Аминокислоты с отрицательно заряженными R-группами

 

 

аспартат глутамат

 

Триптофан, тирозин и в меньшей степени фенилаланин поглощают в ультрафиолетовом свете. Аспарагин и глутамин являются амидами двух других аминокисдот: аспартата и глутамата. Цистеин легко окисляется с образованием ковалентно связанной димерной аминокислоты, называемой цистином, в котором две цистеиновые молекулы соединены дисульфидным мостиком. Дисульфидные мостики встречаются во многих белках, стабилизируя их структуру.

В дополнение к стандартному набору из 20 аминокислот найдены другие аминокислоты, как компоненты ограниченных типов белков, они образуются в белках путем модификации стандартных аминокислот. Нестандартными аминокислотами являются: 4-гидроксипролин, 5-гидроксилизин, N-метил-лизин, селеноцистеин, орнитин и другие. Аминокислоты могут действовать как кислоты и как основания.

 

 

 

Ионообменная хроматография наиболее широко распространенный метод разделения, идентификации и количественного определения аминокислот в смеси. Эта техника основана на различии зарядов и величин зарядов аминокислот при заданном значении рН и следовательно различной аффинности каждой аминокислоты к ионообменной смоле. Наиболее развитыми методами аминокислотного анализа являются автоматический аминокислотный анализ и высокоэффективная жидкостная хроматография (жидкостная хроматография высокого давления, ЖХВД).

 

 

0 5 10 15 20 25 30 35

Аминограмма Время, мин.

 

 

Пептиды.

 

Две аминокислоты могут ковалентно соединяться посредством пептидной связи с образованием дипептида.

 

 

Три аминокислоты могут соединяться посредством двух пептидных связей с образованием трипептида. Несколько аминокислот образуют олигопептиды, большое число аминокислот - полипептиды. Пептиды содержат только одну a-аминогруппу и одну a-карбоксильную группу. Эти группы могут быть ионизованы при определенных значениях рН. Подобно аминокислотам они имеют характеристические кривые титрования и изоэлектрические точки, при которых они не двигаются в электрическом поле.

Подобно другим органическим соединениям пептиды участвуют в химических реакциях, которые определяются наличием функциональных групп: свободной аминогруппой, свободной карбоксигруппой и R-группами. Пептидные связи подвержены гидролизу сильной кислотой (например, 6М НС1) или сильным основанием с образованием аминокислот. Гидролиз пептидных связей - это необходимый этап в определении аминокислотного состава белков. Пептидные связи могут быть разрушены действием ферментов протеаз.

Многие пептиды, встречающиеся в природе, имеют биологическую активность при очень низких концентрациях.

 

Пептиды - потенциально активные фармацевтические препараты, есть три способа их получения:

1) выделение из органов и тканей;

2) генетическая инженерия;

3) прямой химический синтез.

В последнем случае высокие требования предъявляются к выходу продуктов на всех промежуточных стадиях.

 

Вопросы для самоконтроля

 

1. Связь между структурой и свойствами аминокислот.

2. В какой форме присутствуют молекулы L-аланина в изоэлектрической точке?

3. Сколько хиральных центров имеет L-изолейцин?

4. Сравните величины рК_а аминокислоты и ее пептидов.

5. Методы получения пептидов.

 

 

Тестовые вопросы

1. Какой связью соединяются остатки аминокислот в белковой молекуле?

а) пептидной;

б) водородной;

в) сложноэфирной.

2. Как классифицируют аминокислоты?

а) по количеству аминных и карбоксильных групп;

б) по химическому строению боковой цепи;

в) по количеству SH – групп.

3. Сколько незаменимых аминокислот известно?

а) 8;

б) 5;

в) 4;

г) 3.

4. Какие белки называют полноценными?

а) состоящие из углеводов;

б) состоящие из восьми незаменимых аминокислот;

в) состоящие из трёх витаминов.

5. Какие аминокислоты относятся к заменимым?

а) могут синтезироваться в организме человека;

б) не могут синтезироваться в организме человека;

в) могут частично синтезироваться.

 

 

ТЕМА 2. ВВЕДЕНИЕ В БЕЛКИ

 

Почти все что происходит в клетке включает в свое действие один или несколько белков. Белки формируют структуру, катализируют реакции в клетке, а также выполняют множество других задач. Их центральное место в клетке отражено в том факте, что выражением генетической информации выступает белок. Для каждого белка существует сегмент ДНК (ген), который кодирует информацию, специфическую для его аминокислотной последовательности. В типичной клетке присутствуют тысячи различных видов белков, каждый из которых геном, и несет специфическую функцию. Белки в отличие от других биологических макромолекул имеют чрезвычайно разносторонние функции.

Белки имеют множество различных биологических функций, их часто классифицируют в соответствии с их биологической ролью.

Ферменты. Это, как правило, белки, обладающие каталитической активностью. Большинство химических реакций органических биологических молекул в клетках катализируются ферментами. Многие тысячи различных ферментов, каждый из которых в состоянии катализировать определенный тип химической реакции, открыты в различных организмах.

Транспортные белки. Транспортные белки в плазме крови связывают и переносят определенные молекулы или ионы от одного органа к другому. Гемоглобин эритроцитов связывает кислород, когда кровь проходит через легкие, и переносит его в периферические органы, где происходит окисление продуктов питания. В плазме содержатся липопротеиды, которые переносят липиды от печени к другим органам. Другие типы транспортных белков представлены в плазматических мембранах, внутриклеточных мембранах всех живых организмов. Они связывают глюкозу, аминокислоты и другие вещества и транспортируют их сквозь мембраны.

Питательные белки и белки запаса. Семена многих растений содержат питательные белки, необходимые для прорастания саженцев. Овальбумин (основной белок яичного белка), казеин (основной белок молока) являются наиболее известными примерами питательных белков. Ферритин, найденный в некоторых бактериях, а также в растениях и тканях животных, является хранителем ионов железа.

Сокращающиеся или подвижные белки. Некоторые белки способны изменять форму, или склонны к перемещению в пространстве. Актин и миозин функционируют в сокращающихся системах скелетных мышц, а также во многих немышечных клетках. Тубулин - это белок, из которого построены микротубулы, участвующие в движении клеток.

Структурные белки. Многие белки служат для формирования нитей, пластинок, чтобы придать биологическим структурам прочность, усилить их защитные свойства. Основным компонентом сухожилия является фибринный белок коллаген. Волос содержит нерастворимый белок кератин. Основным компонентом шелка, нитей паука является белок фиброин. Эластичность крыльев насекомых обусловлена белком резилином.

Защитные белки. Многие белки защищают организмы от вторжения (инвазии) других видов или защищают их от повреждения. Иммуноглобулины или антитела это - белки, продуцируемые лимфоцитами позвоночных животных, которые способны распознать и нейтрализовать инвазивные бактерии, вирусы или чужеродные белки других видов. Фибриноген и тромбин являются белками свертывающей системы крови, они предохраняют организм от потери крови, когда нарушена целостность сосудистой системы.

Регуляторные белки. Некоторые белки помогают регулировать клеточную или физиологическую активность. К ним относятся прежде всего гормоны. Примерами гормонов служат инсулин, который регулирует метаболизм углеводов, гормон роста, тиреоидин, окситацин и т.д. Иные регуляторные белки связываются с ДНК и регулируют синтез белков и РНК.

Другие белки. Существуют белки, чьи функции достаточно экзотичны и их не так легко классифицировать. В плазме крови некоторых антарктических рыб содержатся антифризные белки, которые защищают их кровь от замораживания.

Несмотря на экстраординарность всех этих групп белков, существенное различие их свойств и функций, все они построены из 20 аминокислот.

Белки - это высокомолекулярные соединения с числом аминокислотных остатков от 50 до нескольких тысяч.

 

Молекулярные параметры некоторых белков.

Белок	Молекулярная масса	Число остатков	Число полипептидных цепей
Инсулин (говяжий)
Цитохром C (человека)
Рибонуклеаза А (говяжья)
Лизоцим (яичного белка)
Миоглобин (конский)
Химотрипсин (говяжий)
Химотрипсиноген (говяжий)
Гемоглобин (человека)
Альбумин (человека)
Иммуноглобулин G (человека)
РНК-полимераза (Е. коли)
Аполипопротеин В (человека)
Глютамат дегидрогеназа (говяжья печень)

Некоторые белки состоят из одной полипептидной цепи, другие имеют две и более цепи. Индивидуальные цепи в мультисубъединичных белках могут быть идентичными или различными.

Можно вычислить приближенное число аминокислотных остатков в простом белке, если разделить его молекулярную массу на 110. Усредненная величина молекулярной массы для 20 аминокислот составляет около 138, однако более малые аминокислоты доминируют в большинстве белков.

Белки имеют характеристичный аминокислотный состав. Некоторые белки содержат помимо аминокислот другие химические компоненты, обычно называемых конъюгированными белками. Неаминокислотная часть этих белков носит название простетической группы. Ряд белков содержит более чем одну простетическую группу, они играют важную роль в биологической функции белка.

 

 

Комплексные белки

Класс	Простетическая группа	Пример
Линопротеины	Липиды	Липопротеин крови
Гликопротеины	Углеводы	Иммуноглобулин G
Фосфопротеины	Фосфатные группы	Казеин молока
Гемопротеины	Гем (железопорфирин)	Гемоглобин
Флавопротеины	Флавин нуклеотиды	Сукцинатдегидрогеназа
Металлопротеины	Железо	Ферритин
Цинк	Алкогольдегидрогеназа
Кальций	Калмодулин
Молибден	Динитрогеназа
Медь	Пластоцианин

 

Клетка содержит тысячи различных типов белков. Выделение индивидуальных белков важно для изучения их состава, свойств, установления аминокислотной последовательности. Существует множество методов выделения и очистки белков, установления их состава, строения, структуры, свойств.

 

Методы очистки гипотетического фермента.

Процедура	Объем фракции, мл	Общий белок, мг	Активность, ЕД	Удельная активность, ЕД/мг
1. Грубая клеточная экстракция
2. Осаждение
3. Ионообменная хроматография
4. Эксклюзионная хроматография
5. Аффинная хроматография

 

Наряду с хроматографией другим важным методом, пригодным для разделения белков, является электрофорез, основанный на перемещении заряженных белков в электрическом поле.

Электрофоретическая подвижность белка ( m ) пропорциональна заряду молекулы, Z, деленному на коэффициент трения, f, т. е. m = Z/f, причем коэффициент трения связан с молекулярной массой и формой биополимера.

Для определения изоэлектрической точки ( рI ) белка используют метод изоэлектрического фокусирования. Градиент рН устанавливают с помощью смеси низкомолекулярных органических кислот и оснований.

 

⇐ Предыдущая12345678910Следующая ⇒

Поделиться: