Методы выявления капсул, жгутиков, спор

Для выявления некоторых бактерий и отдельных структур клеток применяют специальные методы окраски.

Окраска кислотоустойчивых бактерий по методу Циля-Нильсена:

1. На фиксированный мазок наносят карболовый раствор фуксина через полоску фильтровальной бумаги и подогревают до появления паров в течение 3-5 минут.

2. Снимают бумагу, промывают мазок водой.

3. На мазок наносят 5% раствор серной кислоты или 3% раствор солянокислого спирта на 1-2 минуты для обесцвечивания.

4. Промывают водой.

5. Докрашивают мазок водным раствором метиленового синего в течение 3-5 минут.

6. Промывают водой, высушивают и микроскопируют.

Выявление капсулы по методу Гинса:

1. На предметное стекло наносят каплю туши, а рядом – каплю исследуемого материала. Обе капли тщательно перемешивают и с помощью шлифованного стекла готовят мазок.

2. Мазок высушивают на воздухе и фиксируют на пламени горелки.

3. Мазок окрашивают фуксином в разведении 1: 3 или сафранином. При этом бактерии окрашиваются в красный цвет, капсулы остаются неокрашенными и выделяются на темном фоне препарата.

Окраска жгутиков по Леффлеру:

1. Взвесь бактерий переносят в каплю воды, не перемешивают и высушивают.

2. Обрабатывают препарат 15-20 минут протравой (1 мл насыщенного спиртового раствора фуксина + смесь из 10 мл 25% водного раствора танина с 5 мл насыщенного водного раствора сернокислого железа).

3. Тщательно промывают водой и высушивают на воздухе.

4. Докрашивают фуксином Циля в течение 3-4 минут при легком подогревании.

5. Промывают водой, высушивают, микроскопируют.

Окраска спор по методу Ожешки:

1. На нефиксированный мазок наносят 0, 5% раствор хлористоводородной кислоты и подогревают на пламени горелки в течение 2-3 минут.

2. Кислоту сливают, препарат промывают водой, просушивают и фиксируют над пламенем горелки.

3. Окрашивают препарат по Цилю-Нильсену. Споры бактерий при этом приобретают красный цвет, а вегетативные формы – синий.

Изучение микробов в живом состоянии

Клетки микроорганизмов в живом состоянии изучают методом раздавленной капли и методом висячей капли.

Метод раздавленной капли. На поверхность обезжиренного предметного стекла наносят каплю исследуемого материала или суспензию бактерий и покрывают ее покровным стеклом. Капля должна быть небольшой, не выходящей за края покровного стекла. Микроскопируют препарат с объективом х40. Метод раздавленной капли удобен для исследования подвижности бактериальных клеток, а также для изучения крупных микроорганизмов - плесневых грибов, дрожжей.

Метод висячей капли. Препарат готовят на покровном стекле, в центр которого наносят каплю бактериальной суспензии. Затем предметное стекло с лункой, края которого предварительно смазывают вазелином, прижимают к покровному стеклу так, чтобы капля находилась в центре лунки. Препарат переворачивают покровным стеклом вверх. В правильно приготовленном препарате капля должна свободно висеть над лункой, не касаясь ее дна или края. Для микроскопии используют вначале малый сухой объектив х8, под увеличением которого находят края капли, а затем устанавливают объектив х40 и исследуют препарат.

Контрольные вопросы по теме занятия:

1. Основные структурные элементы бактериальной клетки, их функции.

2. Особенности строения клеточной стенки. Строение клеточной стенки грамположительных и грамотрицательных бактерий.

3. Спорообразование у бактерий.

4. Включения в цитоплазму бактериальной клетки.

5. Простые методы окраски микробов.

6. Сложные методы окраски микробов (методы Грама, Циля-Нильсена, Бурри-Гинса, Ожешко). Методы обнаружения капсул, жгутиков, спор бактерий.

7. Сущность окраски микробов по Граму.

8. Техника приготовления мазков на предметных стеклах. Техника приготовления двух и более мазков на одном стекле.

9. Техника окраски микробов по Граму. Распределение микроорганизмов в зависимости от окраски по Граму.

10. Методы изучения микробов в живом состоянии.

Литература для подготовки к занятию:

Основная литература:

1. Медицинская микробиология, вирусология и иммунология. Под ред. А.А. Воробьева. М., 2004.

Дополнительная литература:

1. Л.Б. Борисов. Медицинская микробиология, вирусология, иммунология. М., 2002.

2. О.К. Поздеев. Медицинская микробиология. М., ГЭОТАР-МЕДИА, 2005.

Ультраструктура бактериальной клетки

1. Нуклеоид – генетический аппарат бактерий. Содержит ДНК, РНК, белки (отсутствуют мембрана, гистоны, не делится митозом).

2. Цитоплазма - коллоидный раствор белков, углеводов, липидов, минеральных веществ (цитозоль), в котором находятся структурные элементы (рибосомы, нуклеоид, включения, плазмиды):

- рибосомы – место синтеза белка;

- плазмиды – автономная молекула ДНК с дополнительной генетической информацией (способность к конъюгации, резистентность к лекарственным препаратам, синтез токсинов и др.);

- включения (волютин, гликоген, крахмал, сера) – запас питательных веществ.

3. Цитоплазматическая мембрана – трехслойная мембрана (два слоя фосфолипидов и слой белка); функция - транспорт питательных веществ.

4. Мезосомы – производные (впячивания) цитоплазматической мембраны (ламинарные, везикулярные, трубчатые); функция – участие в делении клетки и в секреции веществ.

5. Клеточная стенка – структура, придающая бактериям постоянную определенную форму. Основа – пептидогликан (параллельно расположенные поперечные молекулы гликана, соединенные тетрапептидом). У грамположительных бактерий пептидогликан многослойный, прошит тейхоевой и липотейхоевой кислотами. У грамотрицательных бактерий пептидогликан однослойный, связан с помощью липопротеина с наружной мембраной, состоящей из липополисахаридов, фосфолипидов и белков.

6. Жгутики – тонкие нити, берущие начало от цитоплазматической мембраны, аппарат передвижения: монотрихи, амфитрихи, лофотрихи, перитрихи (аэротаксис, фототаксис). Состав – белок флагеллин (Н-антиген). Обнаруживаются при окраске по Леффлеру.

7. Пили (ворсинки, фимбрии) – нитевидные образования, берущие начало от поверхности клетки:

- пили первого типа – общие пили (100-200), адгезивные;

- пили второго типа – конъюгативные (половые) пили (1-4).

Состав – белок пилин.

8. Капсула (макрокапсула, слизистый чехол, микрокапсула). Химическое строение – полисахарид. Образуется главным образом в макроорганизме. Защищает бактерии от факторов макроорганизма. Определяет типоспецифичность бактерий. Обнаруживается при окраске по Бурри-Гинсу.

9. Спора – форма сохранения вида в неблагоприятных условиях. Не является способом размножения. Место расположения в клетке – центральное, субтерминальное, терминальное. Обнаруживаются при окраске по методу Ожешки (Цилю-Нильсену).

ЗАНЯТИЕ 3

ТЕМА ЗАНЯТИЯ: Действие физических и химических факторов на микроорганизмы. Стерилизация. Методы стерилизации. Дезинфекция. Основные группы дезинфицирующих и антисептических веществ, механизм их антибактериального действия. Физиология бактерий. Питание микроорганизмов. Питательные среды, их классификация. Техника посева в жидкие и на плотные питательные среды. Бактериологический метод (первый этап).

УЧЕБНАЯ ЦЕЛЬ ЗАНЯТИЯ: Изучить действие физических и химических факторов на микроорганизмы. Ознакомиться с методами стерилизации и дезинфекции. Познакомиться с основными группами дезинфицирующих и антисептических веществ, механизмами их антибактериального действия. Познакомиться с понятием “физиология бактерий”, типами питания микроорганизмов, классификацией питательных сред. Освоить технику посева бактерий в жидкие и на плотные питательные среды.

ЗАДАЧИ ЗАНЯТИЯ:

1. Изучить действие физических и химических факторов на микроорганизмы.

2. Ознакомиться с методами стерилизации и дезинфекции.

3. Изучить основные группы дезинфицирующих и антисептических веществ, механизмы их антибактериального действия.

4. Познакомиться с типами питания микроорганизмов и с классификацией питательных сред.

5. Освоить технику посева бактерий в жидкие и на плотные питательные среды.

⇐ Предыдущая 1 234 5 6 7 8 9 10 Следующая ⇒