Исходный уровень знаний и навыков

⇐ ПредыдущаяСтр 3 из 8Следующая ⇒

Студент должен знать:

1. Строение, классификацию и свойства основных классов аминокислот.

2. ЦТК, реакции, ферменты, механизмы регуляции.

3. Механизм микросомального окисления.

4. Строение витамина В₆ и его коферментные формы.

Студент должен уметь:

1 Проводить исследование на колориметре.

Структура занятия

Теоретическая часть

1.1 Основные реакции обмена аминокислот:

1.1.1 Реакции на радикал:

а) гидроксилирование (про, лиз, фен). Механизм микросомального окисления (роль аскорбата, NADPH, цитохрома P450 и др.), примеры, биологическое значение;

б) разрыв (механизм, биологическое значение);

в) метилирование и др.

1.1.2 Реакции на карбоксильную группу:

а) декарбоксилирование (на примере гис, тир, трп, глу) – механизм, ферменты, биологическая роль;

б) восстановление – ферменты, биологическая роль.

1.1.3 Реакции на аминогруппу:

а) виды дезаминирования (окислительное, восстановительное, гидролитическое, внутримолекулярное), их биологическое значение;

б) прямое окислительное дезаминирование – механизм, ферменты, коферменты, биологическое значение;

в) реакции переаминирования – ферменты, коферменты, биологическое значение;

г) непрямое окислительное дезаминирование – механизм, ферменты, коферменты, биологическое значение.

1.2 Аммиак, пути его образования и механизмы токсичности.

1.2.1 Пути детоксикации аммиака:

а) восстановительное аминирование;

б) образование амидов (глн и асн);

в) аммониогенез;

в) биосинтез мочевины, реакции, ферменты, локализация, биологическая роль цикла синтеза мочевины (ЦСМ). Энергетическая емкость ЦСМ. Связь ЦСМ с ЦТК и обменом аминокислот. Роль ЦСМ в регуляции кислотно-основного состояния (КОС).

1.3 Энзимопатии ЦСМ, виды и основные клинические проявления.

1.4 Пути вступления аминокислот в ЦТК (схема). Глико- и кетогенные аминокислоты.

Практическая часть

2.1 Решение задач.

2.2 Лабораторные работы.

Задачи

1. Через какие интермедиаты в ЦТК вступает тирозин?

а) оксалоацетат; б) малат; в) фумарат; г) α -кетоглутарат; д) ацетилкоэнзим А.

2. К гликогенным аминокислотам относятся:

а) гис; б) мет; в) сер; г) лей; д) трп?

3.Для каких аминокислот характерны реакции гидроксилирования?

а) лиз; б) тир; в) гли; г) тре; д) про.

4. Виды декарбоксилирования:

а) альфа; б) бета; в) гамма; г) лямбда; д) омега?

5. Коферментами прямого окислительного дезаминирования являются:

а) FAD; б) NAD⁺; в) NADP⁺; г) коэнзим Q; д) коэнзим А?

6. Какая аминокислота подвергается преимущественно внутримолекулярному дезаминированию?

а) ала; б) вал; в) тир; г) гис; д) орн.

7. В каких превращениях происходит образование аммиака в клетках?

а) H₂ + N₂ =; б) глу → α -кетоглутарат; в) глу → глн; г) глн → глу; д) АМФ → ИМФ.

8. Ферменты каких классов принимают участие в ЦСМ?

а) оксидоредуктазы; б) трансферазы; в) гидролазы; г) лиазы; д) изомеразы.

9. Атомы азота мочевины происходят из:

а) аммиака и аспартата; б) аммиака и аспарагина; в) аммиака и глутамата; г) глутамата и глутамина; д) глутамина и аспарагина?

10. Какие энзимопатии сопровождаются гипераммонемией?

а) цитруллинемия; б) гистидинемия; в) арининосукцинатурия; г) дефект карбамоилфосфатсинтетазы I; д) фруктозурия.

Лабораторная работа № 1. Количественное определение концентрации мочевины в сыворотке крови уреазным фенол/гипохлоритным методом.

Принцип метода. Мочевина под действием уреазы гидролизуется с обращением карбоната аммония. Ионы аммония реагируют в присутствии нитропруссида с фенолом и гипохлоритом, образуя окрашенный комплекс. Интенсивность окраски пропорциональна концентрации мочевины в пробе.

Ход работы. Осуществляется в соответствии с таблицей 1.

Таблица 1

РЕАКТИВЫ	Опытная проба, мл	Калибровочная проба, мл
Рабочий реагент	1, 0	1, 0
Калибратор	-	0, 01
Сыворотка крови	0, 01	-

Реакционную смесь тщательно перемешивают и инкубируют не менее 5 минут при комнатной температуре (не ниже 20°C). После окончания инкубации во обе пробы вносят по 1 мл гипохлорита, инкубируют в термостате при 37°С в течение 15 минут; затем пробы охлаждают до комнатной температуры и измеряют оптическую плотность опытной и калибровочной проб против дистилированной воды в кюветах с длиной оптического пути 5 мм при длине волны 540 нм на фотоколориметре.

Примечание: Окраска проб стабильна в течение 5 - 8 часов.

Расчет концентрации мочевины в сыворотке крови проводят по формуле:

С = Е_оп/ Е_кал • 30 [мг/100мл]

или

C = Е_оп/ Е_кал • 5, 0 [ммоль/л]

где: E_оп. – экстинкция опытной пробы;

E_кал. – экстинкции калибровочной пробы.

Норма. 10-50 мг/100 мл (1, 7-8, 3 ммоль/л)

Клинико-диагностическое значение. На долю мочевины приходится половина остаточного азота крови, именно та часть, которая в наибольшей степени задерживается в крови при нарушении функции почек. При патологии почек уровень мочевины в крови нарастает гораздо быстрее, чем остальных компонентов остаточного азота. К тому же определение уровня мочевины в крови технически проще осуществимо, чем остаточного азота. В связи с этим уровень ее в крови, прежде всего, характеризует экскреторную функцию почек.

Повышение содержания мочевины в крови отмечается у больных с другими патологическими состояниями – рефлекторной анурией, обструкцией (камни и злокачественные новообразования) в мочевыводящих путях, усиленным распадом белка (острая желтая атрофия печени, тяжелые инфекционные заболевания, обширные травмы и др.).

Верхняя граница содержания мочевины в сыворотке крови зависит от характера питания. При приеме белков в сутки свыше 2, 5 г/кг веса уровень мочевины может возрастать до 10 ммоль/л.

Снижение уровня мочевины в крови наблюдается редко и отмечается обычно при дефиците белка в рационе. При беременности также возможно снижение концентрации мочевины в крови ниже 3, 33 ммоль/л.

Выводы. Записать полученный результат и дать его клинико-диагностическую оценку.

Лабораторная работа № 2. Количественное определение мочевины в сыворотке крови и в моче диацетилмонооксимным методом

Принцип метода. Мочевина образует с диацетилмонооксимом в сильнокислой среде в присутствии тиосемикарбазида и ионов трехвалентного железа комплекс красного цвета, интенсивность окраски которого пропорциональна содержанию мочевины.

Меры предосторожности по ходу работы. Обращаться с осторожностью, т. к. реактив 2 содержит ядовитое вещество тиосемикарбазид, а в рабочем растворе содержится серная кислота.

Примечание: в настоящее время данный метод, как более токсичный и опасный, вытесняется уреазным фенол/гипохлоритным методом.

Ход работы. Осуществляется в соответствии с таблицей 1.

Таблица 1

Реагент	Проба	Эталон	Контр. раствор
Сыворотка или разведенная моча	0, 01	-	-
Реактив 1	-	0, 01	-
Дистиллированная вода	-	-	0, 01
Реактив 2	2, 0	2, 0	2, 0

В пробирку отмеривают 0, 01 мл сыворотки крови или разведенной мочи, добавляют 2 мл рабочего раствора (реактива 2), содержащего смесь раствор диацетилмонооксима, тиосемикарбазида и хлорида железа в кислой среде.

Эталонную пробу обрабатывают точно так же, используя вместо 0, 01 мл сыворотки крови 0, 01 мл эталонного раствора мочевины (реактива 1).

Содержимое пробирок тщательно перемешивают, пробирки закрывают алюминиевой фольгой и помещают точно (! ) на 10 мин в кипящую баню.

Затем пробирки быстро охлаждают в токе холодной воды и не позднее (! ) 15 мин после охлаждения, измеряют оптическую плотность пробы (A₁) и эталона (A₂) против контрольного раствора (реактив 2) в кювете 10 мм при длине волны 490–540 нм (зеленый светофильтр).

Мочу перед анализом разводят дистиллированной водой в соотношении 1: 100, а результат умножается на коэффициент разведения.

Расчет:

[Мочевина] = 16, 65(А₁/А₂)(моль/л).

Норма. 2, 5–8, 3 ммоль/л.

Выводы. Записать полученный результат и дать его клинико-диагностическую оценку.

Предупреждение. При содержании мочевины в пробе свыше 23 ммоль/л пробу следует развести дистиллированной водой, анализ провести повторно, а полученный результат умножить на коэффициент разведения.

При определении мочевины в гемолитических или липемических сыворотках пробу необходимо депротеинировать 5 %-ным раствором ТХУ. Для этого в пробирке смешивают 0, 1 мл пробы с 1 мл раствора ТХУ и центрифугируют. Точно так же разбавляют и эталонный раствор мочевины. Для собственно анализа отмеривают 0, 1 мл надосадочной жидкости. Далее определение проводят как при анализе без депротеинирования. Таким же способом можно анализировать цельную кровь.

Рекомендуемая литература

Основная

1 Кухта, В.К и др. Биологическая химия: учебник / В.К. Кухта, Т.С. Морозкина, Э.И. Олецкий, А.Д. Таганович; под ред. А.Д. Тагановича. – Минск: Асар, М.: Издательство БИНОМ, 2008. – С. 277-287.

2 Биохимия: Учебник для вузов / Под ред. Е.С. Северина. – 4-е изд., испр. – М.: ГЭОТАР-Медиа, 2006. – С. 469-491.

3 Филиппович, Ю. Б. Основы биохимии. – 4-е изд. – М.: Агар, 1999. – С. 265-278

4 Николаев, А.Я. Биологическая химия. М.: Медицинское информационное агентство, 2004. – С. 335-351.

5 Марри Р. и др. Биохимия человека: в 2-х т.: Пер. с англ., М.: Мир, 2004. – Т.1: С. 306-316.

6 Березов, Т. Т. Биологическая химия / Т.Т. Березов, Б.Ф. Коровкин. – М.: Медицина, 1998. – С. 428–451.

Дополнительная

7 Ленинджер А. Основы биохимии. М.: Мир, 1985. Т. 2. С. 571–599.

Занятие 21

Белки-3. Особенности обмена отдельных
аминокислот в норме и при патологии

Цель занятия: сформировать представления об особенностях обмена отдельных аминокислот (АК) в норме и при патологии. Дать биохимическое обоснование практического применения аминокислот в медицине. Освоить методику определения активности трансаминаз в сыворотке крови.

⇐ Предыдущая 1 234 5 6 7 8 Следующая ⇒