Микробиологическая диагностика.

⇐ ПредыдущаяСтр 5 из 5

Микробиологические тесты направлены на обнаружение маркёрных бактерий и определение их количества. Они показаны при агрессивном пародонтите, рецидивирующих формах, а также при тяжёлом пародонтите на фоне системных заболеваний (сахарный диабет и др.). Микробиологические методы исследования позволяют решить вопрос о назначении антимикробной терапии и показывают насколько успешно проводимое лечение.

Получение мазка. Для получения бактерий поддесневого налёта чаще всего используют бумажные штифты. Перед взятием мазка необходимо очистить участок от наддесневого налёта и тщательно высушить. Затем в карман на всю глубину вводят бумажный штифт и оставляют на 10с. В зависимости от используемого метода бумажный штифт помещают в транспортировочный контейнер с жидкой средой или без неё. Контейнер герметично закрывают и отправляют в лабораторию.

Микроскопия в тёмном поле. Эти методы позволяют провести ограниченную бактериальную диагностику в условиях стоматологического кабинета. Не требуется фиксация или окрашивание по Граму; методика быстрая и несложная. Однако определить можно только морфотип, т.е. форму бактерий и их подвижность. Если обнаруживаются в основном кокки и неподвижные палочки, это говорит о малом количестве патогенов. Обнаружение многочисленных подвижных бактерий (палочек, спирохет) свидетельствует об активной фазе воспаления в кармане и повышенном уровне потенциально патогенных представителей микрофлоры.

Выращивание культур бактерий. Это один из «классических» методов диагностики. Для культивирования бактерий они должны оставаться живыми. Пародонтопатогенныемаркёрные бактерии в основном анаэробные, что создаёт проблему для забора образцов и их транспортировки. Помимо этого, метод занимает много времени, требует микробиологических знаний и специального лабораторного оборудования. Это обуславливает высокую стоимость анализа. Анаэробные бактерии полости рта растут медленно, поэтому окончательного результата зачастую приходится ждать до 3-х недель. Однако, одно из преимуществ метода – возможность построения антибиотикограммы, т.е. определения чувствительности и резистентности маркерных организмов к антибиотикам.

Гибридизация ДНК и генный анализ. Для этого используют видоспецифические тесты, которые представляют собой последовательности нуклеатидов (24-30 оснований) с радиоактивной маркировкой. Эти последовательности связываются с комплементарными ДНК или РНК бактерий (гибридизация). Жизнеспособные бактерии не требуются, поэтому транспортировка не представляет сложностей. Для проведения теста бактерии подвергают лизису, в процессе которого происходит разделение и фрагментация цепей ДНК и РНК и их прикрепление к мембране. Техника гибридизации: цепи ДНК отделяются друг от друга, фрагментируются и примыкают к мембране. Маркиро-ванные последовательности оснований находят комплементарные участки ДНК и связываются с ними. Идентификация проводится ауторентгенографическим или ферментным (цветная реакция) методом.

Полимеразная цепная реакция. Преимуществами этой методики явля-ются: высокая специфичность, быстрота (несколько часов), необязательное присутствие живых микроорганизмов. Для этого выявляются не сами живые бактерии, а их нуклеиновые кислоты. Метод ПЦР сочетает в себе высочайшую чувствительность всех микробиологических методов и направлен на выявление «маркерных» микроорганизмов. При этом данный метод исключает различные осложнения и потенциально ошибочные этапы. Установ-ленный пороговый показатель теста обеспечивает то, что любой положительный результат имеет клиническое значение, а те концентрации бактерий, которые могут присутствовать в здоровой слизистой оболочке, дают отрицательный результат.

У каждой бактерии есть лишь одна молекула ДНК, зато рибосомальных РНК в тысячи раз больше. Для гибридизации ДНК/РНК не требуется копирование бактериальных рРНК. Для гибридизации ДНК/ДНК необходимо увеличить количество молекул ДНК. Для этого применяется полимеразная цепная реакция. Достаточно 20-30 циклов, чтобы увеличить количество ДНК в миллион раз.

Схема ПЦР: 1). Разделение ДНК на две одинаковые цепи. 2) Специфические последовательности праймеров А и В. 3) Восстановление структуру двойной спирали нуклеиновых кислот. 4) Полимераза удваивает последовательности.

Реакция антиген-антитело. Иммунологическое определение бактерий можно провести по их специфическим антигенам (Аг). Это поверхностные маркеры (структуры типа пилей и фимбрий, чаще углеводы или гликопротеины), к которым прикрепляются специфические моноклональные антитела (Ат). Чтобы сделать видимым связывание Аг иАт, используются специально подготовленные антитела, маркированные так называемой молекулой-оповестителем (МО). Маркировки проводят с помощью ферментоподобных красителей или флуоресцентных веществ.

Прямая и непрямая иммунофлуоресценция. Этот метод позволяет увидеть реакцию связывания Аг иАт/ используя флуоресцентный микроскоп. Бактерии связываются с антителами посредством специфических поверхностных антигенов; при этом антитела видны в ультрафиолетовых лучах, как светящиеся молекулы. При этом видны как живые, так и погибшие бактерии.

Ферментные бактериальные тесты. Некоторые пародонтопатогенные бактерии в ходе метаболизма вырабатывают трипсиноподобный фермент пептидазу, способный разрушать БАНА. БАНА – это бензоиларгинин-2-нафтиламид, синтетический субстрат, который гиролизуется бактериальной пептидазой. Один из продуктов гидролиза – это β -нафтиламид, видимый благодаря цветной реакции. Именно он подтверждает наличие патогенных бактерий. БАНА-тесты относительно недороги и могут выполняться средним медицинским персоналом. Строго положительная реакция говорит о том, что кюретажпародонтальных карманов необходимо дополнить антибиотиками против облигатных анаэробов. Однако, другая, менее патогенная флора также может давать положительную реакцию, что говорит об ограничениях дан-ного метода.

Учебно-методический материал:

1) Методические указания по теме «Клинические и рентгенологические методы обследования больных с заболеваниями пародонта, пародонтологические индексы».

2) Цветной атлас «Пародонтология», Герберт Ф. Вольф, Эдит М. Ратейцхак, Клаус Ратейцхак, 2008.

3) Электронные пародонтологические карты пациентов, полученные с помощью диагностической системы Florida-probe.

4) DVD-фильм о диагностической системе Florida-probe.

5) Наглядные пособия-инструкции о приборе «Периотест» и «БАНА-тест».

Клинические демонстрации:

1) Осмотр и лечение повторного больного с патологией пародонта или с заболеваниями зубов.

2) Демонстрация зондирования пародонтальныхкармановс помощью пародонтального зонда; определения подвижности зубов; определения степени кровоточивости десны; определения степени вовлечения фуркаций в патологический процесс; определения уровня рецессии десны; определения степени гиперестезии зубов и патологической стираемости.

3) Демонстрация работы на диагностической системе Florida-probe.

УИРС: оформление пародонтальной карты, вкладыша - плана комплексного обследования и вкладыша – плана комплексного лечения больного с патологией пародонта (больной, которого наблюдают и лечат в объеме академической истории болезни).

Ситуационная задача:

Пациент М. 47 лет, обратился к пародонтологу с жалобами на кровоточивость десен, периодическое гноетечение из пародонтальных карманов, неприятный запах изо рта, подвижность некоторых зубов и затрудненное пережевывание пищи в связи с этим. Из анамнеза заболевания выяснено, что пациент страдает пародонтитом в течение 10 лет; 5 лет назад был прооперирован (открытый кюретаж с остеопластическим материалом); на протяжении последних 2-х лет лечение по поводу пародонтита не проводилось. В настоящее время отмечает явное ухудшение состояния полости рта. Из сопутствующих общих заболеваний отмечает гипертоническую болезнь Ι степени и сахарный диабет 2 типа в течение 2-х лет.

Составьте подробный план диагностических мероприятий для поста-новки диагноза (электронная пародонтальная карта прилагается).

Библиографический список:

1. Лекции

2. Артюшкевич А.С. Заболевания Периодонта. М.: Медицинская литература, 2006. – 306 с.

3. Вольф Г.Ф., Ратейцхак Э.М., Ратецхак К. Пародонтология. Цветной атлас, пособие, руководство. Под редакцией проф. Г.М. Барера. – М.: «МЕДпресс-информ», 2008. – 548 с.

4. Григорьян А.С., Грудянов А.И., Рабухина Н.А., Фролова О.А. Болезни пародонта. – М.: МИА, 2004. – 287 с.

5. Грудянов А.И., Григорьян А.С., Фролова О.А. Диагностика в пародонтологии. – М.: МИА, 2004. – 93 с.

6. Дмитриева Л.А. Пародонтит. М.: «МЕДпресс-информ», 2007. – 500 с.

7. Пародонтология. Учебное пособие под редакцией проф. В.А. Ру-мянцева. – М.: МИА, 2008. – 523 с.

8. Рабухина Н.А., Аржанцев А.П. Стоматология и челюстно-лицевая хирургия. Атлас рентгенограмм. – М.: МИА, 2002. – 302 с.

9. Феди П., Венино А, Грей Д. Пародонтологическая азбука. М.: Издательский дом «Азбука», 2003. – 287 с.

⇐ Предыдущая 1 2 3 45