Половая нагрузка на самца-производителя при получении спермы на искусственную вагину

Производитель	Режим получения спермы на искусственную вагину
Бык	2 раза в неделю методом дуплетной садки с перерывом 10…15 мин или 1 раз в неделю методом триплетной садки с интервалами 0, 10-15 и 60 мин
Баран, козел	2-3, до 5-6 раз в день
Хряк	1 раз в 3 дня
Жеребец	ежедневно, но не более 6 раз в неделю. Для хранения спермы в замороженном состоянии - 3 раза в неделю.

Оценка качества свежеполученной спермы. Свежеполученную сперму оценивают по нескольким показателям

Нормальные значения показателей свежеполученной спермы производителей некоторых видов по данным макроскопического исследования

Производитель	Объем эякулята, мл	Цвет	Запах	Консистенция
Баран	1…3	Белая с желтоватым оттенком	Без запаха или с запахом жиропота	Сметанообразная
Бык	3…10	Белая или желтоватая	Без запаха или с запахом жирного молока	Сливкообразная
Хряк	100…1000	Молочно-белая с сероватым оттенком	Без запаха	Водянистая
Жеребец	30…200	Серовато-белая	То же	»

Нормальные значения показателей свежеполученной спермы производителей некоторых видов по данным микроскопического исследования

Производитель	Активность спермиев, баллы	Концентрация спермиев, млрд/мл	Максимально допусти-мый процент патологических форм спермиев	Максимально допустимый процент незрелых спермиев
Баран		1…9, 5
Бык		09…1, 5
Хряк		0, 2…0, 3
Жеребец		0, 1…0, 2

 

Рис.12. Определение густоты свежеполученной спермы: А густая спермы; Б – средняя;

Рис.13. Определение активности спермиев разбавленной в изотоническом растворе хлорида натрия по 10 бальной шкале (1 балл = 10% активных спермиев)

Рис.14. Схематическое изображение спермия жеребца. Вид сбоку и спереди.

1-головка спермия; 2- акросома; 3-шейка; 4- проксимальная центриоль; 5 - тело; 6- митохондрии; 7- задняя часть дистальной центриоли; 8-хвост; 9-кисточка хвоста (Morel D., 1999)

Рис.15 Эксцентричное прикрепление шейки к головке спермия жеребца (England G.C.W., 1996)

	в
Г

Рис.16. Счетная камера Горяева: А – вид сверху; Б - вид сбоку; В - сетка счетной камеры; Г – порядок подсчета в большом квадрате (16-ти маленьких квадратов)

 

Рис.17. Меланжеры для разбавления спермы: А – эритроцитарный для разбавления спермы быка, барана в 100-200 раз; Б - лейкоцитарный для разбавления спермы хряка жеребца в 10-20 раз

Цифровая система Sperm Vision™ для оценки качества спермы. Для определения объема эякулята используют электронные весы, оценки его качества - фотометр SDM6 (рис.18) и цифровую систему Sperm Vision™ (рис.19).

Рис. 18. Фотометр SDM6 для оценки спермы

 

С помощью фотометра SDM6 определяют концентрацию спермы (по изменению фотометрических характеристик светового луча, пропускаемого через микрокюветку с образцом спермы), автоматически рассчитывают объем разбавителя и количество получаемых спермодоз. Забор образцов спермы для анализа проводится при помощи автоматического дилютор-дозатора. Прибор имеет небольшие габаритные размеры, легок в управлении, результаты исследований отличаются высокой точностью и практически мгновенно выводятся на экран монитора (2 сек/образец). Концентрация спермы измеряется в млрд/мл.

Рис. 19. Оценка спермы в цифровой системе Sperm Vision™

 

 

Разбавление и хранение спермы. Свежеполученную сперму используют сразу же после оценки ее качества. Свежеполученная сперма барана и быка к использованию допускается в течение не более 30 мин, жеребца 60 мин, хряка – 120 мин. Причиной быстрой гибели спермиев являются: истощение запасов питательных веществ в плазме спермы (сперма жеребца, хряка) или отравление продуктами гликолиза (без кислородного расщепления глюкозы до молочной кислоты) – (сперма быка, барана, козла).

Принципы хранения спермы вне организма. Сохранение спермы вне организма возможно лишь при нахождении спермиев в анабиотическом состоянии. Перевод спермиев в состояние анабиоза и соответственно хранение спермы вне организма обеспечивают следующими способами:

☻ охлаждением спермы, разбавленной в специальной протекторной среде, до температуры тающего льда (+ 2-4 ⁰C);

☻ замораживанием разбавленной в криопротекторной среде спермы в жидком азоте (- 196⁰C);

☻ снижением pH спермы до 6, 3-6, 4 при помощи искусственной среды, содержащей органические кислоты (угольную, лимонную и др.) и ее хранением при температуры + 2-22 ⁰C

☻ разбавлением спермы искусственной средой, содержащей химической вещество, блокирующее обменные процессы в половых клетках (хелатон и др.) при температуре + 16 или 20 ⁰C

Выбор разбавителя обусловлен видовыми особенностями спермы и способом ее хранения.

5.Химический состав плазмы спермы (неорганические вещества)

Показатель	Вид животного
Бык	Баран	Хряк	Жеребец
Натрий, мг%
Калий, мг%
Кальций, мг%
Магний, мг%
Хлориды, мг%	174 - 320

6.Химический состав цельной спермы (органические вещества)

Показатель	Вид животного
Бык	Баран	Хряк	Жеребец
Фруктоза, мг%	460 – 600*V	250 V	9* V	(0 - 6)
Сорбит, мг%	10 – 140 V	72 V (26 - 120)	12 V	(20 – 60)
Лимонная кислота, мг%	620 – 806* V	140 V (110 - 260)	173* V	26 V (8 - 53)
Инозит, мг%	35 T (25 - 46)	12 T (7 - 14)	530 V (380 - 630)	30 T (20 – 47)
Глицирилфосфорилхолин, мг%	350 E (100 - 500)	1650 E (1100 - 2100)	110 – 240 E	40 – 110 E
Эрготионин, мг%			17 V	40 – 110 A
Протеин, г%	6, 8	5, 8	3, 7	1, 0

Примечание: * - плазма спермы; T – семенник; E – придаток семенника; A – ампулы спермиопроводов; V – пузырьковидные железы

 

В зависимости от цели разбавления спермы и условий ее хранения в состав сред для разбавления спермы входят сахара (глюкоза, лактоза и др.), соли (натрия цитрат и др.), желток куриного яйца, антибактериальные препараты (спермосан-3), а также глицерин, предохраняющий клетки от отрицательного воздействия низких температур. Чтобы предупредить контаминацию микроорганиз­мами, разбавитель готовят в стерильном боксе. Некоторые компо­ненты не выдерживают нагревания (желток куриного яйца, глице­рин), поэтому стерилизовать их термическими способами нельзя. Компоненты растворяют в прокипяченной дистиллированной воде. Разбавитель хранят при температуре 35°С не более З…4ч. Можно использовать и заранее подготовленную среду, хранящую­ся и стерильной упаковке.

Охлаждение. Традиционный способ хранения спермы барана, быка и жеребца — ее охлаждение до 2...5°С. В этом случае разбавленную сперму барана сохраняют в течение 24 ч, жеребца — 48 ч и быка — 79 ч после получения. При этом для разбавления спермы барана и быка используют глюкозо-цитратно-желточной среды (ГЦЖ), жеребца – глюкозо-желточную, лактозо-желточную или молочно-желточную среды (сокращенно ГЖ, ЛЖ, МЖ).

Среды готовят непосредственно перед получением спермы. Сперму разбавляют сразу же после оценки ее качества. Температуры спермы и среды должна быть одинаковой, чтобы предупредить температурный шок спермиев. Разбавляют сперму в градуированном смесителе. Среду добавляют к сперме небольшими порциями. После добавления каждой порции смеситель вращают, чтобы равномерно смешать среду и сперму.

Сперму хряков хранят при температуре 16...20°С, разбавляя ее средами, содержащими хелатон. Наиболее распространенной яв­ляется глюкозо-хелато-цитратная среда (ГХЦ), в состав которой входят следующие компоненты: глюкоза — 6 г, динатриевая соль этилендиаминтетрауксусной кислоты — 0, 37 г, на­трия гидрокарбонат — 0, 12 г, натрия нитрат — 3, 6 г, спермосан-3 — 25...30 тыс. ЕД, вода дистиллированная — 100 мл.

Криоконсервация, или замораживание - самый перспективный способ хранения спермы животных и человека вне организма.

Замораживание - основной способ хранения спермы быка. Сперму замораживают в облицованных гранулах, необлицованных гранулах и в соломенках (пайеттах).

Сперму быка, предназначенную для хранения в виде необлицованных гранул, разбавляют лактозо-желточно-глицериновой сре­дой, в состав которой входит 11, 5 г лактозы, 100 мл дистиллиро­ванной воды, 20 мл желтка куриного яйца, 5 мл глицерина, 50 тыс. ЕД спермосана-3. Простерилизованный раствор лактозы охлаждают до 35...40⁰ С и добавляют остальные компоненты.

Перед замораживанием разбавленную сперму выдерживают в холодильнике при температуре 5⁰ C 3...4 ч. В это время, называемое периодом эквилибрации, выравниваются концентрации глицерина в среде и спермиях. Глицерин защищает спермии от действия низ­ких температур только при проникновении внутрь клеток.

Сперму быка и барана можно замораживать в виде необлицованных гранул на фторопластовой пластине. Объем лунок должен быть известен заранее, чтобы не измерять его в условиях низких температур. Пластину предварительно стерилизуют методом ультрафиолетового облучения (УФО) или спиртовыми тампонами, затем погружают в жидкий азот и выдерживают в нем до прекращения кипения. После этого плас­тину укрепляют на расстоянии 5...10см от поверхности азота (при температуре – 160… -170°C) и в течение 2 мин быстро заполняют лунки спермой из пипетки или шприца (рис. 2.13). Затем пластину вновь погружают в жидкий азот на 1...2мин. После заморажива­ния спермы пластину поднимают из жидкого азота, гранулы спер­мы собирают в сачок или контейнер, пересыпают в охлажденный контейнер и переносят в сосуды Дьюара с жидким азотом.

Рис. 20. Заполнение спермой лунок охлажденной фторопластовой пластины:

1 — широкогорлый сосуд Дьюара (или ванна с жидким азотом); 2 — фторопластовая пласти­на; 3 — лунки на 0, 1…0, 2 или 0, 5 мл; 4 — дер­жатель пластины; 5 — пипетка для фасовки спермы

 

Чтобы получить облицованные гранулы, сперму быка разбав­ляют в 2 этапа (средой № 1 и № 2) непосредственно в полиэтиле­новом спермоприемнике.

Среда № 1: 11%-й раствор лактозы — 63 мл (можно заме­нить таким же количеством 11 %-го раствора сахарозы); желток куриного яйца —30 мл; глице­рин — 7 мл; спермосан-3 — 50... 90 тыс. ЕД.

Среда № 2: вода дистиллированная — 100 мл; лактоза — 6 г (можно заменить таким же количеством сахарозы); натрия цитрат — 1, 4 г; глицерин — 5 мл; спермосан-3-50...90 тыс. ЕД.

Спермоприемник соединяют с тонкостенной полимерной трубкой, в которую выдавливают разбавленную сперму. Заполнен­ную спермой трубку разделяют с помощью автомата ПРЖ (путем термической сварки) на от­дельные дозы по 0, 25...0, 33 мл с герметизацией. Облицованные (герметизированные) гранулы помещают в алюминиевые контей­неры, которые закрывают поролоновыми пробками. Контейнеры закрепляют в обоймах специального устройства, которое помеща­ют в холодильник. После 4...6-час экспозиции при температуре 2...5°С обойму аппарата с контейнерами погружают в жидкий азот на 8...10 мин и затем переносят в сосуд Дьюара для хранения.

В полипропиленовых соломинках (пайеттах) сперму быка за­мораживают по 0, 25 или 0, 5 мл. Один конец соломинки предварительно закрывают специальным герметизирующим составом. Эякулят разбавляют лактозо-фруктозо-раффинозо-магниево-глицерино-желточной средой (ЛФРМГЖ) либо трисбуферной средой, содержащей трисгидрооксиметиламинометан, лимонную кислоту, фруктозу, желток куриного яйца и глицерин, или коммерческими криопротекторными средами, не содержащими компонентов животного происхождения, например Triladyl, Biladyl (Minitube, Германия). После разбавления сперму расфасовывают в пайетты вакуумным способом. Заполненные спермой соломинки герметизируют, маркируют, укладывают на штативы и ставят на эквилибрацию на З...4 ч при температуре 4°С, затем замораживают в парах жидкого азота при температуре -120 - 130°С в течение 5 мин на специальном устройстве, которое за счет пенопластовых поплавков удерживается на заданной высоте над его поверхностью.

Технология замораживания спермы быка в полипропиленовых соломинках была разработана в 1975 г. во Франции профессором Л. Кассу. В СССР она впервые была внедрена в Литве в 1983 г.

В настоящее время эта методика замораживания спермы является основной и наиболее совершенной. На всех этапах работы со спермой при ее замораживании в соломинках используются высокотехнологическое цифровое оборудование и современные расходные материалы. Управление основными технологическими процессами осуществляется при помощи гибкой, многофункциональной и модульной программы Минитюб ИДА (Minitube IDA). Программное обеспечение имеется на английском, немецком, испанском, итальянском и русском языках. Программа позволяет автоматизировать практически все процессы работы со спермой на крупных племпредприятиях – от оценки качества полученного экулята до определения объема разбавителя, разбавления и охлаждения спермы, ее расфасовки на спермодозы, герметизации и маркирования пайетт, а также их программируемого замораживания. Идентификация каждого эякулята может быть осуществлена вручную, штрих-кодом или с помощью транспондера.

⇐ Предыдущая12345Следующая ⇒

Поделиться:

Популярное:

1. A. обеспечение выполнения расписания движения, корректировка движения в случае необходимости, оказание техпомощи ПС на линии, принятие мер в случае ДТП и др.
2. A. эксплуатируемые вручную или с применением ручного труда; без применения ручного труда (механические, автоматические и др.).
3. B. Специфика восприятия выразительных средств театра
4. Extended Primitives-расширенные примитивы
5. I ) При нейтральной оси в полке.
6. I. Заполнение фрагмента «Талон приема»
7. I. Общие сведения о воспитательном мероприятии
8. I. Прием и отправление поездов
9. I. Принятие нормативных актов органами государства.
10. I. ЭКГ при нарушениях ритма сердца (аритмиях)
11. I. Этические принципы психолога
12. II. Выберите, при каком условии верно данное утверждение.