Цель, принципы, методы микробиологической диагностики ииф. Болезней

⇐ ПредыдущаяСтр 6 из 24Следующая ⇒

При диагностике заболеваний решающие значение имеет клиническое обследование больного, позволяющее нередко уже в первые дни и даже часы болезни выявить симптомы характерные, для данной патологии. Однако большое значение придается и лабораторным методам исследования, в том числе и иммунобактериологическим. Они облегчают раннюю диагностику, позволяют дифференцировать нозологические формы заболеваний, имеющих общность в клинических проявлениях и течении болезни. Применение бактериологического метода диагностики способствует осуществлению ранней диагностики инфекционных болезней, дает лечащему врачу объективные доказательства достоверности поставленного диагноза. Успех бактериологической лабораторной диагностики в значительной степени зависит от правильности взятия патологического материала, своевременной доставки его в лабораторию, грамотного оформления бланка-направления.

1 . Основы микробиологической диагностики

Диагностический процесс в бактериологии складывается из четырех основных этапов:

I – формулировка задачи и выбор метода исследования;

II – выбор и взятие исследуемого материала, его хранение и транспортировка;

III – проведение исследований;

IV – анализ полученных результатов.

Различают следующие методы лабораторной диагностики заболеваний микробной природы:

I. Методы, основанные на выявлении инфекционных агентов (бактерий, вирусов, грибов, простейших и т.д.):

1) микроскопические методы (базируются на прямом обнаружении возбудителя в патологическом материале с помощью различных приемов микроскопии);

2) бактериологические (основаны на культивировании возбудителя на питательных средах или на культурах тканей с целью выделения его в чистой культуре и последующей идентификации);

3) биологические (целью является воспроизведение инфекционного заболевания в организме восприимчивых животных с последующим выделением чистой культуры возбудителя и ее идентификацией);

4) методы, позволяющие обнаружить в исследуемом материале соединения, синтезированные микроорганизмы (летучие жирные кислоты при диагностике инфекций, обусловленных неспорообразующими анаэробами или токсин при диагностике ботулизма);

5) иммунологические методы поиска антигенов возбудителей в исследуемом материале с помощью серологических реакций с использованием диагностических сывороток (сероидентификация);

6) генетические методы, основанные на обнаружении нуклеиновых кислот возбудителя в пробе.

II. Методы исследования активного иммунитета направлены, чаще всего на выявление нарастания титров антител к возбудителям в сыворотке крови больных (серодиагностика) или на обнаружение сенсибилизации организма больного (аллергодиагностика).

III. Неспецифические лабораторные тесты, по характеру отклонений выявленных показателей от нормальных позволяют обнаружить патологические изменения, характерные для инфекционных процессов определенной этиологии (например, наличие изменение активности трансаминаз при вирусных гепатитах).

2. Стерилизация, дезинфекция; определение, методы, контроль, практическое применение. Понятие
Об асептике и антисептике.

Стерилизация — это полное освобождение объектов окружающей среды от микроорганизмов и их спор. Существуют физические, химические и механические способы стерилизации.

К наиболее распространенным способам физической стерилизации относятся автоклавирование и сухожаровая стерилизация.

Автоклавирование — это обработка паром под давлением, которая проводится в специальных приборах — автоклавах. Автоклав представляет собой металлический цилиндр с прочными стенками, состоящий из двух камер: парообразующей и стерилизующей. В автоклаве создается повышенное давление, что приводит к увеличению температуры кипения воды. Паром под давлением стерилизуют питательные среды, патологический материал, инструментарий, белье и т.д.

Наиболее распространенный режим работы автоклава — 2 атм., 120°С, 15—20 мин. Началом стерилизации считают момент закипания воды.

К работе с автоклавом допускаются подготовленные специалисты, которые точно и строго выполняют все правила работы с этим прибором.

Сухожаровая стерилизация — проводится в печах Пас-тера. Это шкаф с двойными стенками, изготовленный из металла и асбеста, нагревающийся с помощью электриче-

ства и снабженный термометром. Сухим жаром стерилизуют, в основном, лабораторную посуду. Обеззараживание материала в нем происходит при 160°С в течение 1 часа.

В бактериологических лабораториях используется такой вид стерилизации, как прокаливание над огнем. Этот способ применяют для обеззараживания бактериологических петель, шпателей, пипеток. Для прокаливания над огнем используют спиртовки или газовые горелки. К физическим способам стерилизации относятся также УФ-лучи и рентгеновское излучение. Такую стерилизацию проводят в тех случаях, когда стерилизуемые предметы не выдерживают высокой температуры.

Механическая стерилизация — проводится при помощи фильтров (керамических, стеклянных, асбестовых) и особенно мембранных ультрафильтров из коллоидных растворов нитроцеллюлозы. Такая стерилизация позволяет освобождать жидкости (биопрепараты, сыворотку крови, лекарства) от бактерий, грибов, простейших и вирусов, в зависимости от размеров пор фильтра. Для ускорения фильтрации создают повышенное давление в емкости с фильтруемой жидкостью или пониженное давление в емкости с фильтратом.

В микробиологической практике часто используют асбестовые фильтры Зейтца, Шамберлана. Такие фильтры рас-читаны на одноразовое применение.

Химическая стерилизация — этот вид стерилизации применяется ограниченно. Чаще всего используют химические вещества для предупреждения бактериального загрязнения питательных сред и иммунобиологических препаратов.

При химической стерилизации возможно использование двух токсичных газов: окиси этилена и формальдегида. Эти вещества в присутствии воды могут инактивировать ферменты, ДНК и РНК, что приводит бактериальные клетки к гибели. Стерилизация газами осуществляется в присутствии пара при 50—80°С в специальных камерах. Этот вид стерилизации опасен для окружающих, однако существуют объекты, которые могут быть повреждены при нагревании и по-

этому их можно стерилизовать только газом. Например, оптические приборы, некоторые питательные среды.

Для проведения стерилизации тех или иных объектов необходимо строго соблюдать установленный режим стерилизации (например, для питательных сред он указан в рецепте приготовления).

При проведении стерилизации в автоклаве необходимо осуществлять контроль стерилизации.

Существует 3 вида контроля:

* химический — в автоклав при каждой загрузке кладут бензойную кислоту, мочевину, запаянные в ампулы, или индикаторы стерилизации ТВИ — 120°С — 1 атм, ТВИ - 132°С - 2 атм.

При достижении заданного режима стерилизации указанные вещества меняют свой цвет, а термовременные индикаторы темнеют;

термический — 2 раза в месяц максимальным термометром во время стерилизации проводят замер температуры в контрольных точках, которая должна достичь заданных параметров;

* биологический — проводится 2 раза в год. В контрольных точках помещают пробирки со споровой культурой Bacillus stearothermophilies, погибающей при 120°С в течение 15 мин. После стерилизации пробирки помещают в термостат при t = 55 °С на 48 часов. При достижении заданного режима рост тесткульту-ры отсутствует: фиолетовой цвет среды в пробирках не меняется.

Для сохранения стерильности стерилизуемые предметы должны иметь упаковку, не допускающую микробного загрязнения.

Возбудитель чумы

В этот род включены 3 вида бактерий: Y. pestis — возбудитель чумы; Y. pseudotuberculosis — возбудитель псевдотуберкулеза и Y. enterocolitica — возбудитель персиноза.

Представители этого рода являются подвижными или неподвижными палочками, спор не образуют, капсул не имеют, факультативные анаэробы, паразитируют в организме человека и животных. Хорошо растут на простых питательных средах.

Типовой вид Y. pestis — возбудитель чумы.

Морфологические и культуральные свойства. Чумная бактерия неподвижна, спор и капсул не образует. Молодые колонии имеют неровные края («кружевной платочек»), зрелые колонии — неровные края в виде «ромашки». На скошенном агаре через 48 часов при 28° С образуют серовато-белый налет, врастающий в среду. На бульоне через 48 часов образуют пленку на поверхности и хлопьевидный осадок.

Y. enterocolitica на плотных средах образует мелкие, блестящие, голубоватые колонии. На среде Эндо они имеют розоватый оттенок. На жидких средах образуют равномерное помутнение.

Y. pseudotuberculosis образуют бесцветные колонии на среде Эндо. Часто колонии выпуклые, бугристые и по внешнему виду могут напоминать колонии Y. pestis.

Opt — температура роста для персиний 28°С, рН — 5, 0— 8, 0.

Антигенная структура. Все виды персиний имеют О-ан-тиген (эндотоксин), который является очень токсичным для животных и человека. Методом преципитации в агаре у возбудителя чумы обнаружены антигены, общие с псевдотуберкулезными, кишечнотифозными, дизентерийными бактериями.

Резистентность. Возбудитель чумы очень устойчив к низким температурам, на предметах и одежде может сохранять свою жизнеспособность до 6 месяцев, в воде и мокроте — 10—30 суток, в молоке — до 3 месяцев. Возбудитель чумы очень чувствителен к высыханию и действию высоких температур, при кипячении гибнет через 1 мин, под действием 5% раствора фенола через 5—10 мин, 5% раствора лизола — через 2—10 минут.

Эпидемиология. Для всех персиний основными хозяевами являются животные, вторичным — человек.

Y. pestis — чума — человеку передается через укусы блох, а также контактным, алиментарным или воздушно-капельными путями.

Эпидемии чумы известны с древнейших времен. Это заболевание приводило к гибели миллионов людей. В XIV— XV вв. пандемия чумы унесла около 60 млн жизней. В 1894 г. в Гонконге началась 3-я пандемия чумы, которая продолжалась 20 лет и унесла 10 млн жизней.

Последние вспышки были зарегистрированы в Индии (90-е гг. XX в.).

Y. Enterocolitica — вызывают у человека инфекции, сопровождающиеся энтеритом, диареей, псевдоаппендицитом. Главный симптом заболевания — гастроэнтерит. Этот возбудитель в природе распространен повсеместно, выделяется от различных животных. Подъем заболеваемости персинио-зами отмечают в осенне-зимний период. Большинство случаев заражения связаны с употреблением недостаточно проваренного мяса свинины.

Y. pseudotuberculosis — вызывает у человека брыжеечный аденит, а у диких и домашних животных системные поражения. Заражение человека происходит от инфицированного животного путем, общим для большинства кишечных инфекций. Природный резервуар возбудителя — домашние животные и птицы, а также олени, грызуны.

Патогенез. Y. pestis внедряется в организм в месте укуса блохи; блохи инфицируются бактериями, питаясь кровью больных животных. При легочной форме бактерии чумы передаются воздушно-капельным путем с мокротой при кашле больного человека. В зависимости от места локализации возбудителя, иммунного статуса организма, вирулентности микроба может наблюдаться кожная, бубонная, кишечная, первично-легочная, вторично-легочная форма чумы.

Y. Enterocolitica — вызывает энтероколит с диареей, лихорадкой и болями в животе. Вирулентность этого возбудителя связана с адгезивными и инвазионными свойствами, а также выделением энтеротоксина, аналогичного термостабильным токсинам Е. coli. Y. Enterocolitica проникают в слизистую оболочку тонкой кишки, там усилен-

но размножаются и попадают в брыжеечные лимфатические узлы.

Клинические проявления. Чума начинается внезапно. Инкубационный период от 2 до 6 дней. Продромальный период отсутствует: появляется озноб, сильная головная боль и головокружение; лицо становится бледным, с синюшным оттенком и выражением страдания (ужаса) — fades pestica. Каждой форме чумы присущи специфические клинические проявления. Наиболее часто, попав в лимфатический узел, возбудитель вызывает в нем серозно-геморрагическое воспаление, при этом формируется болезненный бубон. Кишечная чума проявляется диареей с обильным выделением крови и слизи. Обычно заканчивается летальным исходом.

Иерсинеоз характеризуется диареей с имитацией приступа аппендицита. Иногда кишечная инфекция может трансформироваться в септицемию с поражением внутренних органов, которые возникают через 2 недели от начала болезни.

Y. pseudotuberculosis — вызывает энтероколиты и воспаление брыжеечных лимфатических узлов.

Иммунитет. После перенесения чумы у человека вырабатывается стойкий иммунитет. Древние люди догадывались об этом, и переболевших людей привлекали для ухода за больными и для захоронения трупов.

Иммунитет обусловлен фагоцитарной активностью клеток лимфоидно-макрофагальной системы.

Профилактика

1. Ранняя диагностика чумы.

2. Немедленная изоляция больных, госпитализация и установление карантина.

3. Проведение в очагах тщательной дезинсекции и дератизации.

4. Индивидуальная защита медицинского персонала, профилактическое введение стрептомицина и вакцинация.

5. Выполнение международных конвенций по профилактике

Специфическая профилактика проводится путем введения человеку живой вакцины EV. Ее выпускают в сухом виде, вводят подкожно, внутрикожно, накожно однократно или двукратно. Такой иммунитет сохраняется до года. В зависимости от эпидемиологической обстановки проводится ревакцинация через 6—12 месяцев. В последние годы заболеваемость чумой снизилась, хотя в ранее эндемических районах отмечается некоторая активизация природных очагов.

Билет 14

⇐ Предыдущая 1 2 3 4 567 8 9 10 Следующая ⇒