|
Архитектура Аудит Военная наука Иностранные языки Медицина Металлургия Метрология Образование Политология Производство Психология Стандартизация Технологии |
|
|
Архитектура Аудит Военная наука Иностранные языки Медицина Металлургия Метрология Образование Политология Производство Психология Стандартизация Технологии |
Лекция №4. «Искусственное осеменение самок сельскохозяйственных животных»Стр 1 из 5Следующая ⇒
Лекция №4. «Искусственное осеменение самок сельскохозяйственных животных» Искусственное осеменение – репродуктивная технология, при которой сперму, полученную от самца-производителя с помощью специальных инструментов, вводят в половые пути самки для ее плодотворного осеменения. Искусственное осеменение позволяет более эффективно вести индивидуальный отбор, подбор и спаривание родительских пар, контролировать распространение инфекций, передаваемых половым путем, быстро оценивать по качеству потомства самцов, использовать для воспроизводства только ценных в племенном отношении производителей и получать от них максимально возможное количество потомков. Современная технология длительного хранения спермы вне организма в замороженном состоянии дает возможность транспортировать ее на любые расстояния, осеменять самок в наиболее благоприятное для оплодотворение время, облегчает разведение редких пород животных и может способствовать сохранению генофонда исчезающих видов домашних и диких животных. Технология искусственного осеменения животных состоит из следующих процессов: 1) получение спермы; 2) оценка качества эякулята; 3) разбавление и хранение спермы вне организма; 4) выбор времени осеменения самки (диагностика половой охоты); 5) введение спермы в половые пути самки. Различают искусственное осеменение свежеполученной, охлажденной (сохраняемой при температуре + 2…50 С) и замороженно-оттаянной спермой. В настоящее время искусственное осеменение животных широко практикуется во многих странах мира. Например, в молочном скотоводстве в развитых странах искусственно осеменяют до 100% маточного поголовья. Свиноводство занимает второе место по масштабам применения искусственного осеменения. Ограничения по применению ИО существует только в коневодстве. Получение спермы Получать сперму от самцов для исследования и искусственного осеменения самок можно уретральными и влагалищными методами. Уретральные методы включают в себя использование искусственной вагины (метод наиболее широко распространен в практике), получение спермы посредством электроэякуляции, массажа, мастурбации, применения фистулы и спермособирателей. К влагалищным методам относят губочный, зеркальный (посредством влагалищного зеркала), а также выжимание спермы из ампуловидных расширений у птиц после убоя. Рис. 8. Получение спермы от хряка на искусственную вагину, вмонтированную в чучело
Рис. 9. Получение спермы от быка на передвижном фантом-чучеле, производства Минитюб: 1 – металлический корпус с цинковым покрытием; 2 – мягкая обивка наружной и внутренней поверхности задней части фантома-чучела; 3 – покрытие из прочного синтетического материала передней части фантома-чучела; 4 – внутри конструкции имеется сидение для специалиста по сбору спермы (оператора).
Рис. 10. Чучело для получения спермы хряка методом мануального массажа головки пениса в комплекте с термостаканом и спермоприемником с одноразовым фильтром В свиноводстве наиболее часто получают сперму на чучело c использованием искусственной вагины либо методом мастурбации – мануального массажа головки полового члена рукой оператора (рис.10). Применение метода мануального массажа - раздражения эрогенных зон головки полового члена хряка позволяет получать раздельные по фракциям эякуляты (меньшего объема, но с большей концентрацией спермиев по сравнению с эякулятами, получаемыми на искусственную вагину). Посредством этого метода можно также получать сперму от кобелей, жеребцов и самцов других видов животных с барочувствительными половыми членами. Мастурбация – основной способ получения спермы от кобелей.
Рис. 11. Электроэякулятор для получения спермы от быка, производства Минитюб. В комплект входятящик/чемодан для переноски, биполярный электороэякулятор, диаметром 2, 5 см; прибор управления; батареи; прибор подзарядки
Сперму от самцов можно также получать принудительно с помощью специального прибора - электроэякулятора. Возможность получения спермы с помощью электрических импульсов впервые была продемонстрирована в 1922 г. доктором Bartelli, изучавшим действие электрического тока на головной мозг морских свинок. Электрошок вызывал у подопытных животных эякуляцию. Первый электроэякулятор был разработан для баранов в 1936 г. австралийским ученым R.M. Gann. Для индукции эякуляции он воздействовал электротоком на пояснично-крестцовый отдел спинного мозга путем наложения одного электрода на 4-й поясничный – 1-й крестцовый позвонки и введения другого электрода в прямую кишку. В настоящее время для индукции электроякуляции применяются только трансректальные биполярные электроэякуляторы, которые состоят из биполярного электрода, вводимого в прямую кишку, и источника питания (напряжение электрического тока от 0 до 30 V, сила тока - 0, 5…1 A). Этот метод получения является вспомогательным и в основном применяют для получения спермы от самцов диких животных и птицы, разводимых в неволе.
Рис.15 Эксцентричное прикрепление шейки к головке спермия жеребца (England G.C.W., 1996)
Рис.16. Счетная камера Горяева: А – вид сверху; Б - вид сбоку; В - сетка счетной камеры; Г – порядок подсчета в большом квадрате (16-ти маленьких квадратов)
Рис.17. Меланжеры для разбавления спермы: А – эритроцитарный для разбавления спермы быка, барана в 100-200 раз; Б - лейкоцитарный для разбавления спермы хряка жеребца в 10-20 раз Цифровая система Sperm Vision™ для оценки качества спермы. Для определения объема эякулята используют электронные весы, оценки его качества - фотометр SDM6 (рис.18) и цифровую систему Sperm Vision™ (рис.19).
Рис. 18. Фотометр SDM6 для оценки спермы
С помощью фотометра SDM6 определяют концентрацию спермы (по изменению фотометрических характеристик светового луча, пропускаемого через микрокюветку с образцом спермы), автоматически рассчитывают объем разбавителя и количество получаемых спермодоз. Забор образцов спермы для анализа проводится при помощи автоматического дилютор-дозатора. Прибор имеет небольшие габаритные размеры, легок в управлении, результаты исследований отличаются высокой точностью и практически мгновенно выводятся на экран монитора (2 сек/образец). Концентрация спермы измеряется в млрд/мл.
Рис. 19. Оценка спермы в цифровой системе Sperm Vision™
Разбавление и хранение спермы. Свежеполученную сперму используют сразу же после оценки ее качества. Свежеполученная сперма барана и быка к использованию допускается в течение не более 30 мин, жеребца 60 мин, хряка – 120 мин. Причиной быстрой гибели спермиев являются: истощение запасов питательных веществ в плазме спермы (сперма жеребца, хряка) или отравление продуктами гликолиза (без кислородного расщепления глюкозы до молочной кислоты) – (сперма быка, барана, козла). Принципы хранения спермы вне организма. Сохранение спермы вне организма возможно лишь при нахождении спермиев в анабиотическом состоянии. Перевод спермиев в состояние анабиоза и соответственно хранение спермы вне организма обеспечивают следующими способами: ☻ охлаждением спермы, разбавленной в специальной протекторной среде, до температуры тающего льда (+ 2-4 0C); ☻ замораживанием разбавленной в криопротекторной среде спермы в жидком азоте (- 1960C); ☻ снижением pH спермы до 6, 3-6, 4 при помощи искусственной среды, содержащей органические кислоты (угольную, лимонную и др.) и ее хранением при температуры + 2-22 0C ☻ разбавлением спермы искусственной средой, содержащей химической вещество, блокирующее обменные процессы в половых клетках (хелатон и др.) при температуре + 16 или 20 0C Выбор разбавителя обусловлен видовыми особенностями спермы и способом ее хранения. 5.Химический состав плазмы спермы (неорганические вещества)
6.Химический состав цельной спермы (органические вещества)
Примечание: * - плазма спермы; T – семенник; E – придаток семенника; A – ампулы спермиопроводов; V – пузырьковидные железы
В зависимости от цели разбавления спермы и условий ее хранения в состав сред для разбавления спермы входят сахара (глюкоза, лактоза и др.), соли (натрия цитрат и др.), желток куриного яйца, антибактериальные препараты (спермосан-3), а также глицерин, предохраняющий клетки от отрицательного воздействия низких температур. Чтобы предупредить контаминацию микроорганизмами, разбавитель готовят в стерильном боксе. Некоторые компоненты не выдерживают нагревания (желток куриного яйца, глицерин), поэтому стерилизовать их термическими способами нельзя. Компоненты растворяют в прокипяченной дистиллированной воде. Разбавитель хранят при температуре 35°С не более З…4ч. Можно использовать и заранее подготовленную среду, хранящуюся и стерильной упаковке. Охлаждение. Традиционный способ хранения спермы барана, быка и жеребца — ее охлаждение до 2...5°С. В этом случае разбавленную сперму барана сохраняют в течение 24 ч, жеребца — 48 ч и быка — 79 ч после получения. При этом для разбавления спермы барана и быка используют глюкозо-цитратно-желточной среды (ГЦЖ), жеребца – глюкозо-желточную, лактозо-желточную или молочно-желточную среды (сокращенно ГЖ, ЛЖ, МЖ). Среды готовят непосредственно перед получением спермы. Сперму разбавляют сразу же после оценки ее качества. Температуры спермы и среды должна быть одинаковой, чтобы предупредить температурный шок спермиев. Разбавляют сперму в градуированном смесителе. Среду добавляют к сперме небольшими порциями. После добавления каждой порции смеситель вращают, чтобы равномерно смешать среду и сперму. Сперму хряков хранят при температуре 16...20°С, разбавляя ее средами, содержащими хелатон. Наиболее распространенной является глюкозо-хелато-цитратная среда (ГХЦ), в состав которой входят следующие компоненты: глюкоза — 6 г, динатриевая соль этилендиаминтетрауксусной кислоты — 0, 37 г, натрия гидрокарбонат — 0, 12 г, натрия нитрат — 3, 6 г, спермосан-3 — 25...30 тыс. ЕД, вода дистиллированная — 100 мл. Криоконсервация, или замораживание - самый перспективный способ хранения спермы животных и человека вне организма. Замораживание - основной способ хранения спермы быка. Сперму замораживают в облицованных гранулах, необлицованных гранулах и в соломенках (пайеттах). Сперму быка, предназначенную для хранения в виде необлицованных гранул, разбавляют лактозо-желточно-глицериновой средой, в состав которой входит 11, 5 г лактозы, 100 мл дистиллированной воды, 20 мл желтка куриного яйца, 5 мл глицерина, 50 тыс. ЕД спермосана-3. Простерилизованный раствор лактозы охлаждают до 35...400 С и добавляют остальные компоненты. Перед замораживанием разбавленную сперму выдерживают в холодильнике при температуре 50 C 3...4 ч. В это время, называемое периодом эквилибрации, выравниваются концентрации глицерина в среде и спермиях. Глицерин защищает спермии от действия низких температур только при проникновении внутрь клеток. Сперму быка и барана можно замораживать в виде необлицованных гранул на фторопластовой пластине. Объем лунок должен быть известен заранее, чтобы не измерять его в условиях низких температур. Пластину предварительно стерилизуют методом ультрафиолетового облучения (УФО) или спиртовыми тампонами, затем погружают в жидкий азот и выдерживают в нем до прекращения кипения. После этого пластину укрепляют на расстоянии 5...10см от поверхности азота (при температуре – 160… -170°C) и в течение 2 мин быстро заполняют лунки спермой из пипетки или шприца (рис. 2.13). Затем пластину вновь погружают в жидкий азот на 1...2мин. После замораживания спермы пластину поднимают из жидкого азота, гранулы спермы собирают в сачок или контейнер, пересыпают в охлажденный контейнер и переносят в сосуды Дьюара с жидким азотом.
Рис. 20. Заполнение спермой лунок охлажденной фторопластовой пластины: 1 — широкогорлый сосуд Дьюара (или ванна с жидким азотом); 2 — фторопластовая пластина; 3 — лунки на 0, 1…0, 2 или 0, 5 мл; 4 — держатель пластины; 5 — пипетка для фасовки спермы
Чтобы получить облицованные гранулы, сперму быка разбавляют в 2 этапа (средой № 1 и № 2) непосредственно в полиэтиленовом спермоприемнике. Среда № 1: 11%-й раствор лактозы — 63 мл (можно заменить таким же количеством 11 %-го раствора сахарозы); желток куриного яйца —30 мл; глицерин — 7 мл; спермосан-3 — 50... 90 тыс. ЕД. Среда № 2: вода дистиллированная — 100 мл; лактоза — 6 г (можно заменить таким же количеством сахарозы); натрия цитрат — 1, 4 г; глицерин — 5 мл; спермосан-3-50...90 тыс. ЕД. Спермоприемник соединяют с тонкостенной полимерной трубкой, в которую выдавливают разбавленную сперму. Заполненную спермой трубку разделяют с помощью автомата ПРЖ (путем термической сварки) на отдельные дозы по 0, 25...0, 33 мл с герметизацией. Облицованные (герметизированные) гранулы помещают в алюминиевые контейнеры, которые закрывают поролоновыми пробками. Контейнеры закрепляют в обоймах специального устройства, которое помещают в холодильник. После 4...6-час экспозиции при температуре 2...5°С обойму аппарата с контейнерами погружают в жидкий азот на 8...10 мин и затем переносят в сосуд Дьюара для хранения. В полипропиленовых соломинках (пайеттах) сперму быка замораживают по 0, 25 или 0, 5 мл. Один конец соломинки предварительно закрывают специальным герметизирующим составом. Эякулят разбавляют лактозо-фруктозо-раффинозо-магниево-глицерино-желточной средой (ЛФРМГЖ) либо трисбуферной средой, содержащей трисгидрооксиметиламинометан, лимонную кислоту, фруктозу, желток куриного яйца и глицерин, или коммерческими криопротекторными средами, не содержащими компонентов животного происхождения, например Triladyl, Biladyl (Minitube, Германия). После разбавления сперму расфасовывают в пайетты вакуумным способом. Заполненные спермой соломинки герметизируют, маркируют, укладывают на штативы и ставят на эквилибрацию на З...4 ч при температуре 4°С, затем замораживают в парах жидкого азота при температуре -120 - 130°С в течение 5 мин на специальном устройстве, которое за счет пенопластовых поплавков удерживается на заданной высоте над его поверхностью. Технология замораживания спермы быка в полипропиленовых соломинках была разработана в 1975 г. во Франции профессором Л. Кассу. В СССР она впервые была внедрена в Литве в 1983 г. В настоящее время эта методика замораживания спермы является основной и наиболее совершенной. На всех этапах работы со спермой при ее замораживании в соломинках используются высокотехнологическое цифровое оборудование и современные расходные материалы. Управление основными технологическими процессами осуществляется при помощи гибкой, многофункциональной и модульной программы Минитюб ИДА (Minitube IDA). Программное обеспечение имеется на английском, немецком, испанском, итальянском и русском языках. Программа позволяет автоматизировать практически все процессы работы со спермой на крупных племпредприятиях – от оценки качества полученного экулята до определения объема разбавителя, разбавления и охлаждения спермы, ее расфасовки на спермодозы, герметизации и маркирования пайетт, а также их программируемого замораживания. Идентификация каждого эякулята может быть осуществлена вручную, штрих-кодом или с помощью транспондера. Размораживание спермы
Канистру надежно фиксируют с помощью опорных крючков, цепляют подвешивающее устройство за проволоку или веревочку, закрепленную на стенке, зажимают его хирургическим пинцетом с замком. Затем пинцеты опускают в горловину сосуда Дьюара на некоторое время для охлаждения и только после этого достают дозу спермы и размораживают ее на подготовленной водяной бане. Время с момента извлечения спермы из жидкого азота до перенесения ее на водяную баню не должно превышать 3 с. Увеличение промежутка времени ухудшает качество спермы. Размороженную сперму необходимо использовать в течение 10... 15 мин, поэтому рекомендуют ее размораживать только по одной дозе. Размороженная сперма должна находиться при комнатной температуре (не ниже 18°С). За указанный срок необходимо оценить качество спермы и ввести ее в половые пути самки, что возможно лишь в том случае, если на пункте искусственного осеменения соблюдены все требования температурного и санитарного режима. Вынув дозу спермы из водяной бани, протирают поверхность упаковки марлевой салфеткой, после чего исследуют спермии под микроскопом на подвижность. Затем подготавливают инструмент для осеменения. Упаковку с зоошприцем обрабатывают спиртом, извлекают корпус (фланец и толкатель при этом способе осеменения не используют), в который вставляют дозу спермы, и навинчивают корпус зоошприца на конец стерильного удлинителя, состоящего из трубчатого металлического корпуса и стержня с дисковым упором. Нажимая на упор стержня, продвигают облицованную гранулу к переднему концу корпуса зоошприца и через выходное отверстие прокалывают стерильной иглой оболочку спермодозы. Инструмент кладут на подставку. Увлажнив наружные поверхности браншей влагалищного зеркала теплым 2, 9 %-м раствором цитрата натрия, вводят бранши во влагалище. Определяют состояние влагалищной части шейки матки и вставляют в цервикальный канал на глубину 5...6 см конец зоошприца. Плавно выдавливают сперму в цервикальный канал, после чего извлекают из половых органов удлинитель с корпусом зоошприца и влагалищное зеркало. Перед осеменением следующего животного стерилизуют влагалищное зеркало. С удлинителя снимают использованный корпус зоошприца и заменяют его другим, стерильным. Если сперма расфасована мелкими необлицованными гранулами, то для ее введения визоцервикальным способом используют влагалищное зеркало и шприц-катетер. К недостаткам шприца-катетера можно отнести следующее: на обработку инструмента затрачивается много времени, при его многократном использовании не исключена возможность переноса инфекционного начала и, наконец, после осеменения в шприце остается значительная часть дозы спермы (до 30 %). При визоцервикальном осеменении вместо шприца-катетера можно использовать одноразовую полистироловую пипетку, что намного повышает санитарный уровень процедуры осеменения. Пипетку соединяют при помощи переходной муфты (полистироловой пли резиновой) со стерильным шприцем (на 2 мл) или с полиэтиленовой ампулой, используемой при маноцервикальном осеменении. Целесообразно придерживаться следующего порядка работы: шприц простерилизовать кипячением и промыть 2, 9 %-м раствором натрия цитрата, чтобы удалить остатки воды из инструмента; простерилизовать влагалищное зеркало. Взяв пакет с одноразовыми пипетками, протереть один из его углов спиртовым тампоном и надрезать стерильными ножницами или проколоть изнутри концом пипетки. В образовавшееся отверстие выдвинуть часть пипетки и соединить ее с муфтой, надетой на шприц; удерживая шприц рукой, извлечь пипетку из пакета и положить инструмент на обработанную подставку. Отверстие в пакете запаять на пламени, чтобы исключить возможность инфицирования пипеток, оставшихся в пакете. При работе с пипетками необходимо следить за тем, чтобы суммарный объем спермы и раствора натрия цитрата не превышал 1 мл. Если сперма быков заморожена мелкими гранулами по 0, 2 мл, то их нужно размораживать в 0, 8 мл стерильного 2, 9 %-го раствора натрия цитрата. Указанный раствор часто бывает расфасован в ампулы по 1 мл, поэтому после вскрытия ампулы стерильной мерной пипеткой удаляют 0, 2 мл (4...5 капель). Сперму в пипетку надо насасывать аккуратно, без пузырьков воздуха. В канале пипетки может находиться 1 мл жидкости. Нельзя допускать затекания спермы в шприц, иначе она останется в инструменте и не попадет в цервикальный канал. Отыскав с помощью влагалищного зеркала наружное отверстие цервикального канала, вводят в него как можно глубже конец пипетки. Затем, плавно нажимая на поршень шприца, выталкивают сперму из пипетки. Пипетку и влагалищное зеркало извлекают. Перед осеменением следующего животного стерилизуют влагалищное зеркало и заменяют пипетку. По окончании работы, использованные одноразовые пипетки сжигают. Чтобы улучшить результаты визоцервикального осеменения, рекомендуют использовать влагалищное зеркало, модифицированное Л. Овчинниковым (рис. 2.26) (срезан правый край верхней ветви зеркала). После введения зеркала инструмент со спермой продвигают в канал шейки матки. Повернув влагалищное зеркало срезом к верхней стенке влагалища, прижимают инструмент к слизистой оболочке в месте среза ветви зеркала и удерживают его в таком положении, после чего влагалищное зеркало извлекают. Через 20...30 с животное успокаивается, и после этого легким нажатием на поршень шприца сперму выталкивают из инструмента.
Рис. 23. Влагалищное зеркало для коров, модифицированное Л. Овчинниковым: правый край верхней ветви срезан впереди на 110...120 мм (1) и сзади на 55...60 мм (2) Маноцервикальный способ. Был предложен Ф. И. Осташко и В.А.Чирковым. При нем используют одноразовые инструменты. Указанным способом осеменяют только коров (телкам очень трудно ввести руку во влагалище, чтобы выполнить необходимые манипуляции при осеменении). При работе со спермой в облицованных гранулах используют зоошприц и трехпалую полиэтиленовую перчатку. Зоошприц находится в стерильной упаковке, которую вскрывают только перед использованием. Инструмент подготавливают к работе следующим образом: в заднюю часть корпуса с фланцем вставляют облицованную гранулу, досылают ее толкателем до упора и через выходное отверстие прокалывают стерильной иглой оболочку гранулы.
Надевают стерильную полиэтиленовую перчатку, смачивают ее поверхность стерильным 2, 9 %-мраствором натрия цитрата и, введя руку в перчатке во влагалище, легко массируют шейку матки около 1 мин (рис. 24). Затем руку смещают назад и, не выводя ее из преддверия влагалища, другой рукой подают подготовленный зоошприц со спермодозой. Инструмент располагают внутри ладони, вдоль среднего пальца, и фиксируют его большим пальцем (рис.25). Руку возвращают к шейке матки и под контролем указательного пальца вставляют конец зоошприца в цервикальный канал. Массируя кончиками пальцев шейку матки, инструмент подталкивают ладонью до тех пор, пока он полностью не войдет в цервикальный канал. После этого заднюю часть инструмента поднимают на 2...3 см и, нажимая большим пальцем на упор толкателя, выдавливают сперму в цервикальный канал (рис. 26). После введения спермы зоошприц вынимают из цервикального канала, кладут на нижнюю стенку влагалища и массируют шейку матки в течение 1 мин. Затем осторожно выводят руку с инструментом. Держа зоошприц в руке, снимают перчатку, выворачивая ее, при этом инструмент остается внутри вывернутой перчатки. Использованные зоошприцы и перчатки складывают в ведро и сжигают после окончания работы. Чтобы избежать потери спермы, при работе с зоошприцем не следует надавливать толкателем на оболочку спермодозы в момент ее прокола и во время введения инструмента в половые органы коровы. При осеменении коров спермой, замороженной мелкими необлицованными гранулами, для маноцервикального способа необходимы полиэтиленовая ампула, катетер и трехпалая перчатка. Как и в предыдущем варианте, все инструменты на пункт искусственного осеменения животных поступают стерильными. Вскрыв упаковку, извлекают полиэтиленовую ампулу и стерильными ножницами срезают у нее конусовидный конец на расстоянии 4...5 мм. В образовавшееся отверстие вставляют конец катетера; ампулу сжимают и насасывают в инструмент дозу спермы. На руку надевают стерильную перчатку и далее поступают, как описано выше. Следует помнить, что сжимать ампулу надо с донышка и, выдавив из нее сперму, не разжимать (иначе жидкость начнет засасываться обратно). Не разжимая ампулу, инструмент выводят из цервикального канала. После осеменения использованные инструменты и перчатки уничтожают сжиганием. Цервикальное осеменение с ректальной фиксацией шейки матки. Этим способом можно осеменять коров и телок. Если сперма расфасована в облицованные гранулы, то используют те же инструменты, что и при визоцервикальном осеменении, при этом на катетер надевают стерильный чехол из пленки. Закрытый конец чехла находится впереди, задний фиксируют специальным замком (зажимом) на корпусе удлинителя. Надев на руку стерильную полиэтиленовую перчатку, раскрывают вульву и продвигают катетер по верхней стенке преддверия и влагалища на 2/3 его длины. Затем, потянув зажим чехла, разрывают его передний конец, освобождая корпус зоошприца. Руку в перчатке вводят в прямую кишку, а другой рукой удерживают инструмент. Освободив прямую кишку от каловых масс, массируют матку. Во время расслабления прямой кишки фиксируют шейку матки указательным и средним пальцами, а большим направляют конец пипетки в шейку матки. В цервикальный канал инструмент вводят осторожно на глубину до 7 см и, плавно нажимая на дисковый упор, выдавливают дозу спермы. Инструмент осторожно выводят из половых органов, а руку — из прямой кишки. Снимают перчатку, удаляют с удлинителя чехол и замок, отвинчивают корпус зоошприца и все перечисленные принадлежности утилизируют сжиганием. Если сперма заморожена мелкими гранулами, то для осеменения берут одноразовую полистироловую пипетку, переходную муфту, шприц на 2 мл (или полистироловую ампулу), длинную пятипалую перчатку. Порядок подготовки этих инструментов такой же, как и при визоцервикальном способе. Мелкие гранулы размораживают в 0, 8 мл стерильного 2, 9 %-го раствора натрия цитрата, общий объем полученной жидкости не должен превышать 1 мл.
Пипетку в канал шейки матки вводят так же, как и зоошприц с удлинителем (рис. 27). Продвинув конец пипетки максимально глубоко в цервикальный канал, нажимают на поршень, выталкивая сперму. При использовании пипетки с полистироловой ампулой, чтобы вытолкнуть сперму из пипетки, необходимо сжать ампулу и не разжимать ее до выведения конца пипетки из шейки матки (чтобы предотвратить обратное всасывание содержимого из цервикального канала). Завершив работу, одноразовые пипетки и перчатки сжигают. При осеменении спермой, расфасованной в соломинки (пайетты), соблюдают следующий порядок работы. Уголок полиэтиленового мешка, где лежат стерильные защитные чехлы, протирают спиртовым тампоном и отрезают ножницами. Отверстие делают таким, чтобы через него можно было взять один чехол, конец которого выдвигают из пакета на 20...30 мм, при этом остальная часть чехла остается стерильной. Сделанный разрез лучше запаять, чтобы восстановить герметичность. В крайнем случае, можно загнуть края и зафиксировать их скрепкой или каким-либо зажимом. Соломинку помещают в камеру осеменительного инструмента, отрезают герметизирующую пробку ножницами и сразу же надевают стерильный защитный чехол на инструмент, который вводят в шейку матки с соблюдением тех же правил, что и при введении пипетки или удлинителя с корпусом зоошприца. В настоящее время для искусственного осеменения коров и телок в основном используются современные приборы (рис.28), которые имеют ряд преимуществ.
Рис. 28. Приборы для осеменения коров с использованием пайетт производства Минитюб: QUICKLOCK 2000 и QUICKLOCK classic в комплекте со стерильными чехлами
Овец и коз осеменяют визоцервикальным или влагалищным способом. Для визоцервикального осеменения влагалищные зеркала кипятят или фламбируют. Шприц-катетер или шприц-полуавтомат стерилизуют кипячением в дистиллированной воде, обернув поршни и цилиндры одним кусочком марли. Можно обрабатывать спиртом. Для этого ставят в ряд несколько баночек с притертыми пробками; в 1-й лежат тампоны, пропитанные спиртом, во 2-й налит спирт, в остальных находится стерильный изотонический раствор. Поверхность инструмента сначала протирают спиртовым тампоном от переднего конца к цилиндру, затем набирают 70%-й спирт и, перемещая поршень шприца, обрабатывают всю внутреннюю поверхность катетера и цилиндра. Удалив спирт, его остатки вымывают изотоническим раствором натрия хлорида из двух разных баночек, по 3 раза из каждой. После этих процедур в шприц-катетер или шприц-полуавтомат можно набирать сперму. За рубежом для осеменения овец свежеполученной, охлажденной и замороженной спермой используют одноразовые инструменты. Овцу фиксируют в станке. Хвост отводят в сторону и удерживают. Наружную поверхность влагалищного зеркала смачивают изотоническим раствором натрия хлорида. Одной рукой расширяют вульву, другой вводят зеркало в косом направлении (снизу вверх) и, раздвинув его бранши, находят отверстие шейки матки. Вводят в цервикальный канал конец шприца-катетера на глубину 1...2 см и, надавливая на поршень, выталкивают дозу спермы (рис. 29). В зависимости от качества и способа хранения спермы объем дозы может колебаться от 0, 05 до 0, 2 мл. Минимальную дозу используют в том случае, если сперма неразбавленная или сохраняет после разбавления высокую концентрацию спермиев.
Рис. 29. Правильное положение рук и инструментов при искусственном осеменении овцы: 1 — шприц; 2 — влагалищное зеркало
Для оплодотворения в половые органы овцы нужно ввести не менее 80 млн подвижных спермиев. Объем вводимой дозы определяют исходя из степени разбавления спермы: при соотношении 1: 1 доза составляет 0, 1 мл, 1: 2 —0, 15 и 1: 3 —0, 2 мл. Подвижность спермиев как в свежеполученной, так и в сохраненной при 2...50 С сперме должна быть не менее 8 баллов. Размороженную сперму барана вводят по 0, 2 мл при подвижности спермиев не ниже 4 баллов. Влагалищный способ. Применяют у ярок, так как им не удается ввести влагалищное зеркало. Сперму вводят с помощью шприца-катетера, который осторожно продвигают по верхней стенке влагалища до упора в его свод. Затем катетер смещают на несколько миллиметров назад, сперму выталкивают из инструмента. При влагалищном способе осеменения дозу спермы увеличивают в 2 раза. Так как у шприца-катетера для овец тонкий конец, кнему делают пластмассовые насадки. Из переднего конца насадки катетер выступает лишь на 1...2 мм. Насадка значительно облегчает введение спермы во влагалище, но усложняет обеззараживание инструмента. При осеменении овец в силу сезонности и массовости чаще, чем при осеменении самок других видов, создаются предпосылки для различных нарушений санитарных правил. Кроме того, только овец разрешается осеменять одним и тем же инструментом, протирая его спиртовым тампоном перед каждой процедурой. Популярное:
|
Последнее изменение этой страницы: 2016-05-28; Просмотров: 4093; Нарушение авторского права страницы
в
Г
