Сбор и хранение скелетного материала

⇐ ПредыдущаяСтр 10 из 24Следующая ⇒

Клетки, находящиеся внутри твёрдых тканей (костей и зубов) окружены биоминеральной структурой и в значительной степени защищены от воздействия гнилостного разложения и распада. Поэтому твёрдые ткани могут служить источником ДНК. Для того чтобы в максимальной степени увеличить вероятность построения ДНК-профиля, рекомендуется забирать образцы твёрдых тканей. При сборе твёрдых тканей следует учесть ряд технических моментов:

· извлечение скелетных останков должно производиться с использованием соответствующей археологической и антропологической техники. В результате неполного извлечения и смешения останков во многих случаях осложнится проведение ДНК-анализа и, вероятно, будет упущена возможность идентификации лиц, а некоторые останки будут идентифицированы неверно; в большинстве случаев лучшим источником ДНК являются зубы. Желательно взять для анализа два зуба без следов стоматологической помощи или разрушений (каверн) в следующем порядке предпочтения: большой коренной зуб, малый коренной зуб, клык, резцовый зуб;

· не следует брать зубы с характерными признаками, которые могут помочь идентификации, например, передние зубы, которые можно сравнить по фотографии без вести пропавшего человека. Если же нет выбора, то прежде чем извлекать такие зубы, их характерные признаки следует полностью документировать, в том числе с помощью фотографирования; большинство методов ДНК-анализа твёрдых тканей требуют примерно 100 миллиграмм материала, однако некоторые описываемые в специальной литературе методы требуют забора до 10 грамм материала; ДНК содержится во всех костях, однако в одних она сохраняется лучше, чем в других. Длинные кости, в частности бедренные кости, являются лучшим после зубов источником ДНК. «Оконный» сегмент следует вырезать из среднего отдела бедренной

Рис. «Оконный» сегмент, взятый из бедренной кости.

кости (см рисунок). Сегмент размером от 2 до 5 сантиметров достаточен для многократного извлечения ДНК с использованием большинства регламентов процедур. Рекомендуется использовать медицинскую вибрационную пилу (например, фирмы Stryker®), но при отсутствии медицинской пилы подойдёт и какая-либо другая. (Примечание: кости не следует распиливать, поскольку это затруднит антропологическую оценку материала, например, при определении телосложения); во многих случаях не удается найти бедренные кости. Тогда порядок предпочтения для взятия образца должен быть следующий:

· большеберцовая кость и малоберцовая кость,

· лучевая кость и локтевая кость;

если человеческие останки не очень сильно разложились, хорошим источником ДНК являются части рёбер, образцы которых можно сравнительно легко отобрать в процессе посмертного исследования;

После отбора из останков образцов костей или зубов необходимо обеспечить им подходящие условия хранения для предотвращения дальнейшего распада ДНК. Для подавления роста бактерий образцы относительно хорошо сохранившихся останков следует хранить при низких температурах, желательно, при - 20°С; образцы, взятые из более старых «сухих» костей, также желательно хранить при температуре -20°С. Во многих случаях такой возможности может и не быть, и тогда их можно хранить при комнатной температуре; но надо иметь в виду, что разрушение ДНК будет продолжаться;

· если нет возможности заморозить образцы, они должны храниться как можно в более прохладном и сухом месте.

Сбор мягких тканей

Чаще всего в процессе полевых поисковых работы военные археологи работают с костными останками людей. Но иногда бывают и исключения, и приходится работать с останками павших Воинов у которых сохранились мягкие ткани, и зачастую это летчики, танкисты, а иногда и пехотинцы, найденные в болоте, иле, в снежных лавинах или в глине.

В большинстве сред ДНК мягких тканей распадается очень быстро. Однако если останки с мягкими тканями обнаруживаются, имеется возможность получить образец мягкой ткани для ДНК-анализа.

1. ДНК может сохраниться в мягкой ткани. Но нужно торопиться, так как время, в течение которого можно обнаружить ДНК, зависит от условий среды: в жарком климате гнилостное разложение и связанное с этим разрушение ДНК может начаться уже спустя несколько часов, а при хранении в условиях пониженной температуры ДНК можно обнаружить в мускульных тканях по прошествии нескольких дней, а в некоторых случаях — и значительно позже.

2. Для построения ДНК-профиля требуется лишь небольшое количество мышечной ткани. Опубликованные руководства рекомендуют отбирать 1 грамм мышечной ткани*. (*Руководство Интерпола по идентификации жертв катастроф и Комиссия по анализу ДНК Международного общество судебной генетики рекомендуют забирать 1 грамм глубоких мускульных тканей).

3. В большинстве случаев 100 миллиграммов ткани (3-4 мм³) вполне достаточно для проведения анализа. Всегда, когда это возможно, образцы следует забирать из глубоких слоев тканей, поскольку внешняя мышца может быть загрязнена в результате контактов…..

4. Всегда, когда это возможно, дублирующие образцы следует забирать из других частей тела, на которых не видно следов гнилостного разложения или распада.

5. Хранить образцы мышечной ткани следует в условиях, ограничивающих дальнейшее разложение ДНК. Простейшим методом хранения тканей является их заморозка при температуре -20°С (если имеется техническая возможность — то при температуре -80°С, что даёт более стабильное хранение). Если нет возможности обеспечить непрерывное хранение при отрицательных температурах, то в течение короткого периода времени предпочтительно поддерживать температуру 4°С, поскольку чередование циклов замораживания и оттаивания ускоряют распад молекул ДНК.

6. Другим простым методом консервации является хранение ткани в 95%-ном растворе этилового спирта; имеются также серийно выпускаемые буферные растворы. Использование этилового спирта или буферных растворов снижает потребность в охлаждении.

7. Там, где это возможно, образцы следует забирать в контролируемых условиях, для того чтобы избежать возможного загрязнения.

8. В некоторых обстоятельствах по причинам технического или культурного характера возможность забрать образцы мышечной ткани может отсутствовать. В этих случаях используют другие источники ДНК — источники, забираемые неинвазивными методами: волосы, выдернутые вместе с корнями, обрезки ногтей и мазки, взятые изо рта (с буккальной поверхности). Эти образцы можно хранить так же, как и образцы мышечной ткани. Следует, однако, иметь в виду, что такие образцы труднее поддаются ДНК-анализу, и по сравнению с анализом мышечной ткани при работе с этими образцами существует большая вероятность потерпеть неудачу. Образцы кожи и образцы посмертной крови являются, как правило, недостаточными источниками ДНК.

Если имеется сомнение относительно возможности извлечения ДНК из образцов мышечной ткани, желательно взять образцы твёрдых тканей (см. выше).

⇐ Предыдущая 5 6 7 8 91011 12 13 14 Следующая ⇒