БИОХИМИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ВИБРИОНОВ ПО

Хейбергу, Смиту и Гуднеру

Углеводы	Группы
Манноза	+	-	+	-	+	-	+	-
Арабиноза	-	-	+	+	-	-	+	+
Сахароза	+	+	+	+	-	-	-	-

 

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ХОЛЕРОГЕННОСТИ (энтеротоксигенности)

V. cholerae

Косвенные признаки отсутствия холерогенности у вибриона:

1. наличие гемолитической активности,

2. отсутствие больных холерой;

3. отрицательные пробы с холерными диагностическими фагами (ХДФ-3, ХДФ-4, ХДФ-5).

Прямые методы обнаружения холерогена:

1. стимуляция клеточной аденилатциклазы в культурах клеток;

2. биологические пробы (на крольчатах-сосунках или на лигированной петле тонкого кишечника кролика);

3. реакция пассивного иммунного гемолиза (холероген взаимодействует с ганглиозидом эритроцитов, добавление антитоксинов и комплемента приводит к гемолизу);

4. иммуноферментный метод;

5. иммунофлуоресцентный метод;

6. ПЦР для обнаружения гена токсигенности.

 

 

ЗАНЯТИЕ № 6

Дата________________

Тема: МИКРОБИОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА КАМПИЛОБАКТЕРИОЗА, ХЕЛИКОБАКТЕРИОЗА

План занятия

1. Изучение морфологических, тинкториальных, культуральных и биохимических свойств кампилобактерий.

2. Бактериологическое исследование испражнений больного кампилобактериозом (разбор схемы).

3. Бактериоскопическое исследование микропрепарата чистой культуры Helicobacter pylori, изучение морфологических, тинкториальных свойств.

4. Бактериологическое исследование испражнений больного хеликобактериозом (разбор схемы), знакомство с культуральными и биохимическими свойств Helicobacter pylori.

 

Методические указания

1. Изучение морфологических, тинкториальных, культуральных и биохимических свойств кампилобактерий.

Промикроскопировать препараты-мазки из чистой культуры Сampylobacter sputorum, выделенной из десневой жидкости больного в период воспаления десны, окрашенных по Граму и фуксином Циля. Препараты зарисовать.

Исследовать характер роста C. jejuni, основного возбудителя кампилобактериоза на плотных, полужидких и жидких средах.

Изучить биохимические свойства бактерий, возбудителей кампилобактериозов.

2. Бактериологическое исследование испражнений больного

кампилобактериозом (разбор схемы).

Изучить особенности бактериологической диагностики кампилобактериозов, разобрать схему.

Характер исследуемого материала при диагностике кампилобактериозов зависит от локализации инфекций.

При диагностике заболеваний пародонта или одонтогенной инфекции используют ротовую жидкость (смешанную слюну), десневую жидкость, зубной налет (биопленку), экссудат из пародонтальных каналов, абсцессов и т.п. инфекции ротовой полости.

При гастроинтестинальном кампилобактериозе материалом для исследованияслужатиспражнения. Техника взятия исследуемого материала не отличается от техники, применяемой при других ОКИ. Отбор нативного материала. Испражнения не менее 1 г собирают сразу после естественного акта дефекации из судна, горшка (тщательно вымытого и не содержащего следов дезинфектантов) или с пеленки с помощью стерильной стеклянной палочки, проволочной петли или деревянного шпателя и помещают в стерильную посуду (стеклянную пробирку, вакуумный пробоотборник, контейнер транспортировочный со средой для анаэробов или специальными средами с активированным углем и без него для выделения Campylobacter spp.). При наличии в испражнениях патологических примесей (слизь, хлопья, эпителий, гной), за исключением крови, их включают в отбираемую пробу. Отбор с использованием ректальных петель (тампонов). Стерильную ректальную петлю (тампон) вводят в прямую кишку на глубину 5-6 см. Взятый материал переносят в стерильную пробирку с физиологическим раствором или в транспортную среду.

При подозрении на генерализованный кампилобактериоз на посев направляются: кровь, ликвор, моча, гной абсцессов, синовиальная жидкость, желчь или околоплодные воды.

Схема 1. Бактериологическая диагностика кампилобактериозов

3. Бактериоскопическое исследование микропрепарата чистой культуры Helicobacter pylori, изучение морфологических, тинкториальных свойств.

Промикроскопировать препарат-мазок из биоптата слизистой оболочки желудка Helicobacter pylori, окрашенный гемотоксилин-эозином. Препараты зарисовать.

Исследовать характер роста H. pylori на «шоколадном» агаре и жидких средах.

Изучить биохимические свойства бактерий, возбудителей хеликобактериозов.

Рис. 1. Сampylobacter sputorum, окраска по Граму	Рис.2. Сampylobacter sputorum, окраска фуксином Циля	Рис.3. Helicobacter pylori из биоптата слизистой оболочки желудка, окраска гемотоксилин-эозином

3. Бактериологическое исследование испражнений больного хеликобактериозом (разбор схемы), знакомство с культуральными и биохимическими свойств Helicobacter pylori.

Контрольные вопросы

1. Каковы морфологические и тинкториальные особенности кампилобактерий?

2. Какие культуральные и биохимические особенности кампилобактерий Вам известны?

3. По каким признакам проводят внутриродовую дифференцировку возбудителей кампилобактериозов?

4. Как происходит заражение кампилобактериозом? Кто являеться его источником?

5. Где в организме больного могут локализоваться кампилобактерии?

6. Причиной, каких инфекций могут быть патогенные виды родаCampylobacter? Значение Campylobacter в ОКИ.

7. Какие микробиологические методы применяют для диагностики кампилобактериозов?

8. Какой материал берут от больного для бактериоскопического и бактериологического исследования?

9. Каковы особенности взятия, пересылки и исследования материала при подозрении на кампилобактериоз?

10. Какие питательные среды применяют для выделения представителей рода Campylobacter?

11. Какие методы ускоренной диагностики кампилобактериозов Вам известны?

12. Какие факторы патогенности свойственны кампилобактериям? Какое действие оказывает TL энтеротоксин на организм человека?

13. В чем заключается принцип патогенетического лечения больных кампилобактериозом?

14. Каковы морфологические и тинкториальные особенности H. pylori?

15. Какие культуральные и биохимические особенности H. pylori Вам известны?

16. Где в организме больного могут локализоваться H. pylori?

17. Причиной, каких инфекций может быть H. рylori?

18. Какие микробиологические методы применяют для диагностики хеликобактериозов?

19. Каковы особенности взятия, пересылки и исследования материала при подозрении на хеликобактериоз?

20. Какие методы ускоренной диагностики хеликобактериозов Вам известны?

ПРИЛОЖЕНИЕ К ЗАНЯТИЮ 6

В настоящее время, по данным ВОЗ, во многих зарубежных странах кампилобактериоз является наиболее распространенной этиологической формой в структуре ОКИ и в зависимости от региона на его долю приходится от 3 до 73% всех расшифрованных острых кишечных инфекций. Изучение кампилобактериоза в Российской Федерации начато с большим опозданием, что сопряжено с рядом причин, в основном со сложностью и высокой стоимостью лабораторной диагностики, обусловленными особенностями культивирования кампилобактеров. Так в 2005-2007 гг. по всей России официально зарегистрировано всего 394-398 случаев этой инфекции (показатель на 100 тыс. населения - 0, 27-0, 28 соответственно). Показатель заболеваемости на 100 тыс. населения по сальмонеллезу за тот же период составил 29, 33, 31, 96 и 35, 5 соответственно. При этом кампилобактериоз выявлен только в 14 из 85 административных территорий России. Таким образом, кампилобактериозная инфекция, столь широко распространенная во всем мире, и по частоте выявления сопоставимая с сальмонеллезом, в России диагностируется очень мало.

В настоящее время микроаэрофильные подвижные, хемоорганотрофные, не образующие спор и капсул грамотрицательные бактерии спиралевидной, S-образной или изогнутой формы объединены в семейство Campylobacteriaceae, a род Campylobacter насчитывает, по последним данным, около 20 видов и подвидов, и это число постоянно растет, уточняются потенциальные возможности данных микроорганизмов в этиологии и патогенезе заболевания у человека. Наибольшее значение для патологии человека на сегодня имеют C. jejuni, С. coli, С. lari, С. fetus. Последний вид чаще поражает ослабленных интеркуррентными заболеваниями людей с развитием гематогенно-диссеминированных форм заболевания. Непосредственное отношение к полости рта имеют три вида кампоилобактерий C. concisus, C. sputorum, C. rectus.

Длина клеток кампилобактеров 0, 5-5 мкм, толщина - 0, 2-0, 8 мкм, имеют один или, более полярно расположенных жгутика, могут обладать плазмидами. В старых культурах бактерии часто принимают сферические или кокковые формы. Кампилобактерам присущ дыхательный тип метаболизма. В качестве источника энергии они, в основном, используют аминокислоты, но не могут утилизировать углеводы. Кампилобактеры - микроаэрофилы. Кислород необходим для их роста, но становится токсичным для микроорганизмов в избыточном количестве. Для большинства штаммов оптимальной является концентрация кислорода 3-6 %. Кампилобактериии являются капнофилами, то есть нуждаются в высоких концентрациях СО₂ (до 10%). Большинство этиологически значимых кампилобактеров обладают каталазой, оксидазой и супероксиддисмутазой. В зависимости от температурного диапазона роста кампилобактеры делят на 2 группы: 1) нетермофильные - температурный оптимум 37°С; 2) термофильные - температурный оптимум 42-43°С.

Схема 2. Физиологические и биохимическая особенности кампилобактерий

На жидких питательных средах через 48 ч инкубации кампилобактер образует равномерное помутнение с выраженным осадком, на полужидких пробирочных питательных средах - зону роста в виде диска, расположенного на глубине 1-2 мм от поверхности питательной среды. С. jejuni на плотных питательных средах с добавлением крови образуют колонии без гемолиза 2-х типов: 1) низкие, плоские, с краями неправильной формы, блестящие, влажные, полупрозрачные, растекаются по поверхности среды, имеют тенденцию к слиянию (характерны для " свежих" культур, содержащих извитые формы клеток); 2) круглые, гладкие, приподнятые, с ровными краями, 1-2 мм в диаметре (характерны для " старых" культур, содержащих кокковидные формы. На полужидких средах С. jejuni растут в виде диска, 3-5 мм от поверхности среды

Для лабораторной диагностики кампилобактериозного энтероколита используют бактериоскопический, бактериологический, серологический и экспресс-методы.

БАКТЕРИОСКОПИЧЕСКИЙ МЕТОД ДИАГНОСТИКИ КАМПИЛОБАКТЕРИОЗОВ

Бактериоскопический метод является достоверным лишь при обсемененности не менее 10КОЕ в 1 мл материала и имеет только дополнительное, ориентировочное значение в диагностике кампилобактериоза. В то же время при остром кампилобактериозном энтерите чувствительность метода достаточно большая и составляет 66 – 94 %. Для микроскопическое исследования используют тонкие мазки из патологического материала, фиксированные спиртом и окрашенные двумя способами - по Граму и 1% раствором фуксина Циля в течение 10-30 с, в последнем случае окрасятся исключительно кампилобактерии. Микроорганизм обладает выраженным штопорообразным движением (монотрих или амфитрих), что позволяет использовать премикропараты висячая или раздавленная капля, для выявления подвижности. Бактериоскопический метод основан на обнаружении в окрашенном препарате Г^- микроорганизмов с характерной морфологией (мелкие изогнутые S, U-образные палочки - " крылья летящей чайки" ) или клеток с характерной спиральной 1-2 завитка морфологией в сочетании с молниеносной подвижностью (препарат " раздавленная капля" при фазово-контрастной или темно-польной микроскопии).

БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКИЙ МЕТОД ДИАГНОСТИКИ КАМПИЛОБАКТЕРИОЗОВ

Исследуемый материал доставляют в бактериологическую лабораторию. При возможности доставки нативных фекалий в лабораторию в течение 1 ч, транспортные среды можно не использовать. При необходимости продолжительного транспортирования используют транспортные среды: 0, 1%-я пептонная вода, среда контроля стерильности, среда Amies, среда Сагу-Blair. Соотношение материал/среда должно быть 1: 3-1: 5. Применение транспортных сред обязательно при отборе проб ректальными петлями. Сроки хранения материала в транспортных средах при температуре 4 °С в зависимости от вида среды в: изотоническом растворе натрия хлорида в течение 24 ч; 0, 1%-й пептонной воде - 72 ч; среде для контроля стерильности, среде Amies, среде Сагу-Вlair - 5-7 сут.

Для выделения чистых культур исследуемый материал засевают на селективные плотные среды (с кровью, факторами роста и антибиотиками) или используют для выделения метод фильтрации. Неконтаминированный материал засевают на неселективные среды обогащения (бруцеллезные бульон или агар, содержащий пептон, дрожжевой экстракт, глюкозу и гидросульфит натрия в качестве редуцента).

Селективные среды (Скирроу, Престона, эритрит-агар) для кампилобактеров содержат баранью кровь (фактор роста) и селективные добавки (антибиотики триметоприм, ванкомицин, амфотерицин Д, полимиксин В и цефалотин), ингибирующие рост нормальной микрофлоры. Культивирование кампилобактеров осуществляется в специальной газовой атмосфере, состоящей из азота, углекислого газа и кислорода в соотношении 85: 10: 5, которая создается применением специальных газогенераторных пакетов, по­мещаемых вместе с посевами в герметично закрывающиеся емкости. Посевы инкубируют при 42⁰С.

Метод фильтрации основан на способности подвижных кам­пилобактеров активно проходить через мембранные фильтры с порами диаметром 0, 45 — 0, 65 мкм. Фильтр укладывают на поверхность неселективной плотной среды в чашке Петри, наносят на него 10—15 капель суспензии фе­калий, инкубируют чашку при 37⁰ С в течение 1 ч, после чего фильтр снимают, а чашку инкубируют в микроаэрофильных условиях. Проникшие через фильтр кампилобактеры образуют через 48 — 96 ч на поверхности среды характерные колонии - серые, плоские, с неровным краем, сливающиеся по ходу штрихов. На более сухих средах колонии выпуклые, блестящие, округлые, без выраженной тенденции к распространению; гемолиз отсутствует.

 

Схема 3. Бактериологическая диагностика кампилобактериозов

Выделенные культуры идентифицируют по морфологии (мазки, окрашенные по Граму), характерной «винтообразной» подвижности (исследование в препарате «раздавленная капля с использованием темнопольной или фазово-контрастной микроскопии), биохимическим свойствам и чувствительности к антибиотикам. Основные свойства некоторых видов кампилобактеров и Helicobacter pylori представлены в таблице 1.

Таблица 1. Дифференциация некоторых видов кампилобактеров и Helicobacter pylori

Биологические свойства	Campylobacter jejuni	Campylobacter coli	Campylobacter fetus	Helicobacter pylori
Рост при 420 С	+	+	-	-
Рост при 250 С	-	-	+	-
Уреаза	-	-	-	+
Нитратредуктаза	+	+	+	-
Гидролиз гиппурата натрия	+	-	-	-
Каталаза	+	+	+	+
Устойчивость к:
налидиксовой кислоте	±	-	±	+
Цефалотину	+	+	-	+

СЕРОЛОГИЧЕСКИЙ МЕТОД

Серодиагностика при кампилобактериозе имеет вспомогательное значение и может быть проведена для ретроспективной диагностики при отсутствии выделения возбудителя, при эпидемиологических исследованиях и изучении патогенеза. Исследование парных сывороток при кампилобактериозной инфекции не имеет такого большого диагностического значения как при многих других кишечных заболеваниях, поскольку отчетливое увеличение титров антител наблюдается только у одной трети больных.

Применяются следующие серологические реакции: реакция агглютинации; РИФ; ИФМ; РСК; латекс-агглютинация; РПГА.

УСКОРЕННЫЕ МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ

Одним из наиболее распространенных альтернативных методов индикации кампилобактерий являются методики, основанные на амплификационных технологиях и в частности - методе полимеразной цепной реакции (ПЦР) с обнаружением РНК кампилобактерий. В связи с высокой частотой циркуляции в популяции здоровых лиц сапрофитных видов кампилобактерий для диагностики кишечных форм кампилобактериоза применяются тест-системы, позволяющие выявлять только термофильную группу этих микроорганизмов и разрешенные к применению на территории Российской Федерации в установленном порядке. Предпочтение при этом должно отдаваться тест-системам, обеспечивающим более высокий уровень контаминационной защищенности при проведении исследований.

Реакция латекс агглютинации, имууноферментный анализ с обнаружением антигенов кампилобактерий в фекалиях. Являются вспомогательным методом и используется при необходимости экспресс-диагностики.

Helicobacter pylori

Микробиологическая диагностика инфекций, вызванных Helicobacter pylori, прежде всего бактериологический метод является основным, но редким методом исследования.

БАКТЕРИОСКОПИЧЕСКИЙ МЕТОД ДИАГНОСТИКИ ХЕЛИКОБАКТЕРИОЗОВ

Для микроскопическое исследования используют тонкие мазки из патологического материала, фиксированные формалином. Хеликобактеры хорошо видны в гистологических препаратах, окрашенных гематоксилин-эозином или импрегнированных серебром по Уортину-Старри. Хорошие результаты даёт люминесцентная микроскопия мазков, окрашенных акридиновым оранжевым. Имеют характерный вид спиралевидной бактерии до двух завитков, располагаются в просвете желез. В нефиксированных препаратах выявляется активная подвижность.

БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКИЙ МЕТОД ДИАГНОСТИКИ ХЕЛИКОБАКТЕРИОЗОВ

Бактериологическая диагностика аналогична диагностике кампилобактериозов, из неселективных сред для хеликобактер лучше использовать «шоколадный» агар, из селективных - применяют кровяные среды (5-17% эритроцитов), дополненные антибиотиками (наиболее пригоден цефсулодин). На 5~7-е сутки культивирования при температуре 37°С наблюдают видимый рост хеликобактер. Принадлежность культур к хеликобактерам определяют по характерной морфологии микроорганизмов и колоний; «винтообразной» подвижности; способности к росту в микроаэрофильных условиях и отсутствию роста в аэробных и анаэробных условиях и при температуре 25 и 42 °С. Из биохимических свойств наиболее часто определяют оксидазную, каталазную и уреазную активности. Отличия от кампилобактерий в первую очередь выявляют по биохимическим свойствам, прежде всего по наличию уреазы. Уреазу определяют у чистых культур или непосредственно в исследуемом материале (биоптате). Для этого их помещают в мочевинный бульон по Кристенсену и инкубируют от 15 мин. до 24 ч., при положительной реакции образуеться аммиак, рН индикатор срабатывает.

СЕРОЛОГИЧЕСКИЙ МЕТОД ДИАГНОСТИКИ ХЕЛИКОБАКТЕРИОЗОВ

Применяют следующие серологические реакции для обнаружения Ig G: ИФА

РП

РНГА

РСК

УСКОРЕННЫЕ МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ ХЕЛИКОБАКТЕРИОЗОВ

В настоящее время разработана тест-системы для иммуно-ферментного определения Аг хеликобактеров в биоптатах, ПЦР, прямая РИФ.

 

 

ЗАНЯТИЕ № 7

Дата________________

Тема: МИКРОБИОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА АНАЭРОБНЫХ ИНФЕКЦИЙ (КЛОСТРИДИАЛЬНАЯ И НЕКЛОСТРИДЕАЛЬНАЯ МИКРОФЛОРА)

План занятия

1. Исследование морфологии анаэробных бактерий. Микроскопия препаратов-мазков из культур патогенных анаэробов.

2. Изучение особенностей роста культур анаэробов на различных питательных средах.

3. Микробиологический диагноз анаэробных инфекций. Разбор методов диагностики столбняка и газовой гангрены. Посев исследуемого материала по способу Вейон-Виньяля, Фортнера, на среду Китта-Тароцци. Регистрация результатов посева материала, содержащего анаэробные микробы, макро- и микроскопия выросших культур.

4. Ускоренное обнаружение С. реrfringens. Демонстрация роста на среде Вильсон-Блера, среде Китта-Тароцци и на молочной среде.

5. Биологическая проба на мышах для обнаружения ботулинического токсина. Разбор методики.

6. Демонстрация иммунопрепаратов, применяемых для профилактики и лечения анаэробных инфекций.

 

Методические указания

1. Исследование морфологии анаэробных бактерий. Микроскопия препаратов-мазков из культур патогенных анаэробов

Готовые препараты-мазки из чистых культур патогенных анаэробов окрасить по Граму, промикроскопировать. Препараты зарисовать. Обратить внимание на характер расположения спор, отношение к окраске.

2. Изучение особенностей роста культур анаэробов на различных питательных средах

Познакомиться с демонстрацией роста анаэробов на средах Виллиса-Хоббс, Китта-Тароцци, Вильсон-Блера, Цейсслера, на молоке.

3. Микробиологический диагноз анаэробных инфекций.

Для выделения чистых культур анаэробов берется раневое отделяемое. Исследование начинается с предварительной микроскопии исходного материала. Для этого готовят мазки и окрашивают по Граму. Обратить внимание на наличие капсул. Препараты зарисовать.

Посев производится на регенерированную, то есть предварительно прогретую на кипящей водяное бане в течение 10-20 мин для освобождения от растворенного в ней кислорода, среду Китта-Тароцци. Пастеровской пипеткой взять каплю гноя и, наклонив пробирку со средой Китта-Тароцци, по верхней стенке осторожно ввести каплю гноя на дно пробирки так, чтобы не попал воздух.

Зарегистрировать результаты посева материала, содержащего анаэробные микроорганизмы. Приготовить препарат-мазок, окрасить по Граму и зарисовать.

4. Ускоренное обнаружение С. реrfringens. Демонстрация роста на среде Вильсон-Блера, среде Китта-Тароцци и на молочной среде

Посев раневого отделяемого на среду Вильсон-Блера. Среда Вильсон-Блера предварительно расплавляется и выдается студентам в пробирках. Перед посевом ее необходимо охладить до температуры 40-45°С. Раневое отделяемое предварительно развести в стерильном физиологическом растворе. Для этого каплю исследуемого материала внести в пробирку с физиологическим раствором. Затем после перемешивания из этой пробирки каплю внести в пробирку со средой Вильсон-Блера, тщательно перемешать путем вдувания и выдувания содержимого и быстро набрать среду в трубки Вейон-Виньяля. Трубки положить в горизонтальном положении и дать им остыть. Концы трубок закрыть ватой.

6. Демонстрация препаратов, применяемых для профилактики и лечения анаэробных инфекций.

Рис. 1. Патогенные анаэробы Окраска по Граму	Рис. 2. Анаэробы в раневом отделяемом Окраска по Граму	Рис. 3. Выделенная культура анаэробов Окраска по Граму

Контрольные вопросы

1. Каковы основные биологические свойства анаэробных бактерий?

2. Какова роль анаэробных бактерий в патологии человека?

3. Какие заболевания вызывают анаэробные бактерии?

4. Каков механизм заражения при газовой гангрене?

5. Что является средой обитания анаэробных бактерий в естественных условиях?

6. Какие возбудители чаще всего вызывают газовую гангрену?

7. Какие токсины образуют возбудители газовой гангрены и на что они действуют?

8. Каковы особенности патогенеза газовой гангрены?

9. Какие условия способствуют развитию газовой гангрены?

10. По каким основным признакам различаются между собой C. perfringens, C. novyi, C. septicum, C. histolyticum?

11. Какие ускоренные методы применяются для обнаружения C. perfringens?

12. Какие микробиологические методы используются для диагностики анаэробных инфекций?

13. Каковы основные морфологические, культуральные и биохимические особенности возбудителя столбняка?

14. Какова природа токсина столбнячной палочки и на что он действует?

15. Чем отличается картина столбняка у человека и у мелких лабораторных животных?

16. Что является средой обитания для столбнячной палочки?

17. Чем объясняется высокая обсемененность почвы столбнячной палочкой в Краснодарском крае?

18. Каковы основные морфологические и биологические свойства возбудителя ботулизма?

19. Какова природа токсина палочки ботулизма? Какие типы токсина продуцирует возбудитель и что поражает токсин?

20. Какие условия способствуют размножению возбудителя ботулизма и накоплению токсина в пищевом продукте?

21. Какой материал берется для исследования при подозрении на ботулизм?

22. Какие методы применяются для обнаружения токсина возбудителя ботулизма и определения его типа?

23. Какие продукты чаще всего являются причиной отравления при ботулизме?

24. Как осуществляется специфическая профилактика и лечение ботулизма? Какие препараты применяются для этой цели?

25. Что представляет собой протоксин?

26. Какова природа и структура столбнячного токсина?

27. Как активируется столбнячный токсин?

28. Что поражает столбнячный токсин?

29. Каковы функции тяжелой и легкой цепей столбнячного токсина?

30. Как продвигается столбнячный токсин к ядрам двигательных нервов?

31. Каков защитный уровень антитоксина против столбнячного токсина?

32. Как осуществляется специфическое лечение и специфическая профилактика столбняка?

33. Как обеспечивается формирование коллективного иммунитета против столбняка и какие препараты применяют для этой цели?

34. Что такое прогенитарные токсические комплексы, образуемые палочкой ботулизма?

35. Какие структурные варианты прогенитарных токсических комплексов Вы знаете? Каков их состав?

36. Как происходит активация ботулинического токсина?

37. Какая разница между протеолитическими и непротеолитическими вариантами возбудителя ботулизма? Каким образом осуществляется у них активация токсина?

38. В чем заключается механизм активации ботулинического токсина?

39. Какие функции выполняют нетоксические белки в составе белковых комплексов?

40. Каковы физико-химические свойства токсина ботулизма? Какие токсины, кроме нейротоксина, образует возбудитель ботулизма?

41. Ботулизм - интоксикация или токсикоинфекция? Что поражает ботулинический токсин?

42. Какой синдром чаще всего наблюдается у больных ботулизмом?

ПРИЛОЖЕНИЕ К ЗАНЯТИЮ 7

МЕТОДЫ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКИ ГАЗОВОЙ ГАНГРЕНЫ

Бактериологический

Исследование проб на наличие патогенных клостридий.

Исследуемый материал.

Посев на среды:	Посев по 1 мл в жидкие питательные среды - мясные или казеиновые (5 пробирок): 1-я пробирка - непрогретая, 2-я - прогрев при 80°C - 15 минут, 3-я - прогрев при 100º C - 5 минут, 4-я - прогрев при 100º C - 10 минут, 5-я - прогрев при 100º C - 20 минут. Инкубация при 37º C 1-15 суток.
в чашках	в пробирке
Кровяной МПА	Среда Виллиса-Хоббс	Среда Вильсон-Блера
Анаэробные условия
Инкубация при 37º С 1-7 суток
Микроскопия, изоляция и пересев на мясную или казеиновую среду колоний, вызывающих гемолиз, опалесценцию или почернение на одной из указанных выше сред и состоящих из грамположительных палочек.	Выросшие культуры, содержащие массу грамположительных палочек, подвергают дальнейшему изучению.
Изучение свойств выделенных культур.	Проверка токсичности фильтратов или центрифугатов на мышах или морских свинках.	Посев на плотные питательные среды: чашки с кровяным МПА, со средой Виллиса-Хоббс, с бензидиновым МПА, столбик агара Вильсон-Блера.
Реакция нейтрализации с сыворотками:   C. perfringens типа А, С. novyi типа А, В, C. septicum, C. sordellii, C.histolyticum.	Инкубация при 37°C 1-4 суток. Изоляция колоний, вызывающих гемолиз, опалесценцию или почернение на питательных средах. Изучение свойств выделенных культур.

Ускоренный метод обнаружения C. perfringens

Одна пробирка каждой среды после внесения материала прогревается при 80°С 20 минут.

Почернение среды Вильсон-Блера в течение 3-х часов и бурное створаживание молока («штормовая» реакция) в течение 6 часов характерны для C. perfringens.

⇐ Предыдущая12345678910Следующая ⇒

Поделиться: