Оценка качества спермы по времени обесцвечивания метиленовой сини (в минутах)

Качество спермы	Бык	Баран
Хорошее Среднее Плохое (непригодное для использования)	5 - 10 11 - 30 более 30	3 - 7 8 - 12 более 12

Результат является более объективным, если вычисляют и активность дегидрогеназы, поскольку с помощью этого показателя учитывается как подвижность спермиев, так и их концентрация.

Активность дегидрогеназы в условных единицах получают по формуле:

, где

Да – активность дегидрогеназы;

Пс – подвижность спермиев в баллах;

t – время обесцвечивания раствора метиленового синего в минутах;

С – концентрация спермиев (млрд./мл).

     Допустимая активность дегидрогеназы должна быть в сперме быка в пределах 16,8 у.е., для барана 9,6 у.е.

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСМОТИЧЕСКОЙ

РЕЗИСТЕНТНОСТИ СПЕРМИЕВ

Материал и оборудование: флаконы из-под пенициллина с резиновыми пробками, раствор натрия хлорида различной концентрации: 0,1; 0,15; 0,2; 0,25; 0,3; 0.35; 0.4; 0,5; 0,6%, термостат, микропипетки, мерные пипетки, термостолики, предметные и покровные стекла, стеклянные палочки.

Определение осмотической резистентности (Ро) основано на устойчивости спермиев к гипотоническим растворам натрия хлорида. Осмотическую резистентность спермиев определяют как в свежеполученной, так и разбавленной сперме, а так же сохраненной при плюсовой температуре и в заморожено-оттаянной сперме. Этот показатель позволяет судить о биологических свойствах спермиев защитной способности сред. При определении осмотической резистентности спермиев в эякуляте соблюдают правила, предупреждающие холодовой шок спермиев. Лабораторную посуду и растворы подогревают до 30-35°С.

Для испытания готовят ряд из 9 флаконов, содержащих по 1 мл раствора натрия хлорида различной концентрации. Флаконы с растворами закрывают резиновыми пробками и ставят в термостат при 30-37^оС на 10-15 минут. В каждый флакон вносят по 0,01 мл спермы быка. Флаконы с разбавленной спермой выдерживают 3 часа при температуре 18-22^оС и определяют подвижность спермиев.

За резистентность принимают значение концентрации раствора натрия хлорида того флакона, в котором спермии сохранили подвижность не ниже 0,5 балла. Чем ниже концентрация раствора, тем выше осмотическая резистентность. Минимальная осмотическая резистентность – 0,6. При гибели спермиев в 0,6% растворе считают, что Ро = 0.

При определении качества спермы по Ро лучше пользоваться коэффициентом резистентности (Рк), который вычисляют по формуле:

, где:

0,1 - постоянный коэффициент;

Ро - осмотическая резистентность.

Наивысший показатель Рк = 1.

Сперму быка в зависимости от Рк делят по качеству на четыре категории: высшего качества – 0,5-1,0;

хорошего качества – 0,26-0,49;

удовлетворительного – 0,21-0,25;

неудовлетворительного – 0,2 и ниже.

ОПРЕДЕЛЕНИЕ АБСОЛЮТНОЙ

ВЫЖИВАЕМОСТИ СПЕРМИЕВ

Материал и оборудование: сперма, микроскопы, обогревательные столики, сухие стерильные пробирки с пробками на 2 мл, стерильные мерные пипетки (1-2 см³), штатив, синтетический разбавитель, термос со льдом, стерильные стеклянные палочки, предметные и покровные стекла.

Под выживаемостью спермиев подразумевают продолжительность их жизни вне организма в определенных условиях. Это важный показатель качества спермы, поскольку он дает возможность предсказать оплодотворяющую способность спермы. Выживаемость спермиев выражается абсолютной выживаемостью (S).

Для определения абсолютного показателя выживаемости спермиев берут 11 стерильных пробирок емкостью по 2 мл и нумеруют восковым карандашом. Во все пробирки, за исключением первой, наливают по 0,5 мл синтетической среды. В первую и вторую пробирки вносят по 0,5 мл неразбавленной спермы. Первая пробирка в дальнейшем служит контролем.

Сперму во второй пробирке тщательно перемешивают со средой путем пипетирования и из нее переносят 0,5 мл в третью пробирку; в третьей пробирке смесь перемешивают и переносят в четвертую и т.д. Из последней пробирки (11-ой) 0,5 мл смеси выливают. Таким образом, в первой пробирке сперма не разбавленная, а в пробирках со 2 по 11-ую сперма разбавлена в 2, 4, 8, 16, 32, 64, 128, 256, 512, 1024 раза.

Из каждой пробирки на теплое предметное стекло берут каплю спермы и оценивают подвижность. Пробирки устанавливают в штатив, закрывают стерильными пробками и ставят на хранение в термос со льдом.

В последующем ежедневно оценивают подвижность спермиев под микроскопом при температуре 40°С. Оценку подвижности проводят до установления гибели всех спермиев во всех пробирках. Результаты исследований заносят в таблицу. Показатель абсолютной выживаемости (S) определяют по формуле:

S = а ₁ t ₁ + а ₂ t ₂ + а ₃ t ₃ . . . а _n t _n, где:

а ₁ а ₂ а ₃ ... а _n - подвижность спермиев за интервалы времени, в баллах;

t ₁ t ₂ t ₃ ... t _n - последовательные интервалы времени, в часах.

Интервалы времени в часах вычисляют по формуле:

, где:

T _n + 1 - время в часах от начала опыта до последующего определения подвижности;

T _n - 1 - время в часах от начала опыта до предыдущего определения подвижности.

Хорошая сперма быка и барана, разбавленная синтетической средой в 16-32 раза, должна иметь показатель абсолютной выживаемости спермиев не ниже 1400, хряка - 900, жеребца - 400 и выше.

⇐ Предыдущая3456789101112Следующая ⇒

Поделиться: