А. Метод колициногенотипирования

⇐ ПредыдущаяСтр 5 из 10Следующая ⇒

Метод колициногенотипирования разработан английскими исследователями Абботом и Шенноном (1958) и основан на определении колициногенотипов шигелл Зонне по действию этих бактерий на 15 индикаторных культур, из которых 13 принадлежит к виду шигелл Зонне, 1 - S. dysenteriae 2 (Штуцера-Шмитца) и 1 - Escherichia сoli К-12 ROW.

С помощью этого набора индикаторных культур в настоящее время выявлено 17 колициногенных типов бактерий Зонне.

Испытываемую культуру сеют на МПА с генцианвиолетом двумя линейными штрихами параллельно диаметру чашки. После инкубирования при 37°C в течение 48 часов выросшую культуру убивают парами хлороформа и удаляют с поверхности среды узким краем стерильного шлифованного предметного стекла. На поверхность агара наносят свежие культуры индикаторных штаммов в виде линейных штрихов, пересекающих линии посева исследуемой культуры. Посевы индикаторных штаммов инкубируют 18-20 часов при 37°C и производят учет результатов по наличию или отсутствию зон торможения роста индикаторных культур и их размерам.

Регистрируют результаты следующими условными обозначениями:

++++ - зона торможения 15-20 мм;

+++ - зона торможения 10-15 мм;

++ - зона торможения более 5 мм;

+ - зона торможения 4-5 мм;

± - зона торможения меньше 4 мм;

- - отсутствие зоны торможения.

Полученный спектр действия исследуемой культуры на индикаторные штаммы сопоставляют со стандартной схемой титрования и присваивают этой культуре соответствующий колициногенотип.

Типовые и индикаторные культуры набора Абботта и Шеннона

Для колициногенотипирования шигелл Зонне

Типовые колициногенные культуры	Индикаторные культуры
Наименование штамма	Колициногенотип	Наименование штамма	Оригинальный № по схеме Абботта и Шеннона	Регистрационный № по списку Интернационального центра по шигеллам в Лондоне
S. sonnei	1A	S. sonnei
S. sonnei	1B	S. sonnei
S. sonnei		S. sonnei
S. sonnei		S. sonnei	2M
S. sonnei	3A	S. sonnei
S. sonnei		S. sonnei	56/56
S. sonnei		S. sonnei	56/98
S. sonnei		S. sonnei	R 1
S. sonnei		S. sonnei	R 6
S. sonnei		S. dysenteriae 2	M 19	CTC8218
S. sonnei		S. sonnei	2/7
S. sonnei		S. sonnei	2/64
S. sonnei		S. sonnei	2/15
S. sonnei		S. sonnei	R₅
S. sonnei		E. coli K-12	ROW
S. sonnei
S. sonnei

Схема колициногенотипирования шигелл Зонне по Абботту и Шеннону

Индикаторные культуры

56/56

56/98

R 1

R 6

M 19

2/7

2/64

2/15

ROW

Обозначения: + наличие зоны торможения индикаторных штаммов; - отсутствие зоны торможения; V – вариабельные результаты.

Б. Методика колицинотипирования при помощи колициногенных штаммов

Определение спектра чувствительности культур Зонне к колицинам проводят при помощи эталонных колициногенных штаммов Фредерика:

Наименование штамма	Тип продуцируемого колицина
E. coli	Ca-18	B
E. coli	Ca-23	D
E. coli	Ca-38	E + I
E. coli	Ca-42	F
E. coli	Ca-46	G
E. coli	Ca-53	I
E. coli	Ca-62	J + I
E. coli	Ca-235	K
E. coli	Ca-7	V
E. freundii	Ca-31	A
S. boydii	p-1	S₁
S. dispar	p-15	S₄
S. dispar	p-14	S₅
S. sonnei	p-9	S₃ + 1

Колицинотипирование, т.е. определение спектра чувствительности культур Зонне к колицинам, определяют следующим образом.

Свежие эталонные колициногенные штаммы Фредерика, выросшие на среде Ресселя, сеют уколом петли в соответствующие квадраты чашки с 1, 5%-ным МПА, подкрашенным генцианвиолетом, и инкубируют при 37º C в течение 24 часов. Выросшие колонии бактерии убивают парами хлороформа, и поверхность агара заливают 2, 5 мл расплавленного 0, 7%-ного МПА, содержащего 2 капли 6-часовой испытуемой бульонной культуры шигелл Зонне. После 20-часового роста при 37°C производят учет результатов опыта. При наличии чувствительности к колицинам испытуемого штамма бактерии Зонне вокруг колоний колициногенных культур образуются зоны задержки роста подобно зонам задержки роста вокруг дисков с антибиотиками. Культура считается чувствительной к колицину, если ширина задержки роста бактерий более 2 мм.

Результаты регистрируют плюсами: + - зона задержки 2 мм; ++ - зона задержки 2-5 мм; +++ - зона задержки 5-10 мм; ++++ - зона задержки более 10 мм.

ВИРУЛЕНТНОСТЬ ДИЗЕНТЕРИЙНЫХ БАКТЕРИЙ, МЕТОДЫ ИЗУЧЕНИЯ

Вирулентность дизентерийных бактерий обусловлена наличием у них факторов адгезии и колонизации, инвазии. (Эти факторы патогенности контролируются главным образом плазмидами). Кроме того, шигеллы способны вырабатывать 2 типа экзотоксинов: цитотонины (термолабильный и термостабильный) и цитотоксины (способностью вырабатывать цитотоксины шигеллу наделяют конвертирующие умеренные фаги).

Патогенность шигелл определяется с помощью кератоконъюнктивальной пробы на морской свинке.

ФАКТОРЫ ПАТОГЕННОСТИ ДИАРЕЕГЕННЫХ E. coli

Факторы	Международное название
Полное	Символы
Термостабильный энтеротоксин	Heat-stable enterotoxin	ST
Термолабильный энтеротоксин	Heat-labile enterotoxin	LT
Цитотоксины:	Cytotoxin Shiga-Like toxin	CT SLT
Шигаподобный токсин
Vero - токсин	Verotoxin	VT
Инвазивность٭	Invasiveness	-
Факторы колонизации٭	Colonization factor	CF
Фактор адгезии энтеропатогенных E. coli к клеткам Hep-2	Enteropathogenic E. coli adherence factor to Hep-2 cells	EAF
Адгезия к клеткам Henle-407	Adhesion to Henle-407 cells	Adhesion Henle-407

٭ - имеются в виду CFA/I, CFA/II, CFA/III, CFA/IV.

Известны и другие факторы адгезии и колонизации.

Г. Классификация диареегенных Escherichia coli

Категория Серогруппы Серовары

ETEC – энтеротоксигенные E. coli 06, 08, 015, 020, 025, 027, 063, 078, 080, 085, 0115, 0128ас, 0139, 0148, 0153, 0159, 0167. 06: Н16, 08: Н9, 011: Н27, 015: Н11, 020: Н-, 025: Н-, 027: Н7, 063, 078: Н11, 0128: Н7, 0148: Н28, 0149: Н10, 0159: Н20, 0167.

EIEC – энтероинвазивные E. coli 028ас, 029, 0124, 0136, 0143, 0144, 0152, 0164, 0167. 028ас: Н-, 0112ас: Н-, 0124: Н, 0124: Н32, 0136: Н-, 0143: Н-, 0144: Н-, 0152: Н-, 0159: Н-, 0164, 0167: Н4, 0167: Н5, 0124: Н30.

EPEC – энтеропатогенные E. coli Класс 1. 055, 086, 0111, 0119, 0125, 0126, 0127, 0128ав, 0142. Класс 2. 018, 044, 0112, 0114. 018ас: Н7, 020ав: Н26, 026: Н-, 026: НII, 028ас: Н-, 044: Н34, 055: Н-, 055: Н6, 055: Н7, 086а: Н-, 086а: Н34, 0111ав: Н12, 0114: Н10, 0114: Н32, 0119: Н-, 0119: Н6, 0125ас: Н21, 0126: Н-. 0126: Н7, 0127: Н-, 0127: Н9, 0127: Н21, 0128ав: Н2, 0128ас: Н12, 0142: Н6, 0158: Н23, 0159.

EHEC – энтерогеморрагические E. coli 0157, 026, 0111, 0145, О104. 0157: Н7

EAEC – энтероагрегативные E. coli Не выяснены

DAEC – диффузноагрегативные E. coli Не выяснены

ЗАНЯТИЕ № 5

Дата________________

Тема: МИКРОБИОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА ХОЛЕРЫ

План занятия

1. Изучение морфологии, культуральных и биохимических свойств холерного и холероподобных вибрионов.

2. Бактериологическое исследование испражнений холерного больного (разбор схемы).

3. Ускоренная диагностика холеры (демонстрация).

4. Исследование воды на наличие холерного вибриона (разбор методики).

5. Изучение иммунопрепаратов, применяемых для профилактики, лечения и диагностики заболеваний, вызываемых бактериями кишечной группы, и холеры. Демонстрация и разбор.

6. Правила взятия и пересылки материала при исследовании на кишечную группу микробов. Особенности взятия и пересылки материала при подозрении на холеру. Разбор методов.

7. Бактериологическая диагностика кишечной инфекции (окончание). Регистрация результатов посева на среды «пестрого ряда», МПА, среду Пешкова. Окончательная идентификация возбудителя по антигенным свойствам реакцией агглютинации на стекле.

Методические указания

1. Изучение морфологии, культуральных и биохимических свойств

холерного и холероподобных вибрионов.

Приготовить препараты-мазки из чистой культуры водного вибриона, окрасить их по Граму, промикроскопировать и зарисовать. Изучить биохимические свойства холерного и холероподобных вибрионов по демонстрационным наборам сред " пестрого ряда".


Рис. 1. Вибрион Vibrio cholerae Окраска по Граму	Рис.2. Мазок из испражнений " холерного" больного. Окраска по Граму
P znCUYyPtaC4x3PUyVWolnekoNrRmwOcW61N1dhp2zbZaTTLjZXbcvfLy9LV/yxKtb2/m7RMIxpn/ nuEXP6JDGZkO/kw2iF7DQxqncLyrNYjoZ4lKQBw0pPdrBbIs5P8F5Q8AAAD//wMAUEsBAi0AFAAG AAgAAAAhALaDOJL+AAAA4QEAABMAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAFtDb250ZW50X1R5cGVzXS54bWxQ SwECLQAUAAYACAAAACEAOP0h/9YAAACUAQAACwAAAAAAAAAAAAAAAAAvAQAAX3JlbHMvLnJlbHNQ SwECLQAUAAYACAAAACEA7BLQ4SICAAAyBAAADgAAAAAAAAAAAAAAAAAuAgAAZHJzL2Uyb0RvYy54 bWxQSwECLQAUAAYACAAAACEA7ENJv98AAAAJAQAADwAAAAAAAAAAAAAAAAB8BAAAZHJzL2Rvd25y ZXYueG1sUEsFBgAAAAAEAAQA8wAAAIgFAAAAAA== "/>
Рис.3. Культура из пленки на пептонной воде. Окраска по Граму	Рис. 4. Культура возбудителя кишечной инфекции на скошенном МПА. Окраска по Граму

2. Бактериологическое исследование испражнений холерного больного

(разбор схемы).

Одну петлю испражнений засевают на пептонную воду в пробирке, другую петлю испражнений засевают на пластинку щелочного МПА так, чтобы получить изолированные колонии. Находят на щелочном МПА колонии, подозрительные на колонии холерного вибриона (прозрачные с серо-голубым оттенком), готовят из них препараты-мазки, окрашивают по Граму и микроскопируют. Проверяют подвижность в препарате «висячая капля». На сахарных средах определяют группу по Хейбергу, дифференцируют биовар. Ставят реакцию агглютинации на стекле выделенной культуры с холерной О-сывороткой и типовыми сыворотками Огава и Инаба. Проверяют холерогенность выделенной культуры.

⇐ Предыдущая 1 2 3 456 7 8 9 10 Следующая ⇒

Последнее изменение этой страницы: 2017-04-12; Просмотров: 1989; Нарушение авторского права страницы