Определение концентрации спермиев в счетной камере

Материал и оборудование: сперма, микроскопы, счетные камеры (с сеткой Горяева), смесители (меланжеры) для эритроцитов и лейкоцитов, покровные стекла, 3% раствор натрия хлорида, 96% спирт, эфир, марлевые салфетки, ватные тампоны.

Концентрация спермиев в сперме - это степень насыщенности спермы сперматозоидами. Она выражается количеством спермиев в 1 мл в миллиардах.

Определение концентрации спермиев в сперме складывается из: разбавления спермы в смесителе; подготовки счетной камеры; зарядки счетной камеры; подсчета спермиев; вычисления концентрации исследуемой спермы.

Разбавление спермы в меланжере (рис. 12). Для определения концентрации спермиев необходимо разбавить сперму в строго определенное количество раз. Для спермы быка и барана применяют эритроцитарный смеситель (с красным шариком), а для спермы хряка и жеребца - лейкоцитарный (с белым шариком).

В меланжер набирают сперму до метки 0,5, а затем 3% раствор натрия хлорида до верхней метки. Эту работу необходимо выполнить очень точно. Зажимают большим и указательным пальцами оба конца меланжера и встряхивают его в течение 2-3 минут до полного перемешивания спермы с раствором.

Подготовка счетной камеры. Счетная камера с сеткой Горяева - это толстое предметное стекло, поверхность которого бороздками разделена на три части. На среднем, окруженном бороздками поле, находится счетная сетка, площадь которой равна 9 мм². Это поле разделено на 225 больших квадратов, из них 25 в свою очередь разделены на 16 малых квадратиков. Площадь каждого малого квадратика составляет 1/400 мм².

Счетную камеру и покровное стекло протирают тампоном смоченным в смеси спирта и эфира (поровну). Вытирают насухо марлевой салфеткой. Покрывают камеру покровным стеклом (рис. 13) и притирают стекло к крайним пластинкам до появления радужных колец.

Зарядка счетной камеры. Из капилляра меланжера удаляют на сухой тампон первые 2-3 капли разбавленной спермы, 4-5-ую капли наносят на среднюю часть камеры у самого края притертого покровного стекла.

Подсчет спермиев. Камеру помещают на предметный столик микроскопа. Под малым увеличением находят сетку камеры, а затем переводят увеличение в 200-300 раз. Подсчет спермиев производят в 5-ти больших квадратах, которые разделены на маленькие. Считают в квадратах расположенных по диагонали или по углам и в центре. Считают головки спермиев расположенные внутри маленьких

квадратов и на верхней и левой линиях (рис. 14).

 

Вычисление концентрации спермиев. Концентрацию спермиев определяют по формуле:

, где:

С - концентрация спермиев;

П - число подсчитанных спермиев;

Д - степень разбавления;

N - число сосчитанных малых квадратов (80);

Р - глубина камеры (0,1 мм);

400 - множитель, введен в формулу для пересчета в 1 мм², так как площадь малого квадрата равна 1/400 мм².

Для точности определения концентрации спермиев рекомендуется заправлять обе сетки и при подсчете брать средний показатель. Расхождение результатов не должно превышать 10%. Если разница больше 10%, подсчет повторяют третий раз и берут среднее из двух подсчетов, расходящихся не более чем на 10%.

⇐ Предыдущая12345678910Следующая ⇒

Поделиться: