ПОСТАНОВКА РЕАКЦИИ ХЕДДЛЬСОНА ПРИ БРУЦЕЛЛЕЗЕ

Принцип метода основан на использовании большого отмытого стекла фотопластины. концентрированной неразведённой сыворотки крови больного в нарастающих или уменьшающихся объёмах, дополняемой до определённого уровня физиологическим раствором, что приравнивается к разным разведениям, и окрашенного метиленовым синим диагностикума для лучшей видимости образующегося агглютината. Последнее очень важно при работе с диагностикумами из мелких бактерий (например, бруцелл). Ускорение реакции достигается смешиванием ингредиентов путём лёгкого покачивания стекла и помещения его в термостат при +37Сº. На одном стекле одновременно проводят анализ сывороток от нескольких больных. Результат получают через 2-5 минут в виде голубого агглютината разной активности в зависимости от разведений.

Приложение 5

СХЕМА ПОСТАНОВКИ ПЕРЕКРЁСТНОИ РЕАКЦИИ АГГЛЮТИНАЦИИ ПО КАСТЕЛЛАНИ

Принцип метода:

Перекрёстная РА направлена на извлечение групповых антител методом адсорбции и основана на правиле - специфический антиген (АГ) изымает из сыворотки все антитела — и специфические только для него, и групповые; неспецифический АГ — только групповые.

В данной реакции наряду со специфическим антигеном используют родственные гетерологические АГ. Например, у больного брюшным тифом (Т) сыворотка крови дала агглютинацию со специфическим диагностикумом Т и с групповым паратифа А.

 

Диагностикум с антигенами паратифа А (ABEF)

2 этап

1 этап

Исследуемая сыворотка с антителами (abcd)

ABCD

ABEF

ABCD

ABEF

AT АГ

2 часа  +37C°, 18 – 20 часов  в холод-ке

2 часа +37 C°, 18 – 20 часов  в холод-ке

Диагностикум с антигенами брюшного тифа (АВСД)

abcd ABCD

 

Оценка РА: в данном примере: больной страдает брюшным тифом.

Приложение 6

КРОВЯНО-КАПЕЛЬНАЯ РЕАКЦИЯ МИНКЕВИЧА (РА)

Принцип метода: основан на использовании для РА цельной крови без отделения кровяных клеток, но с их предварительным лизисом под влиянием дистиллированной воды.

На обезжиренное предметное стекло нанести каплю крови и каплю дистиллированной воды. В капле образовавшегося гемолизата эмульгировать каплю диагностикума. Покачивая стекло, учесть наступившую реакцию. Контролем служит физ. раствор с диагнустикумом.

При этом в опытной капле — на фоне красного гемолизата видны белые хлопья агглютината (сначала по периферии, затем — по всей капле). В контроле наблюдается общее помутнение.

Приложение 7

ПОСТАНОВКА РЕАКЦИИ НЕПРЯМОЙ (ПАССИВНОЙ) РЕАКЦИИ ГЕМАГЛЮТИНАЦИИ (РНГА ИЛИ РПГА)

Принцип РНГА основан на способности эритроцитов адсорбировать на своей поверхности микробные антигены. Сенсибилизированные таким образом эритроциты агглютинируются в присутствие гомологичной для антигена сыворотки с антителами. При этом реакция идёт между микробным антигеном и антителами, а эритроциты пассивно через них вовлекаются в этот процесс. Для постановки РНГА необходимы эритроциты, обработанные танином, на которых адсорбированы специфические антигены возбудителя. Антигенами в РНГА могут служить очищенные антигены соответствующих микробов, экстракты бактериальных взвесей, надосадочные жидкости формалиновых, спиртовых, гретых бактериальных вакцин, вирусов. Реакцию ставят в агглютинационных пробирках или в лунках иммунологического планшета.

 

 

СХЕМА ПОСТАНОВКИ РЕАКЦИИ

Ингредиенты	Разведение сыворотки								Контроли антигена
	1:10	1: 20	1: 40	1: 80	1: 160	1:320	1:640	1:2800	На спон-танную агглюти-нацию	На специфич- нось реакции
Физ. раствор, в мл	0.5	0.5	0.5	0.5	0.5	0.5	0.5	0.5	-	-
Испытуемая сыворотка в разведении 1:5 в мл, инактивированная 30мин при +56 C°	0.5	0.5	0.5	0.5	0.5	0.5	0.5	0.5 вылить	-	-
Эритроцитарный диагностикум, в мл	0.5	0.5	0.5	0.5	0.5	0.5	0.5	0.5	0.5	0.5
Контрольная положительная сыворотка	-	-	-	-	-	-	-	-	-	0.5
Контрольная отрицательн-ая сыворотка	-	-	-	-	-	-	-	-	0.5	-
Результат (пример)	++++	++++	++++	+++	++	+	-	-	++++	-

 

Результаты реакции учитывают через 2 часа инкубации при + 37Сº и вторично — через 24 часа стояния при комнатной температуре. Их оценка зависит от характера осадка эритроцитов.

+ + + +	Резко положительная реакция: эритроциты равномерно покрывают всю лунку планшета в виде разрыхлённого зонтика с неровными краями
+ + +	Положительная реакция: почти все эритроциты агглютинированы и покрывают дно, края неровные
+ +	Большинство эритроцитов не агглютинированы, осели на дно, изредка встречаются мелкие хлопья склеенных эритроцитов. Слабая РПГА
-	Скопление эритроцитов имеет вид маленького, довольно плотного диска (пуговка).

 

Титром сыворотки считают последнее её разведение, которое вызывает склеивание эритроцитов при полном или почти полном просветлении надосадочной жидкости (2 плюса).

Приложение 8

⇐ Предыдущая1234567Следующая ⇒

Поделиться: