Методы окрашивания гистологических препаратов

Все красители, используемые в гистологической технике, подразделяются на 4 типа: кислые, основные, нейтральные и индифферентные. Кислые красители – это кислоты и кислые соли (эозин и кислый фуксин) Окрашиваемые структуры называются оксифильными (имеющими сродство к кислым красителям).

Это белковые компоненты цитоплазмы и неклеточные структуры (коллагеновые волокна).

Основные красители. Основные соли (гематоксилин, азур2 и кармин). Красящиеся структуры - Это структуры, богатые нуклеиновыми или иными кислотами - ядра, рибосомы, аморфный компонент межклеточного вещества.

Нейтральные красители - Смесь двух красителей: основного (азур 2) и кислого (эозин). Структуры, воспринимающие кислые красители, окрасятся эозином; пример - специфические гранулы в эозинофильных лейкоцитах. Ядра всех клеток окрашиваются азуром 2.

Индифферентные красители - Судан III, судан IV. Суданом окрашиваются жировые капли (в которых он растворяется).

 

Общие методы окраски

1. Окраска гематоксилин – эозином - самый распространённый метод окраски. Сочетает основной и кислый красители. Поэтому позволяет выявить почти все клетки и многие неклеточные структуры. Ядра приобретают сине-фиолетовый цвет, цитоплазма – желтовато-розовый цвет.

2 Окраска железным гематоксилином (по методу Генденгайна). Препарат предварительно обрабатывают (протравляют) железноаммиачными квасцами, а потом обрабатывают гематоксилином.Структуры приобретают коричневато-серый цвет. Хорошо выявляются структуры ядра, границы клеток, мышечные волокна.

Выявление неклеточных структур соединительной ткани.

1. Окраска по методу ван Гизона. Краситель - смесь растворов пикриновой кислоты и кислого фуксина.

Коллагеновые волокна (содержащиеся в межклеточном веществе соединительной ткани) окрашиваются в ярко-красный цвет, а элементы других тканей (напр., мышечные волокна) - в жёлтый цвет.

2. Окраска по методу Маллори - краситель является трёхцветным - это смесь кислого фуксина, анилинового синего, оранжевого, а также двух кислот. Коллагеновые волокна соединительной ткани окрашиваются в тёмно-синий цвет; многие другие структуры (ядра, мышечные волокна, эритроциты) - в оранжевый или красный цвет.

3. Импрегнация серебром. Препарат обрабатывают аммиачным раствором серебра, а затем - восстановителями.

В итоге, выделяющееся серебро осаждается на определённых волокнах соединительной ткани. Ретикулярные (аргирофильные) волокна приобретают чёрный цвет, коллагеновые волокна - коричневый, ядра клеток - светло-коричневый.

4. Окраска орсеином. Эластические волокна соединительной ткани окрашиваются в тёмно-красный цвет а, остальные структуры - в слабо-розовый цвет.

5. Окраска гематоксилин-пикрофуксином. Эластические волокна окрашиваются пикриновой кислотой в жёлтый цвет, коллагеновые волокна - в красный цвет, ядра клеток - окрашиваются гематоксилином в тёмно-фиолетовый цвет.

6. Окраска по методу Шморля. Используется для окраски костей и дентина. Предварительно кусочки материала подвергают декальцинации, а затем выдерживают в растворе алюмокалиевых квасцов.

Стенки костных полостей и канальцев (выстланные сетью коллагеновых волокон) окрашиваются в тёмно-коричневый цвет, остальной фон - светло-коричневый.

4. Окраска клеток соединительной ткани и крови. Окраска азур2-эозином: базофильные элементы окрашиваются азуром2 в тёмно-синий, оксифильные - в светло-красный цвет.

Окраска мазков по методу Романовского. Краситель - тот же, что и в предыдущем случае (азур2-эозин).

Эритроциты приобретают бледно-красный цвет, цитоплазма лейкоцитов - голубой или синий цвет, цитоплазматические гранулы окрашиваются в зависимости от их природы.

Выявление элементов нервной системы.

1. Импрегнация нитратом серебра. Фиксацию материала в формалине проводят не менее 7 дней.

Уплотнение образца осуществляют не путём заливки в парафине, а путём замораживания

При окрашивании срез последовательно обрабатывают растворами азотнокислого серебра, формалина, аммиачного серебра.

Элементы нервной системы (волокна, клетки и т.д.) окрашиваются в чёрный цвет, окружающие ткани - в светло-коричневый цвет.

2. Окраска толуидиновым синим по методу Ниссля. Толуидиновый синий окрашивает умеренно базофильные соединения в синий цвет. С его помощью в цитоплазме нервных клеток обнаруживаются глыбки базофильного вещества (т.н. субстанция Ниссля).

3. Окраска метиловым зелёным - пиронином по методу Браше. Метод служит для выявления РНК.

 

Лекция № 2

Цитология

Цитология – наука о клетке. Она изучает строение и функции тканевых клеток. Клетка – это элементарная структурная единица организма, состоящая из ядра, цитоплазмы и ограниченная клеточной оболочкой.

В 1838 г Шванн и Шлейден сформулировали клеточную теорию.

Клеточная теория включает положения:

1. Клетка является наименьшей единицей живого.

2. Клетка разных организмов имеет похожее строение.

3. Размножение клеток происходит путем деления.

4. Клетки у многоклеточных организмов функционируют в тесной связи друг с другом: они образуют ткани и органы.

Основные компоненты клетки: а) цитоплазма; б) ядро.

В состав цитоплазмы входят:

1. Цитолемма, 2. Гиалоплазма, 3. Органеллы, 4. Включения.

Цитолемма

Состоит из 3-х основных компонентов:

- биологическая мембрана;

- надмембранный слой – гликокаликс

- подмембранный слой.

Химический состав плазмолеммы: белки (60%), липиды (40%), углеводы (5-10%). Основу плазмолеммы составляет двойной слой липидных молекул. Каждый слой образован молекулами фосфолипидов и частично холестерина. В каждой липидной молекуле различают: а) гидрофильную головку; б) гидрофобные хвосты. Они связываются друг с другом и образуют билипидный слой. Гидрофильные головки соприкасаются с внешней и внутренней средой.

Белки мембраны делятся на:

1. Интегральные

2. Полуинтегральные

3. Поверхностные

По функции белки подразделяются на:

4. Структурные

5. Транспортные

6. Белки-рецепторы

7. Белки-ферменты

Функции плазмолеммы:

1. Барьерная

2. Рецепторная

3. Антигенная

4. Транспортная

5. Образование межклеточных контактов.

Способы транспорта веществ через плазмолемму:

1. простая диффузия

2. активный транспорт

3. везикулярный транспорт (эндоцитоз, экзоцитоз)

Типы межклеточных контактов:

1. Простой контакт – клетки взаимодействуют за счет макромолекул гликокаликса.

2. Десмосомный контакт. Клетки связаны друг с другом с помощью белков десмоплакинов и десмоглеинов.

1. Плотный контакт. Клетки прилегают вплотную, сцепляясь с помощью специальных белков.

2. Нексус – клетки сближаются на расстоянии 2 нм и пронизаны каналами – коннексонами.

3. Синаптический контакт. В синапсе различают пресинаптическую мембрану, синаптическую щель и постсинаптическую мембрану. Сигнал передается химическим веществом – медиатором.

Гликокаликс представляет собой соединения гликопротеидов и гликолипидов.

Функции гликокаликса:

- рецепторная

- межклеточные контакты

- пристеночное пищеварение.

Гиалоплазма

Гиалоплазма – внутренняя бесструктурная часть цитоплазмы, представляет собой коллоид, но может переходить в гель и золь. Состоит из воды и различных биополимеров, основную часть составляют белки.

Органеллы

Органеллы – постоянные структуры цитоплазмы клетки, имеющие специфическое строение и выполняющие определенные функции.

Классификация органелл:

1. Общие органеллы, присущие всем клеткам;

2. Специальные – имеются в определенных клетках.

Общие органеллы делятся на: мембранные и немембранные.

Специальные органеллы подразделяются на: цитоплазматические и органеллы клеточной поверхности.

К мембранным органеллам относятся: митохондрии, эндоплазматическая сеть, комплекс Гольджи, лизосомы, пероксисомы.

К немембранным органеллам относятся: рибосомы, клеточный центр, микротрубочки, микрофибриллы, микрофиламенты.

Строение и функции мембранных органелл

Толщина билипидных мембран органелл меньше (7 нанометров), чем в плазмолемме (10 нм). Мембраны органелл взаимодействуют друг с другом.

Митохондрии

Форма митохондрий может быть овальной, округлой, вытянутой. Стенка митохондрий образована двумя мембранами. Внутренняя мембрана внутри образует складки – крипты. Внутри митохондрий находятся митохондриальные ДНК и рибосомы.

Функция митохондрий – образование энергии.

⇐ Предыдущая12345678910Следующая ⇒

Поделиться: