии и клиники.

54. Возбудители уреаплазмоза и урогенитального хламидиоза. Общая характеристика.

 

 

ЗАНЯТИЕ № 12

Дата________________

Тема: ПАРОДОНТОПАТОГЕННАЯ МИКРОФЛОРА. МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ ИЗУЧЕНИЯ МИКРОФЛОРЫ ПРИ БОЛЕЗНЯХ ПАРОДОНТА. ТАКТИКА АНТИБАКТЕРИАЛЬНОЙ ТЕРАПИИ АНАЭРОБНОЙ ИНФЕКЦИИ ЧЕЛЮСТНО-ЛИЦЕВОЙ ОБЛАСТИ

План занятия

1. Разбор основных форм воспалительных заболеваний пародонта, их классификация.

2. Знакомство с особенностями взятия материала при заболеваниях пародонта.

3. Морфология пародонтопатогенных бактерий. Микроскопия препаратов-мазков из культур патогенных анаэробов.

4. Микробиологический диагноз инфекций пародонта. Бактериологическое исследование воспалительных заболеваний полости рта и челюстно-лицевой области.

Методические указания

1. Разбор основных форм воспалительных заболеваний парадонта, их классификация.

Сформулировать и записать определения основных форм воспалительных заболеваний пародонта

Гингивит _______________________________________________________

__________________________________________________________________

Пародонтит_____________________________________________________

__________________________________________________________________

Пародонтоз _____________________________________________________

__________________________________________________________________

Какие воспалительные заболевания пародонта не перечислены выше, назовите и дайте определение.

2. Знакомство с особенностями взятия материала

при заболеваниях пародонта

Особенности забора материала от больного заболеваниями пародонта связаны с тем, что большинство возбудителей является строгими анаэробами. Гнойный экссудат из закрытого очага (абсцесс) забирают шприцом, иглу которого после забора материала втыкают в резиновую пробку и как можно быстрее доставляют в лабораторию. Рекомендуется использовать специальные транспортные среды, ограничивающие размножение микробов и содержащие вещества, редуцирующие свободный кислород (тиогликолевая, среды Стюарта).

Забор десневой жидкости

Из десневого желобка, патологического десневого кармана десневую жидкость можно брать маленькой стерильной кюретажной ложечкой, скейлером. Десневую жидкость можно собирать по принципу капиллярности стерильной микропипеткой, стерильными фильтровальными полосками, стерильными нитками.

Забор материала из десневого кармана для бактериоскопического

исследования

В десневом кармане часть бактерий находится в фиксированном, состоянии на поверхности корня (зубная бляшка), а другие - в свободном состоянии в десневой жидкости. Поэтому забор материала можно проводить на целлулоидные узкие пластинки, которые осторожно вводят в карман и прижимают к поверхности корня со стороны десны. С внутренней стороны пластинки прилипают микробы с корневой части зуба, с наружной - свободно находящиеся в десневой жидкости микробы.

С удаленных зубов можно сделать соскобы или приготовить гистологические срезы.

Субгингивальную зубную бляшку из пародонтального кармана можно получить острым зондом, ортодонической заостренной проволокой. Перед посевом ее необходимо дезинтегрировать, т.к. точность определения количества и видов бактерий в бляшке зависит от тщательности дисперсии материала.

3. Проведите микроскопическое исследование соскоба со слизистой оболочки десны, полученного от больного с клиническим диагнозом: «катаральный гингивит» (окраска по Граму), зарисовать.

Для микроскопического исследованиявзятого материала используют темнопольную, иммерсионную и люминесцентную микроскопии.

Проведите микроскопическое исследование материала, полученного от больного с клиническим диагнозом: «катаральный гингивит». Полученные результаты зарисовать.

Рис.1. Микропрепарат от больного катаральным гингивитом. Окраска по Граму.

Гингивит характеризуется воспалением слизистой оболочки десны, обусловленным неблагоприятным воздействием как местных, так и общих факторов и протекает без нарушения целостности зубоэпителиального прикрепления, т.е. без образования зубодесневых карманов.

При развитии патологического процесса наблюдается превалирование грамотрицательных микроорганизмов (фузобактерии, бактероиды, кампилобактерии) над грамположительными (стрептококками).

Фузобактерии- веретенообразные тонкие палочки с заостренными концами. Размер 0, 5-1x2-3 мкм. В мазках располагаются одиночно, реже образуют короткие цепочки из 2 или 3 клеток. Грамотрицательные.

Бактероиды - прямые или изогнутые палочки, размер 0, 5-0, 8x1-2 мкм. В мазках располагаются одиночно, парами или небольшими цепочками. Грамотрицательные.

Кампилобактерии- тонкие спиральные клетки диаметром 0, 2-0, 5 мкм и длиной 0, 5-5, 0 мкм. Могут иметь один или больше витков спирали и достигать длины 8 мкм. Характерна такжеS-образная форма и форма типа крыльев чайки, возникающие при соединении двух клеток в короткую цепочку. Грамотрицательные.

Стрептококки– сферические клетки размером 0, 5-2, 0 мкм. В мазках распологаются парами или цепочками. Грамположительные.

4. Микробиологический диагноз инфекций пародонта. Бактериологическое исследование воспалительных заболеваний полости рта и челюстно-лицевой области.

Основная роль в развитии воспалительных заболеваний полости рта и челюстно-лицевой области принадлежит неспорообразующей анаэробной и микроаэрофильной резидентной микрофлоре полости рта. Поэтому при бактериологической диагностике проводят поэтапное исследование патологического материала в аэробных и анаэробных условиях, с обязательным определением концентрации микроорганизмов в исследуемом материале.

Материалом для бактериологического исследования служат кусочки пораженных тканей и отделяемое, полученные из глубины раны, пунктаты из ограниченных очагов воспаления (абсцессов, флегмон). При взятии материала необходимо исключить их контаминацию посторонней микрофлорой. Взятый исследуемый материал должен быть защищен от токсического действия молекулярного кислорода, поэтому при их доставке в лабораторию необходимо соблюдать следующие: 1) при большом количестве гнойного отделяемого (5-7 мл) его транспортируют в стерильной пробирке закрытой резиновой пробкой или непосредственно в шприце; 2) при небольшом количестве исследуемого материала его забирают с помощью шприца или стерильного ватного тампона и немедленно помещают в транспортную питательную среду. Можно также использовать для доставки материала в лабораторию флаконы или пробирки, заполненные инертным газом или бескислородной газовой смесью.

Концентрацию микроорганизмовв исследуемом материале проводят определяя КОЕ (число выросших колоний на единицу количества исследуемого материала). Для определения КОЕ можно использовать два метода:

1. Метод разведения материала в жидкой питательной среде. Исследуемый материал разводят в 10, 100, 1000 и т.д. раз, а затем делают посевы на отдельные чашки.

2. Метод посева по Гольду. После предварительного перемешивания исследуемого материала в транспортной среде, производят посев в первый сектор чашки Петри и тщательно растирают петлей. Затем петлю прожигают и из первого сектора производят три штриха во второй сектор, далее также в третий и четвертый.

Эмпирически установлено, что в каждом последующем секторе концентрация микробов уменьшается на два порядка. Например, при получении 13 колоний во втором секторе концентрация жизнеспособных бактерий в исследуемом объеме материала составит 13× 10⁴КОЕ.

Провести подсчет выросших изолированных колоний на чашке Петри с 5 % кровяным сердечно-мозговым агаром в последнем секторе, определить общее количество жизнеспособных бактерий в 1 мл материала (КОЕ/мл, колониеобразующие единицы), пользуясь формулой:

N = n x 10K, N – общее число бактерий;

n – число колоний в последнем секторе;

k – показатель степени 2, 4, 6 соответственно для секторов 1, 2 или 3.

Количественное число 10⁵ КОЕ/мл для экссудата из «закрытого» воспалительного очага и 10⁶ – 10⁷для слизистой полости рта.

Вывод: ______________________________________________________________

____________________________________________________________________

 

Контрольные вопросы

1. Какие воспалительные заболевания пародонта Вам известны?

2. Каковы этиологические факторы и патогенез различных форм гингивитов, пародонтитов, пародонтозов?

3. Методы микробиологического исследования в стоматологической практике.

5. Каковы возможные источники и пути передачи инфекции?

6. Какие основные представители резидентной микрофлоры при отсутствии патологии тканей пародонта Вам извествны?

7. Назовите особенности состава микрофлоры при гингивите.

8. Кто входит в состав микрофлоры при пародонтите?

9. Пародонтопатогенные микробы (Porphyromonas gingivalis, Prevotella melaninogenica). Доказательства их участия в патогенезе заболевания.

10. Каковы механизмы и условия возникновения заболеваний пародонта?

11. Как осуществляют взятие материала из десневого желобка и пародонтальных карманов?

12. Какие методы изучения количественного и качественного состава микрофлоры десневого желобка и пародонтальных карманов Вам известны?

13. Какие заболевания относятся к пародонтопатиям?

14. Опишите микробные факторы, влияющие на возникновение заболеваний пародонта.

15. Охарактеризуйте иммунопатологические механизмы в развитии заболеваний пародонта.

16. Какие методы и материал используются для исследования микрофлоры при заболеваниях пародонта?

 

ПРИЛОЖЕНИЕ К ЗАНЯТИЮ 12

МИКРОФЛОРА ПАРАДОНТА ПРИ ОТСУТСТВИИ ПАТОЛОГИЙ

Ткани здорового пародонта связаны с довольно ограниченной флорой, расположенной под десной на поверхности зуба. Микробы пародонта составляют слой толщиной от 1 до 20 клеток. Исследование в области десневого желобка выявило довольно тонкий слой (около 60 нм.), состоящий на 3/4 из грамположительных кокков. Вместе с палочками они составляют 90 % популяции. Спирохеты встречаются редко - около 1, 8 %. Соотношение подвижных форм к неподвижным составляет в здоровых тканях – 1/49.

В десневом желобке бляшка состоит в основном из грамположительных факультативных анаэробных кокков (стрептококки, в меньших количествах - стафилококки, пептострептококки) и палочек (актиномицеты: A. israelii, A. naeslundii, A. viscosus, A. odontolyticus, а также пропионибактерии).

ПАРАДОНТОПАТОГЕННЫЕ МИКРОБЫ

В патогенезе воспалительных заболеваний пародонта имеется взаимодействие двух патогенетических механизмов: воздействие анаэробной микрофлоры и иммунологической реактивности организма человека.

Согласно рекомендациям ВОЗ 1994-1995 гг., среди резидентной микрофлоры полости рта с анаэробным типом дыхания следует выделять т.н. пародонтопатогенные виды, которые отличаются от других высокими адгезивными, инвазивными и токсическими свойствами по отношению к тканям пародонта. К ним относятся:

1. Грамнегативные анаэробные бактерии группы бактероидов (Porphyromonas gingivalis, Prevotella melaninogenica, Tannerella forsythensis (ранее Bacteroides forsythus)), в меньшей степени - спирохеты и фузобактерии.

2. Грампозитивные анаэробные бактерии группы актиномицетов, в меньшей степени - пептострептококки.

Доказано, что развитие пародонтита наиболее часто ассоциируется с увеличением количества и персистенцией в тканях пародонта следующих видов бактерий: Porphyromonas gingivalis, Tannerella forsythensis (ранее Bacteroides forsythus), Aggregatibacter (ранее Actinobacillus) actinomycetemcomitans. Это пародонтопатогенные виды 1-го порядка. Они обладают высокой степенью адгезии к эпитериальным клеткам и коагрегации с грамположительными бактериями. Prevotella intermedia, Treponema denticola, Actinomyces israelii, Peptococcus niger, Peptostreptococcus micros и др. относятся к пародонтопатогенным видам 2-го порядка и оказывают действие при значительном увеличении числа микроорганизмов.

Эксперименты на различных животных, в том числе на гнотобионтах, показали, что бактероиды полости рта (Porphyromonas gingivalis, Prevotella melaninogenica и др.) являются необходимым фактором для начала воспалительного процесса. Грамотрицательные бактерии, выделенные из пародонтального кармана, вызывали у животных резорбцию альвеолярной кости, тогда как грамположительные бактерии вызывали лишь образование большого количества зубного налёта и незначительную резорбцию кости.

Пародонтопатогенные микроорганизмы обладают широким спектром факторов патогенности, что позволяет им индуцировать длительный воспалительный процесс. К ним относят:

· Факторы адгезии - способность прилипать в большом количестве к эпителиальным клеткам, гидроксиапатиту и к грамположительным бактериям. Их адгезивные свойства ингибируются в присутствии слюны и сыворотки крови. Однако способность к коагрегации с грамположительными бактериями при этом не ингибируется.

· Факторы инвазии – продукция гистолитических ферментов: гиалуронидаза, ДНК-аза, РНК-аза, коллагеназа, протеаза.

· Токсические факторы – грамотрицательные бактерии содержат эндотоксин, вырабатывают цитотоксические субстанции, включающие жирные кислоты, индол, амины, аммиак и др. Все эти вещества в той или иной степени оказывают разрушающее действие на ткани пародонта. Бактероиды выделяют летучие серные соединения, которые увеличивают проницаемость слизистой полости рта. Кроме того, благодаря содержанию специфических липополисахаридов, грамотрицательные микробы могут явиться причиной иммунопатологических механизмов, которые приводят к деструкции костной ткани. Такими свойствами in vitro обладают некоторые виды бактероидов, фузобактерии и др., что было установлено с помощью реакций бласттрансформации лимфоцитов.

· Протективные свойства, т.е. способность противодействовать защитным силам макроорганизма. Это свойство обеспечивается полисахаридной капсулой грамотрицательных микробов, ферментами, способными расщеплять иммуноглобулины и фракции комплемента.

Многие виды бактероидов способны продуцировать ферменты, инактивирующие антибиотики, что затрудняет лечение.

МИКРОФЛОРА ПРИ ГИНГИВИТЕ

Общее число микробов при гингивите в 10-20 раз больше, чем в здоровом пародонте. Ещё до появления клинических симптомов микроскопия позволяет выявить изменения состава микрофлоры: увеличение грамотрицательной флоры и смена кокковой флоры палочковидными формами. В этом смысле доклиническую фазу воспалительных заболеваний пародонта можно рассматривать как своеобразный дисбактериоз, к которому ведут неправильный образ жизни, обменные нарушения в тканях пародонта, эндокринные дисфункции.

При длительном гингивите поддесневая флора характеризуется увеличением количества грамотрицательных палочек: фузобактерии, бактероиды и др. составляют около 45% всей культивируемой флоры. Грамположительные факультативно-анаэробные палочки, в основном, Actinomyces naeslundii, A. viscosus, A. israelii обнаруживаются с частотой около 25%. В небольших количествах выделяются пропионибактерии и эубактерии. В 27% случаев обнаруживаются грамположительные факультативно-анаэробные стрептококки.

МИКРОФЛОРА ПРИ ПАРОДОНТИТЕ

К развитию пародонтита приводит сбой в функционировании защитных механизмов организма и изменения в составе и количестве микрофлоры пародонтального кармана.

При пародонтите выявляется значительный сдвиг в сторону палочковидных форм и спирохет, количество которых возрастает до 40%. Соотношение подвижных форм к неподвижным увеличивается до 1: 1 (в норме 1: 49). К цементу прикреплены, в основном, грамположительные микробы, грамотрицательные – присутствуют в неплотных слоях поддесневой бляшки, которая распространяется до верхушечной части кармана.

При пародонтите преобладают грамотрицательные анаэробные палочки (Porphyromonas gingivalis, Prevotella melaninogenica, Fusobacterium nucleatum и др). Однако у некоторых больных наблюдается превалирование актиномицетов.

МЕХАНИЗМ И УСЛОВИЯ ВОЗНИКНОВЕНИЯ ЗАБОЛЕВАНИЙ

ПАРАДОНТА

В патогенезе болезней пародонта существенная роль принадлежит микробным факторам и иммунопатологическим механизмам – иммунокомплексному и клеточному.

Для развития заболеваний пародонта должны сочетаться следующие условия:

1. Присутствие пародонтопатогенных видов бактерий в количестве достаточном для того, чтобы начался патологический процесс.

2. Условия обитания в нише должны способствовать росту и размножению бактерий (достаточное количество питательных веществ, ростовых факторов, низкий ОВП).

3. В тканях пародонта должны отсутствовать микробы-антагонисты пародонтопатогенных бактерий.

4. Микроб должен пространственно локализоваться так, чтобы он или продукты его жизнедеятельности могли действовать на клетки-мишени.

5. Организм человека должен быть чувствительным к микробам или продуктам их жизнедеятельности.

6. Развитие иммунопатологических реакций. При исследовании содержимого десневого кармана у больных пародонтитом определяются иммуноглобулины классов A, G, M, фракции комплемента С3, С5, лейкоциты. Ткани десны обильно инфильтрированы плазматическими клетками, лимфоцитами, макрофагами (моноцитами). Всё это позволяет считать, что многие реакции антиген-антитело, проявления клеточного иммунитета происходят именно здесь, в тканях пародонта и альвеолярной кости.

Иммунопатогенез пародонтопатий можно разделить на две фазы: обратимую и необратимую.

Обратимая фаза связана с нормальным иммунным ответом защитного характера со стороны местных тканей. Её механизм обуславливается усиленным размножением грамотрицательных бактерий в десневых карманах и зубных бляшках. Микробные ферменты разрыхляют непроницаемый для бактерий барьер – краевой эпителий десны и создают условия для трансфузии эндотоксинов в соединительную ткань. Микробные антигены, продукты распада клеток и обменные продукты зубной бляшки провоцируют усиленную миграцию сегментоядерных лейкоцитов и макрофагов в краевой эпителий. По мере накопления специфических антител (IgM, IgG) они образуют иммунные комплексы с персистирующими антигенами микробной природы, что должно способствовать очищению от них слизистой оболочки рта. Захват и деградацию иммунных комплексов и продуктов их распада осуществляют мигрирующие в очаг воспаления фагоциты, активированные лимфокинами.

Обратимая фаза клинически проявляется признаками местного воспаления - гингивита. Своевременное лечение прекращает массивное поступление антигенов и останавливает или ликвидирует воспаление десны. Однако если массивное поступление микробных антигенов не прекращается, мобилизованные защитные механизмы могут привести к деструкции тканей. Это происходит в связи с освобождением фагоцитирующими клетками лизосомальных ферментов, среди которых наиболее активны протеиназы: коллагеназа и эластаза. Они способны расщеплять денатурированный коллаген пародонтальной соединительной и костной тканей. При этом эпителий набухает, теряет прочную связь с твёрдыми тканями зуба. В результате образуется патологический десневой карман, который служит входными воротами для вторичной гнойной инфекции. В этом случае гингивит переходит в пародонтит.

Необратимая, иммунопатологическая, фаза, прежде всего, связана с сенсибилизацией Т-лимфоцитов аутоантигенами, образующимися при деструкции пародонта. Важную роль играют при этом микробные эндотоксины, которые усиливают сенсибилизацию лимфоцитов, а также могут вызывать поликлональную активацию В-лимфоцитов. Таким образом формируются механизмы аутоагрессии, приводящие к прогрессирующему, рецидивирующему, необратимому течению пародонтита с атрофией остеоцитов и альвеолярных отростков челюсти.

Понимание этиологии и патогенеза пародонтита необходимо не только для установления роли микробов в этом процессе, но также и для выяснения условий, способствующих росту бляшки, определению роли местных и системных факторов, которые могут влиять на резистентность или чувствительность тканей пародонта к бактериям, продуктам их жизнедеятельности и значению индивидуальных особенностей организма хозяина в функционировании деструктивных и защитных механизмов.

МЕТОДЫ ИЗУЧЕНИЯ МИКРОФЛОРЫ ПРИ ЗАБОЛЕВАНИЯХ

ПАРОДОНТА

При диагностике заболеваний пародонта используют бактериоскопический и бактериологический методы. В настоящее время активно разрабатывается молекулярно-биологический метод (ПЦР). Существующие диагностические наборы позволяют определить 5 основных пародонтопатогенных видов микроорганизмов.

Материалом для исследования может служить десневая жидкость, субгингивальная зубная бляшка.

 

 

⇐ Предыдущая12345678910

Поделиться: