ОПРЕДЕЛЕНИЕ ЗАРАЖЕННОСТИ СЕМЯН БОЛЕЗНЯМИ

(ГОСТ 12044-93)

Задания. 1. Провести предварительный анализ зараженности семян болезнями люминесцентным методом. 2. Ознакомиться с другими методами определения зараженности семян болезнями.

Материалы и оборудование. Образцы семян, разборные доски, осветитель УФ, бумага черная.

Методические указания. Люминесцентный метод определения зараженности семян болезнями применяют для предварительного анализа зараженности.

Из навески семян, отобранной из средней пробы, выделяют семена основной культуры, которые раскладывают на черную бумагу, помещают под ультрафиолетовый осветитель и просматривают.

Здоровые семена пшеницы светятся сине-голубым или сине-фиолетовым светом, а семена, зараженные в сильной степени, остаются темными, тусклыми.

Семена гороха в местах заражения аскохитозом, фузариозом светятся тусклым, коричнево-красным светом.

При зараженности семян свеклы фомозом пикниды гриба, находящиеся на поверхности семян, светятся белым матовым светом.

Семена кукурузы, зараженные фузариозом, светятся ярким оранжевым или малиновым светом.

Здоровые семена сои светятся светло-голубым светом.

По свечению семян делают предварительное заключение о наличии или отсутствии заболеваний семян.

Существуют и другие, более точные, методы определения зараженности семян болезнями: макроскопический, центрифугирования, биологический (проращивание во влажной камере на питательных средах) и др.

Макроскопический метод применяют для визуального обнаружения в семенах головневых образований, в частности, склероциев спорыньи и других грибов, а также галлов пшеничной неметоды. Анализ проводят одновременно с определением чистоты семян.

Метод центрифугирования. Метод применяют для определения наличия спор головни на поверхности семян злаковых культур и лука, спор возбудителя болезни «пасмо» на семенах льна, спор рамуляриоза на семенах кориандра, спор ржавчины на клубочках свеклы и семенах аниса, спор и мицелия церкоспороза на семенах фенхеля.

Для проведения анализа из разных мест третьей средней пробы отсчитывают подряд две пробы по 100 семян каждая. Пробу помещают в пробирку, заливают 10 мл воды и взбалтывают в течение 5 мин (семена с гладкой поверхностью – пшеница, рожь, тритикале), 10 мин (с шероховатой поверхностью – свекла и др.) и 1 мин (лен). Затем промывную воду от каждой пробы семян сливают в отдельные чистые пробирки и центрифугируют в течение 3 мин при количестве оборотов ручной центрифуги не менее 150 мин.

Воду из каждой пробирки сливают, взмучивают пипеткой и из него готовят 5 препаратов (5 капель) для просмотра под микроскопом и установления по обнаруженным спорам вида гриба.

Подсчет спор в суспензии проводят в камере Горяева, а зараженность спорами одного семени (х) в штуках вычисляют по формуле:

где N – количество спор в 1 мл суспензии, шт.;

10 – объем воды, взятой для смыва, мл; 100 – количество семян, взятых для анализа, шт.Если подсчет спор ведут в больших квадратах камеры Горяева, то при определении величины N обнаруженное число спор умножают на 250 тыс., в малых квадратах – на 400 тыс., а на всей площади камеры – на 1111.

Биологический метод применяют для выявления внешней и внутренней зараженности семян болезнями. Основан он на стимуляции развития и роста микроорганизмов в зараженных семенах. Зараженность семян определяют при проращивании их во влажной камере или на питательных средах.

При проращивании семян во влажной камере заболевания, вызываемые бактериями, выявляют по размягчению и ослизнению тканей семени. Заболевания, вызываемые грибами на проросших и не проросших семенах, проявляются в виде пятен различной формы и окраски, уродливости или отмирания частей проростков.

Рассмотрим порядок отбора проб семян, подготовки и проведения анализа семян во влажной камере.

Из третьей средней пробы выделяют навеску, затем из семян основной культуры навески отбирают 4 пробы по 50 или 100 семян в зависимости от вида анализируемых культур.

Для проращивания семян используют промытые сухие чашки Петри и Коха, а также пластмассовые или фаянсовые растильни. На дно чашки помещают кружки из марли в три слоя или фильтровальную бумагу в два слоя, положенную на гигроскопическую вату толщиной слоя не более 0, 25 см. При анализе крупносемянных культур (фасоль, горох и др.) используют чашки Коха, пластмассовые или фаянсовые растильни, на дно которых помещают кварцевый свежепрокаленный песок.

Чашки Петри, марля, фильтровальная бумага с ватой, пипетки и вода применяемая для анализа, должны быть стерильными.

Для выявления внутренней инфекции перед закладкой во влажную камеру семена предварительно должны быть продезинфицированы в течение 5 мин в 0, 5%-ном растворе марганцовокислого калия или 96%-ном растворе спирта и промыты стерилизованной или свежекипяченой остуженной водой. В растворе спирта семена дезинфицируют в течение 1 мин. После этого семена просушивают между листами стерильной фильтровальной бумаги.

Термостат предварительно тщательно промывают и дезинфицируют формалином, для чего в стеклянную чашку наливают 40%-ный формалин и ставят ее открытой в термостат. Затем термостат плотно закрывают на 10-12 ч, после чего чашку с формалином убирают и термостат хорошо проветривают в течение не менее 6 ч. Марлю, комбинированный субстрат или фильтровальную бумагу в чашках Петри увлажняют до полной влагоемкости пипеткой, слегка приоткрывая при этом с одного края крышку чашки.

В растильни засыпают кварцевый свежепрокаленный песок (сразу после их дезинфицирования) и увлажняют стерилизованной или свежекипяченой водой. Семена слегка вдавливают в песок, раскладывая на расстоянии 1, 5-2, 0 см друг от друга.

Закрытые чашки Петри или Коха или растильни с заложенными в них семенами помещают в термостат для проращивания.

Просмотр семян пшеницы, ржи, ячменя, кукурузы, риса, льна, сои, эфиромасличных культур проводят по истечении установленных настоящим стандартом сроков проращивания, семян остальных культур – в сроки, установленные для определения всхожести по ГОСТ 12038-84.

Виды болезней семян основных полевых культур, выявляемые при проращивании семян во влажной камере, следующие:

пшеница и ячмень – фузариоз, гельминтоспориоз, альтернариоз;

рожь – гельминтоспориоз, фузариоз;

овес – фузариоз;

кукуруза – фузариоз, диплодиоз, серая гниль, нигроспороз, красная гниль, белая гниль, бактериоз, бель;

соя – фузариоз, бактериоз, белая гниль, аскохитоз, церкоспороз, переноспороз;

рис – гельминтоспориоз, пирикуляриоз, фузариоз, альтернариоз;

горох – аскохитоз, бактериоз, белая и серая гнили;

подсолнечник – белая и серая гнили, вертициллез;

свекла – фомоз;

вика и люцерна – аскохитоз, фузариоз;

злаковые травы – гельминтоспориоз.

Возбудители многих болезней лучше выявляются при высеве семян на питательные среды: картофельный агар, пивное сусло с агаром, картофельно-глюкозный агар и др. На агаровых средах микроорганизмы, развиваясь, переходят из зараженных семян на субстрат и образуют хорошо заметные колонии. Количество семян, на которых образовались колонии, подсчитывают и определяют процент больных семян. Виды возбудителей устанавливают по цвету колоний и дополнительно путем просмотра небольшой части их под микроскопом.

Формы спор и конидий разных возбудителей болезней показаны в приложениях к ГОСТ 12044-81.

Контрольные вопросы

1. Что обнаруживают при помощи макроскопического метода определения зараженности семян болезнями?

2. В чем суть люминесцентного метода?

3. Как светятся здоровые и зараженные в сильной степени семена пшеницы при люминесцентном методе?

4. Как светятся зараженные болезнями семена гороха, свеклы, кукурузы и здоровые семена сои?

5. Как проводится анализ семян на зараженность болезнями биологическим методом (проращивание во влажной камере и на питательных средах)?

⇐ Предыдущая 29 30 31 32 333435 36 37 38 Следующая ⇒