При помощи оптического стандарта

Материал и оборудование: сперма, оптический стандарт, пробирка (диаметр должен соответствовать диаметру оптического стандарта), 1% раствор натрия хлорида, микропипетка (0,1 см³), салфетки, мерная пипетка (5,0 см³), лист с печатным текстом.

В пустую пробирку вносят 1,0 мл 1% раствора натрия хлорида. Микропипеткой набирают 0,1 мл свежеполученной профильтрованной спермы. Конец пипетки вытирают снаружи салфеткой, а затем два раза промывают ее раствором в пробирке. Пробирку слегка встряхивают и держат рядом со стандартом. Стандарт предварительно должен быть хорошо взболтан. К пробиркам сзади вплотную прикладывают лист с печатным текстом.

К исследуемой сперме добавляют пипеткой 1% раствор натрия хлорида в таком количестве, чтобы высота букв шрифта и оптическая плотность были одинаковы со стандартом. Каждый раз при добавлении раствора содержимое пробирки и стандарт встряхивают для получения равномерной взвеси.

После того как оптическая плотность исследуемой спермы и стандарта совпадут, проводят расчет по формуле:

К = 50 х ( n + 0,1), где:

К - концентрация спермы (млн./мл);

n - объем внесенного 1%-ного раствора натрия хлорида (мл);

50 - коэффициент.     

Оптический стандарт соответствует оптической плотности спермы хряков с концентрацией спермиев 5 млн./мл.

Пример: Для выравнивания оптической плотности до стандарта к исследуемой сперме добавлено всего 4,5 мл 1% раствора натрия хлорида (с учетом ранее налитого в пустую пробирку).

К = 50 х (4,5 + 0,1) = 50 х 4,6 = 230 (млн./мл)

Следовательно, в 1 мл исследуемой спермы содержится 230 млн. спермиев.

Определение концентрации спермиев жеребца

По стандартам

Материал и оборудование: сперма, стандарты.

     Стандарты представляют собой стеклянные запаянные пробирки одинакового диаметра с жидкостью имитирующей сперму жеребца разной концентрации: 10 - 20 - 200 - 300 и 500 млн. спермиев в 1 мл.

Сперму наливают в прилагаемую пустую пробирку такого же диаметра и сравнивают со стандартом. Стандарты, предварительно встряхивают, чтобы осадок равномерно размешался. Пробирки просматривают на свет, при этом подбирают стандарт, наиболее близкий по густоте к определяемой сперме, который и принимают за ее концентрацию. Концентрация спермиев может быть определена и как промежуточная между двумя стандартами.

При концентрации более 500 млн. спермиев в 1 мл сперму можно разбавлять 7% раствором глюкозы в 2 раза (1:1), затем установить концентрацию по стандартам и сделать соответствующий пересчет на неразбавленную сперму.

Для большей точности определения к сравниваемым пробиркам сзади вплотную прикладывают стеклянную палочку.

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ИНТЕНСИВНОСТИ ДЫХАНИЯ СПЕРМИЕВ

(активность дегидрогеназы)

Материал и оборудование: свежеполученная сперма, 0,01% раствор метиленового синего, стеклянные капилляры, стеклянные палочки, глазные пипетки, лист белой бумаги, резиновая трубка, термостат.

Метод основывается на том, что в анаэробных условиях спермии используют для дыхания кислород из молекул метиленового синего, в результате чего раствор обесцвечивается. Поскольку дыхание происходит под влиянием дегидрогеназы, то по существу скорость обесцвечивания раствора метиленового синего показывает активность названного энзима.

Для определения на теплое (30-37°С) предметное стекло наносят каплю спермы и каплю метиленового синего (30°С). Капли быстро перемешивают и смесь набирают в два теплых стеклянных капилляра длина которых должна быть не менее 5-6 см и диаметр 0,8-1,0 мм. Длина столба в трубке должна быть примерно 2-3 см. В столбе смеси не должно быть пузырьков воздуха. Капилляры кладут горизонтально и помещают в термостат (+ 37^оС) на белую бумагу. Регистрируют время, в течение которого обесцвечивается раствор метиленового синего.

Таблица 5

⇐ Предыдущая234567891011Следующая ⇒

Поделиться: