Определение лактозы йодометрическим методом

⇐ ПредыдущаяСтр 3 из 7Следующая ⇒

В химический стаканчик отвешивают 10 г молока и переносят в мерную колбу вместимостью 250 см³. Стаканчик ополаскивают дистиллированной водой и выливают в ту же колбу, добавляют воду до половины колбы и перемешивают. Для осаждения белков и жира в колбу приливают 5 см³ раствора сульфата меди и 2 см³ 0, 1 н раствора гидроксида натрия, перемешивая после добавления каждого раствора. Колбу доливают дистиллированной водой до метки и снова тщательно перемешивают.

Содержимое колбы оставляют в покое на 20 – 30 мин, затем фильтруют через сухой фильтр в сухую колбу вместимостью 300 см³. К 25 см³ фильтрата (что соответствует 1 г молока), отмеренного пипеткой в коническую колбу с притертой или резиновой пробкой, добавляют 25 см³ 0, 1 н йода и постепенно при непрерывном помешивании приливают 37, 5 см³ 0, 1 н гидроксида натрия. Закрыв колбу пробкой, оставляют на 20 мин в темноте. Затем в колбу добавляют 8 см³ 0, 5 н соляной кислоты и выделившийся йод титруют 0, 1 н тиосульфата натрия в присутствии 1%-го крахмала. Титрование сначала ведут без индикатора до получения светло-желтой окраски. После чего добавляют 1 см³ 1%-го крахмала и продолжают титровать до момента, когда с одной капли раствора тиосульфата натрия исчезнет синяя окраска раствора.

Холостую пробу ставят следующим образом: к 25 см³ 0, 1 н йода добавляют постепенно при непрерывном перемешивании 37, 5 см³ 0, 1 н гидроксида натрия. Закрыв колбу пробкой, оставляют в покое на 20 мин в темноте. Затем добавляют 8 см³ 0, 5 н соляной кислоты и титруют выделившийся йод 0, 1 н тиосульфата натрия в присутствии 1 см³1%-го крахмала, как указано выше. Содержание лактозы Л (в %) определяют по формуле [3.11]:

Л =1, 75 (а – б),

[3.6]

где: а –количество 0, 1 н тиосульфата натрия, пошедшее на титрование йода, выделившегося в холостой пробе, см³;

б – количество 0, 1 н тиосульфата натрия, пошедшее на титрование выделившегося йода при определении в фильтрате молока, см³.

Расхождение между параллельными определениями лактозы не должно быть более 0, 2%.

Содержание отчета, форма и правила оформления отчета о выполненной работе

Отчет по лабораторной работе оформляется в тетради и содержит: название, цель работы; описание методов определения массовой доли крахмала и декстринов в углеводсодержащем сырье или пищевых продуктах; описание йодометрического метода определения лактозы; результаты собственных исследований; выводы по работе.

Результаты анализов по определению массовой додли крахмала методом Эверса оформить в виде таблицы 3.2, а определение массовой доли декстринов методом М. П. Попова и Е. Ф. Шаненко в виде таблицы 3.3.

Таблица 3.2. – Результаты анализов по определению массовой доли крахмала методом Эверса

Наименование показателя	Значение
Величина угла поворота поляризации в основном опыте	α _оп =
Величина угла поворота поляризации в контрольном опыте	α _к =
Величина угла поворота поляризации, полученная гидролизованным крахмалом навески	(α _оп – α _к) =
Коэффициент Эверса	F =
Массовая доля влаги в исследуемом продукте	W =

Таблица 3.3. – Результаты анализов по определению массовой доли декстринов

Наименование показателя	Значение
Величина оптической плотности раствора при длине волны 660 нм (D₆₆₀)
Величина оптической плотности раствора при длине волны 530 нм (D₅₃₀)
Концентрация амилозы в растворе (С_А)
Концентрация декстринов в растворе (С_D)
Массовая доля влаги в продукте (W)
Массовая доля амилозы в пересчете на сухие вещества продукта, % (А)
Массовая доля декстринов в пересчете на сухие вещества продукта, % (D)

Контрольные вопросы и защита работы

1. Классификация углеводов пищевых продуктов.

2. Химический состав и свойства моносахаридов.

3. Химический состав и свойства дисахаридов.

4. Химический состав и свойства усвояемых гомополисахаридов.

5. Пищевые волокна и их роль в организме.

6. Функционально-технологические свойства углеводов.

7. Превращения углеводов в технологическом потоке. Клейстеризация крахмала.

8. Превращения углеводов в технологическом потоке. Меланоидинообразование и карамелизация.

9. Основные методы определения массовой доли крахмала в продуктах.

10. Сущность йодометрического метода определения лактозы.

11. Сущность метода Эверса по определению массовой доли крахмала

12. Сущность метода определения массовой доли амилозы и декстринов.

ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА № 4

ОПРЕДЕЛЕНИЕ АМИЛОЛИТИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ ФЕРМЕНТНЫХ ПРЕПАРАТОВ

Цель работы: освоить метод определения амилолитической активность ферментных препаратов.

Теоретическое положение

Ферменты являются веществами белковой природы, поэтому в смеси с другими белками определить их количество невозможно. Наличие определенного фермента в данном препарате может быть установлено по результатам той реакции, которую катализирует фермент, т. е. по количеству образовавшихся продуктов реакции или уменьшению исходного субстрата. В количественном выражении условно активность фермента определяется по начальной скорости ферментативной реакции. Начальная скорость зависит от многих факторов, наиболее важные из них - температура, концентрация субстрата, рН реакционной смеси и время от начала реакции. Поэтому по предложению Комиссии по ферментам Международного биохимического союза были приняты правила определения активностей препаратов и их выражения в единицах активности.

Стандартная единица активности. Эта величина для любого фермента обозначает то его количество, которое катализирует превращение 1 микромоля субстрата в минуту (мкмоль/мин) при заданных регламентированных условиях. На русском и немецком языках эта единица обозначается буквой Е, на английском, французском, итальянском и испанском языках - U. Часто количество субстрата нельзя выразить числом микромолей, т.к. точно не известна масса молекулы, например, при действии на белок, крахмал, пектин, целлюлозу. В этих случаях определяют микроэквивалент затронутых реакцией групп. Так, при гидролизе белка учитывают не число прогидролизированных молекул, а число образовавшихся свободных карбоксильных и аминных групп, т.е. число расщепленных пептидных связей; при гидролизе крахмала и полисахаридов – число прогидролизованных глюкозидных связей и т.д. Если количество прореагировавшего субстрата очень мало или велико, допускается выражение результатов в миллиединицах (мЕ или мU) и килоединицах (кЕ и кU).

В связи с введением Международной системы единиц (СИ) предложено новое определение ферментной единицы катал (кат, kat); 1 кат – каталитическая активность, способная осуществлять реакцию со скоростью, равной 1 молю в 1с (1 моль/с). Отношение международной единицы (Е) к каталу можно выразить следующим образом: 1 кат = 1 моль *с^-1 = 60 моль*мин^-1= 60*10⁶ мкмоль*мин^-1 = 6*10⁷Е; или 1 Е = 1 мкмоль*мин^-1 = (1/60) мкмоль*с^-1 = (1/60) мккат = 16, 67 нкат. Таким образом, 1 Е фермента соответствует 16, 67 нкат.

Комиссия по ферментам рекомендовала придерживаться определенных условий при установлении активности фермента: проведение измерения единиц фермента при 30° С и определять активность по начальной скорости реакции, когда концентрация субстрата достаточна для насыщения фермента и соответствует кинетике реакции нулевого порядка. Концентрации субстрата, фермента и рН выбирают оптимальными для данного фермента.

Амилолитическая активность характеризует способность амилолитических ферментов катализировать гидролиз крахмала до декстринов различной молекулярной массы и выражается числом единиц указанных ферментов в 1 г препарата.

За единицу активности амилолитических ферментов (АС) принято такое количество ферментов, которые в строго определенных условиях температуры, рН и времени действия, катализируют до декстринов различной молекулярной массы 1 г растворимого крахмала, что составляет 30% от введенного в реакцию.

Аппаратура, оборудование и материалы:

Приборы и оборудование – ультратермостат, фотоэлектрокалориметр, весы аналитические, магнитная мешалка, плитка, водяная баня.

Реактивы и материалы – ацетатный буферный раствор рН 4, 7; 01н НС1; 0, 2 н НС1, 0, 1 н НС1; 0, 5 М NaCO₃; амилолитические ферментные препараты, дистиллированная вода; крахмал, 1%- крахмал; 1 н уксусная кислота; 1 н уксуснокислый натрий; основной раствор йода; бумажные фильтры;

Посуда – пробирки, химические стаканы емк. 50 см³, мерные колбы емкостью 100 см³, мерный цилиндр 50 см³, на мерные колбы емкостью 100 см³, стеклянные палочки, пипетки на 2 см³, 5 см³, 10 см³.

Порядок выполнения работы

Сущность метода. Метод основан на гидролизе крахмала ферментами амилолитического комплекса до декстринов различной молекулярной массы.

Ход работы:

1. Приготовление 1%-го раствора крахмала (субстрата)

1 г крахмала с помещают в мерную колбу на 100 см³, добавляют 25 см³ воды и перемешивают. Затем добавляют в колбу еще 25 см³ воды, помещают колбу с содержимым в кипящую водяную баню, непрерывно перемешивая до полного растворения крахмала. Затем содержимое колбы охлаждают, добавляя 10 см³ ацетатного буферного раствора рН 4, 7, объем жидкости доводят до метки дистиллированной водой и содержимое колбы перемешивают. Раствор крахмала готовят в день проведения анализа.

⇐ Предыдущая 1 234 5 6 7 Следующая ⇒