ЯМР – спекроскопия – ввод радиоизотопов, кот. могут иметь магнитные ядра, поглощ. в однородном магнитном поле энергию строго определенной резонансной частоты

5.       Расчетные методы (молекулярная динамика и механика) – рассчитывают энергию каждого атома белк. молекулы и затем располагают их в пространстве.

6.       Дисперсия оптического вращения. Для общего описания β-складачатых структур и α-конформационных спиралей. По-разному вращается плоскополяризованный свет; по-разному поглощается циркулярнополяризованный свет. Вектор направления электрич. поля для всех фотонов светового пучка лежит в одной плоскости – плоскополяризованный  свет. Циркулярнополяриз. свет – вектор напряженности описывает спираль.

7.       Инфракрасная спектроскопия (Для общего описания β-складачатых структур и α-конформационных спиралей) – белок растягивают на пленках, свет падает вдоль и поперек этой плёнки -> характеристика растянутой молекулы – архитектоника водородных связей.

 

14.  Использование фотометрического анализа в биохимии. Виды абсорбционной и эмиссионной фотометрии.

Фотометрич. анализ относится к спектрометрич. методам иссл. (1) абсорбциометрия (абсорбционная спектроскопия): длина волны и степень зависит как от мол., так и от ее окр.;

(2) эмиссионная спектроскопия: переводят мол. в окрашенную или спос. поглощать свет форму. Ортотолуолидиновый, нитробензольный, паранитрофенольный методы (в основе назв. – соед., переводящее данное соед. в окр. форму).

Теория поглощения света . Свет имеет эл/магн природу и возн. при вз/д эл. и магн. поля. Кванты (фотоны). λ – длина волны. E=hν=hc/λ. Области Max поглощения лучей раствором: 450-480 нм – желтый, 490-510 нм – красный, 575-590 нм – синий. Если в смеси в-в одно поглощает, а остальные – отражают, то это является возм. определить это в-во в смеси. Поглощать в-во будет, только если оно имеет хромофорные группировки. Хромофор – мол. (часть), кот. м.б. возбуждена при поглощении света. Хромоф . гр .: -C=O, -N≡N, -N=O, -N-S, -C(O)NH-, -Arom-, -C=C-.

Погл. только тот свет, кот. соотв. разности возбужденного и исходного состояния. M –(+λν)→M*, М была Е, у М* - Е*. λ=hc/(E*-E).

Типы вз/д энергии с в-вом: (1) погл. эн. может переходить в тепловую, кот. рассеивается в окр. среду, но т.к. кол-во возб. мол. оч. мало, то и кол-во выд. эн. мало, и это не приводит к разруш. в-ва. (2) погл. эн. может приводить к разруш. в-ва, если эн. фотонов оказалась слишком велика (напр., NaNO3 необх. готовить непосредственно перед анализом). (3) релаксация мол. сопровождается флуоресценцией (эмиссивный процесс). (4) в-во может получать доп. эн. при нагревании в пламени, в-во сгорает, а атомы возбуждаются. Итог: -абсорбция, -эмиссия. (Фотометрия пламени).

Фотометрические приборы. Абсорбционная. (1) растворов – ФЭК, СФ. (2) взвесей: а. нефелометрия – нефелометр; б. турбидиметрия – ФЭК, СФ. (3) атомно-абсорбционная спектроскопия – атомный абсорбциометр. Эмисиионная. (1) атомно-эмиссионная спектроскопия (фотометрия пламени) – пламенный фотометр. (2) флуориметрия – флуориметр.

Нефелометр изм. интенс. рассеянного излуч., изм. отклоненный поток. Турбидиметрия основ. на изм. ослабленного потока света. Неф. и турб. – в цитометрах (рег. фракции в плазме крови). Атомный абсорбциометр и плазменный фотометр – в клинике для опр. катионов.

Общ. принцип строения аппаратуры для фотометрии: Источник изл. (лампа, пламя) → монохроматор (призма, дифр. решетка) → исследуемые р-ры → детектор (ФЭ, термопара) → указатель (стрелочный МПУ).

Монохроматор осущ. сужение свет. потока, который напр. на кювету (лучше всего – с диапазонов в одну волну). Кварцевые призмы выщепл. одну длину волны, они исп. в научн.-иссл. апп. ФЭК – диапазон 40-50-60 нм. Дифр. реш. – 3 нм. Иссл. р-р помещ. в кювету (наливная или проточная). Термопара – для длинной дл. волны.

Фотометры: одноканальные (один монохроматор, напр. через одну кювету); многоканальные (8 многохроматоров, кажд. через свою лупу).

Абсорбция (А) (экстинкция, density). A=lg(I0/IT), I0 – падающий свет, IT – поглощенный. При высоких концентр. в-ва зависимость А от [c] отклоняется от линейной. Измер. произв. только в области линейности (опр. экспериментально).

⇐ Предыдущая12345678910Следующая ⇒

Поделиться: