Техника разбавления спермы производителей синтетическими средами

Материал и оборудование: свежеполученная сперма, свежеприготовленная среда, мензурки, пипетки, термометры, микроскопы, предметные и покровные стекла.

После предварительной оценки сперму разбавляют средой в соотношении 1:1 или 1:2. Через 5-10 минут среда с температурой 25-30^оС небольшими порциями добавляют по стенке в колбу со спермой и осторожно перемешивают.

В зависимости от подвижности и концентрации спермиев сперму быка разбавляют в 20-50 и более раз, чтобы в одной дозе разбавленной спермы для всех способов хранения перед осеменением было не менее 10 млн. спермиев с ППД 4 балла (см. табл. 11, 12).

Сперму барана разбавляют в 2 (1:1) - 4 (1:3) раза с концентрацией в дозе не менее 80 млн. спермиев.

Сперму хряка разбавляют в 2 (1:1) - 10 (1:9) раз с концентрацией в дозе не менее 3 млрд. спермиев.

Сперму жеребца разбавляют в 4 (1:3) раза с концентрацией в дозе не менее 3 млрд. спермиев.

 

 

Таблица 11

Таблица степеней разбавления спермы быков из расчета получения 10-12 млн. подвижных спермиев в дозе после замораживания в полипропиленовых соломинках (0,25 мл)

Концентрация спермиев в млрд./мл

2,0

1:17

1:15

1:13

Таблица 12

Таблица степеней разбавления спермы быков из расчета получения 10-12 млн. подвижных спермиев в дозе после замораживания в облицованных гранулах (0,33 мл)

Концентрация спермиев в млрд./мл

2,0

1:32

1:28

1:26

1,9

1:16

1:14

1:12

1,9

1:30

1:26

1:24

1,8

1:15

1:13

1:11

1,8

1:28

1:24

1:22

1,7

1:14

1:13

1:11

1,7

1:26

1:24

1:22

1,6

1:13

1:12

1:10

1,6

1:24

1:22

1:20

1,5

1:12

1:11

1:9

1,5

1:22

1:20

1:18

1,4

1:12

1:10

1:8

1,4

1:20

1:20

1:16

1,3

1:11

1:9

1:7

1,3

1:20

1:18

1:16

1,2

1:10

1:8

1:7 1:6

1,2

1:18

1:16

1:14

1,1

1:9

1:7

1:6

1,1

1:18

1:14

1:12

1,0

1:8

1:7

1:6

1,0

1:16

1:14

1:12

0,9

1:7

1:6

1:5

0,9

1:14

1:12

1:10

0,8

1:6

1:5

1:4

0,8

1:12

1:10

1:8

0,7

1:5

1:4

1:2

0,7

1:10

1:9

1:8

Подвижность спермиев, баллов

Подвижность спермиев, баллов

ПОДГОТОВКА ГЛУБОКОЗАМОРОЖЕННОЙ СПЕРМЫ К ОСЕМЕНЕНИЮ

Материал и оборудование:  глубокозамороженная сперма, водяная баня (биологический термостат, оттаиватель), микроскопы, термостолики, предметные и покровные стекла, 2,9% раствор натрия лимоннокислого, термометр, пипетки, корнцанг, пинцет, тампоны спиртовые, салфетки.

Оттаивание глубокозамороженной спермы в различной расфасовке - в необлицованных гранулах, соломинках (пайэтах), облицованных гранулах (капсулах, пилеттах), пакетах, является ответственной операцией, которая требует определенных навыков и строгого выполнения целого ряда правил.

До начала оттаивания необходимо подготовить все инструменты, водяную баню (биологический термостат, оттаиватель спермы), микроскоп с термостоликом к работе.

Температура воды в водяной бане (биологическом термостате) должна быть в пределах 40-42°С.

Оттаивание глубокозамороженной спермы быка

Оттаивание спермы быка с необлицованных гранулах

Объемом 0,1- 0,2 мл

В гнездо штатива помещают простерилизованный флакон или ампулу с 2,9% раствором натрия лимоннокислого (1 мл). Ампулу предварительно вскрывают, исключая при этом попадание стекла внутрь. Вскрыть ампулу необходимо в расширенной части, для обеспечения свободного прохождения гранулы. Выдерживают флакон (ампулу) с раствором натрия лимоннокислого в водяной бане не менее 3-х минут при температуре 40-42°С.

Стерильный корнцанг или пинцет вносят в горловину сосуда Дьюара и охлаждают в парах азота. Охлажденным корнцангом или пинцетом берут гранулу из канистры (тубы, контейнера) и быстро переносят в подготовленный для оттаивания флакон или ампулу. Не вынимая из воды, круговыми движениями покачивают флакон или ампулу до полного растворения гранулы. Процесс таяния обычно продолжается 7-8 секунд. После этого флакон (ампулу) со спермой вынимают из воды и ставят на стол. Температура в помещении лаборатории должна быть не менее +20°С.

 Нельзя помещать при оттаивании во флакон (ампулу) больше одной гранулы.

Оценивают подвижность спермиев под микроскопом в раздавленной капле.

Оттаивание гранул спермы объемом 0,5 мл

Для осеменения коров и телок может поступать сперма замороженная в гранулах объемом 0,5 мл, не требующая при оттаивании дополнительного внесения 2,9% раствора натрия лимоннокислого. Для оттаивания такой спермы необходимо стерильным, предварительно охлажденным пинцетом или корнцангом взять из сосуда Дьюара две гранулы (доза спермы) и поместить их в стерильный стеклянный флакон, подогретый на водяной бане (биологическом термостате) до 40-42°С. Флакон с гранулами, не вынимая из воды осторожно вращают круговыми движениями до полного таяния гранул, после чего флакон переносят на лабораторный стол при комнатной температуре (не менее +20°С).

Время таяния двух гранул объемом 0,5 мл составляет 1,5-2 минуты.

Нельзя в один флакон помещать более двух гранул.

Оттаивание спермы, замороженной в соломинках (пайэтах)

В термосе или биологическом термостате, где проводят оттаивание спермы, замороженной в пайэтах, температура воды должна быть равна 38 ± 0,5°С. Операцию по оттаиванию спермы осуществляют следующим образом: правой рукой открывают крышку сосуда Дьюара, а левой – до горловины сосуда поднимают пластмассовый стакан со спермой. Затем правой рукой берут специальные ножницы или пинцет и концы инструмента охлаждают в жидком азоте. Охлажденным инструментом вынимают одну соломинку и быстро стряхивают с нее остатки азота и переносят в воду для оттаивания.

Соломинки помещают в воду заводской пробиркой вниз, а лабораторной вверх. Стакан с соломинками опускают на дно сосуда Дьюара, сосуд закрывают крышкой. В течение 10-11 секунд. температура в соломинках повышается до 0°С. Затем соломинку вынимают, удаляют салфеткой капли воды.

Одновременно можно проводить оттаивание не более двух доз спермы при условии немедленного использования.

Оценивают подвижность спермиев по общепринятой методике.

⇐ Предыдущая45678910111213Следующая ⇒

Поделиться: