ПМ. 03 Проведение лабораторных биохимических исследований

Стр 1 из 7Следующая ⇒

ПМ. 03 Проведение лабораторных биохимических исследований

МДК 03.01 Теория и практика лабораторных

Биохимических исследований

ИСПОЛНИТЕЛЬСКИЙ БЛОК

Раздел 5. Проведение лабораторных биохимических исследований

По определению показателей белкового обмена

Для специальности 060604 Лабораторная диагностика

СПО базовой подготовки

очная форма обучения

Екатеринбург, 2015

Одобрено на заседании кафедры Лабораторная диагностика Протокол № 6 от «04»июня 2015 г. Заведующий кафедрой _____________ /В.В.Алтухов/	Составлена в соответствии с ФГОС по специальности 060604 Лабораторная диагностика УТВЕРЖДАЮ Зам. директора по НМР ____________/О.В.Ледянкина /
Согласовано на заседании ЦМС Протокол № 11 от «26» июня 2013 г.

Составители:

Попова Н.И., преподаватель высшей квалификационной категории ГБОУ СПО «Свердловский областной медицинский колледж», Антропова К.А., преподаватель первой квалификационной категории ГБОУ СПО «Свердловский областной медицинский колледж».

Содержание:

Введение……………………………………………………………….4

Занятие № 1.

Тема: Определение общего белка сыворотки крови биуретовым методом. Определение альбуминов …………………………………7

Занятие № 2.

Тема: Построение калибровочного графика для определения общего белка…………………………………………………………………..16

Занятие № 3.

Тема: Определение мочевины в сыворотке крови…………………21

Занятие № 4.

Тема: Определение креатинина в биологических жидкостях. «Клиренс эндогенного креатинина»………………………………..25

Занятие № 5.

Тема: Определение белковых фракций методом электрофореза….31

Занятие № 6.

Тема: Определение билирубина и его фракций по методу Иендрашика…………………………………………………………...38

Занятие № 7.

Тема: Коллоидные пробы печени……………………………………43

Занятие № 8.

Тема: Определение мочевой кислоты в сыворотке крови………….48

Занятие № 9.

Тема: Определение молекул средней массы……………………….56

Приложение.

Методы исследования белкового обмена…………………………...62

Литература…………………………………………………………....86

Введение.

Основная цель предлагаемого Вашему вниманию исполнительского блока – это организация самостоятельной работы при подготовке к практическим занятиям.

Междисциплинарный курс МДК. 03.01. Теория и практика лабораторных биохимических исследований входит в состав профессионального модуля ПМ.03. Проведение лабораторных биохимических исследований и изучается студентами специальности 060604 Лабораторная диагностика в течение четырех семестров на 1, 2, 3 году обучения.

Распределение часов по семестрам

Семестр
Теория Практика Всего

После окончания четвертого семестра проводится экзамен в качестве промежуточной аттестации; после пятого семестра – экзамен квалификационный, после шестого – выносится на Государственную итоговую аттестацию.

Во время изучения МДК.03.01. Теория и практика лабораторных биохимических исследований, студенты должны овладеть следующими компетенциями

профессиональные компетенции:

ПК 3.1. Готовить рабочее место для проведения лабораторных биохимических исследований.

ПК 3.2. Проводить лабораторные биохимические исследования биологических материалов; участвовать в контроле качества.

ПК 3.3. Регистрировать полученные результаты лабораторных биохимических исследований.

ПК 3.4. Проводить утилизацию отработанного материала, дезинфекцию и стерилизацию использованной лабораторной посуды, инструментария, средств защиты.

общие компетенции:

ОК 1. Понимать сущность и социальную. Значимость своей будущей профессии, проявлять к ней устойчивый интерес

ОК 2. Организовывать собственную деятельность, выбирать типовые методы и способы выполнения профессиональных задач, оценивать их эффективность и качество

ОК 3. Принимать решения в стандартных и нестандартных ситуациях и нести за них ответственность

ОК 4. Осуществлять поиск и использование информации, необходимой для эффективного выполнения профессиональных задач, профессионального и личностного развития

ОК 5. Использовать информационно-коммуникационные технологии в профессиональной деятельности

ОК 6. Работать в коллективе и команде, эффективно общаться с коллегами, руководством, пациентами

ОК 7. Брать ответственность за работу членов команды (подчиненных), за результат выполнения заданий

ОК 8. Самостоятельно определять задачи профессионального и личностного развития, заниматься самообразованием, осознанно планировать повышение квалификации

ОК 9. Ориентироваться в условиях смены технологий в профессиональной деятельности

ОК 10. Бережно относиться к историческому наследию и культурным традициям народа, уважать социальные, культурные и религиозные различия

ОК 11. Быть готовым брать на себя нравственные обязанности по отношению к природе, обществу и человеку

ОК 12. Оказывать первую медицинскую помощь при неотложных состояниях

ОК 13. Организовывать рабочее место с соблюдением требований охраны труда, производственной санитарии, инфекционной и противопожарной безопасности

Данный исполнительский блок предназначен для студентов I курса (2 семестр). Задача данного курса – это подготовка студента к самостоятельной работе в клинико-диагностических лабораториях лечебно-профилактических учреждений.

Рекомендации к изучению МДК.03.01. Теория и практика лабораторных биохимических исследований.

· Подготовку к практическому занятию необходимо начинать с ознакомления с учебной целью занятия. Формулировки целей занятия включают теоретические положения и практические навыки, которые должны быть усвоены в ходе подготовки к занятию и на практическом занятии.

· После изучения рекомендованной литературы необходимо использовать контрольные вопросы для самоподготовки.

· Обязательно выполнение всех заданий, приведенных к занятию по каждой теме; заполнение таблиц, ответы на поставленные вопросы, решение ситуационных задач и т.д. Основная цель выполнения заданий – это обобщение и систематизация полученных знаний, и подготовка к освоению новых умений и навыков на практическом занятии.

Оценка за работу на практическом занятии складывается из оценкиследующих видов работы:

· Организация рабочего места;

· Наличие и правильность записей по самоподготовке в рабочей тетради;

· Выполнение вводного тестового контроля;

· Ответы на занятии: степень подготовленности, активность при обсуждении и правильность ответов.

· Выполнение самостоятельной работы: соблюдение правил по ТБ и ТЛР, выполнение исследования в соответствии с рекомендованным алгоритмом; правильность выполнения анализа и выполнение отчета о проделанной работе.

На практических занятиях студенты должны иметь лекционную тетрадь и дневник для практических занятий. Кроме того, должны быть ручки с пастой синего и красного цвета, карандаш, линейка и калькулятор.

Требования к студентам при изучении предмета МДК.03.01. Теория и практика лабораторных биохимических исследований.

· Посещение лекций и практических занятий обязательное. Единственный документ, освобождающий студентов от занятий – это медицинская справка об освобождении от занятий.

· Если по какой-либо причине студенту нужно отсутствовать на занятии, необходимо заранее написать заявление и подать его заведующей отделением.

· В любом случае, после пропуска занятия его необходимо отработать в течение 10 дней с момента выхода на занятие. Пропущенные занятия могут быть отработаны студентом в свободное от работы время с другой бригадой, индивидуально по договоренности с преподавателем или во время проведения дополнительных занятий. Студенты, пропустившие более 50% практических занятий, не аттестуются по предмету и не допускаются к сессии.

· При посещении лекций и практических занятий студенты должны быть в халате и сменной обуви. На практических занятиях должны быть надеты колпаки или косынки; волосы должны быть убраны под головной убор.

Желаем успехов в изучении биохимии!

Занятие № 1.

Задания к занятию № 1

ХИМИЯ БЕЛКОВ.

1. Заполните таблицу .

Занятие № 2.

Тема: Построение калибровочного графика для определения общего белка.

Цель самоподготовки: после изучения данной темы Вы должны

Иметь практический опыт:

· определять показатели белкового обмена

Знать:

· пути превращения аминокислот в организме;

· биологическое значение процессов дезаминирования, переаминирования и декарбоксилирования;

· обмен отдельных аминокислот;

· биосинтез белка;

· белки сыворотки крови, состав фракций, роль в метаболизме.

Уметь:

· провести разведение стандартного 10 % раствора альбумина;

· определить содержание белка в различных разведениях;

· построить калибровочный график.

Литература для самоподготовки:

1. М.В. Ермолаев, Л.П. Ильичева, «Биологическая химия», М., Медицина, 1989г.

2. Л.М. Пустовалова, «Основы биохимии», Ростов-на-Дону, «Феникс», 2003г.

3. Лекции по разделу 5. Проведение лабораторных биохимических исследований по определению показателей белкового обмена.

4. Информационный блок по разделу 5. Проведение лабораторных биохимических исследований по определению показателей белкового обмена.

План изучения темы:

1. Изучите теоретический материал по теме занятия по учебнику и лекции.

2. Повторите принцип построения калибровочных графиков (ФХМА и ТЛР).

3. Изучите методику проведения калибровки для определения общего белка сыворотки крови биуретовым методом (Приложение).

4. Выполните прилагаемые задания по теме занятия.

5. Ответьте на контрольные вопросы.

6. Приготовьте лист миллиметровой бумаги для построения калибровочного графика.

Задания к занятию № 2

1. Составьте схему возможных путей использования аминокислот в организме.

Аминокислоты

2. Изучите процесс синтеза белка в клетке по учебнику и конспекту лекций. Заполните таблицу, опишите особенности каждого этапа синтеза белка.

№ п/п	Название этапа	Локализация в клетке	Особенности каждого этапа
I
II
III

3. Выберите схему, соответствующую тому или иному процессу деградации аминокислот

А. Дезаминирование

Б. Переаминирование

В. Непрямое дезаминирование

Г. Декарбоксилирование

Аминокислота –СО2 биогенный амин.

Аминокислота1 + кетокислота2 кетокислота1+ аминокислота2

Аминокислота1 + α КГ кетокислота1 + глутаминовая кислота

–NH3

глутаминовая кислота альфа-кетоглутаровая кислота (α -КГ)

–NH3

Аминокислота кетокислота

4. В чем суть процесса дезаминирования? _____________________

________________________________________________________

5. Какие ферменты катализируют процесс переаминирования? ________________________________________________________

________________________________________________________

6. В чем заключается клиническое значение процесса переаминирования? _______________________________________

________________________________________________________

7. В результате какого процесса в организме образуется гистамин? К какой группе веществ относится гистамин и его биологическое значение? _______________________________________________

________________________________________________________

________________________________________________________________________________________________________________

8. Заполните нижеприведенную таблицу.

Занятие № 3.

Задания к занятию № 3

1. Перечислите конечные продукты распада аминокислот в организме: ______________________________________________

________________________________________________________

2. Заполните пропущенные вещества в схеме синтеза мочевины

NH3 + CO2 NH3 + α -кетоглутаровая кислота

………….……. …………..…..

………….……. ………..…….

Аргинин

………………..

3. Дайте определение понятию «остаточный азот»:

________________________________________________________

4. Перечислите компоненты остаточного азота:

________________________________________________________

5. Нарисуйте схему видов азотемий и приведите примеры заболеваний или состояний, при которых они наблюдаются:

Азотемия

…………. ……………..

………….. ………… …………

……………

..………… ……………

……………. …………… ….………..

…………… …….……..

…………….…………..

6. Закончите предложения:

Мочевина – это продукт обезвреживания …….. Синтез ее происходит в …………………….. Содержание мочевины в крови здорового человека зависит преимущественно от ……………………….. Клиническое значение имеет, в основном, повышение мочевины, которое наблюдается при ……………………….. и связано с ……….……………. Снижение мочевины в крови обычно встречается при ………………………, так как ……………………………………………………………….

В норме доля мочевины в остаточном азоте составляет примерно ……………… %. При заболевании печени происходит ее ……………., а при заболеваниях почек ……………….

7. Какие существуют методы определения мочевины?

________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

8. Почему неграмотно рассчитывать остаточный азот по содержанию мочевины?

________________________________________________________________________________________________________________

9. Задача № 1.

У больного содержание мочевины в сыворотке 1, 9 ммоль/л. Оцените полученный показатель. При поражении какого органа возможно данное изменение и возможный механизм его.

________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

10. Задача № 2.

Молодой человек получил множественные травмы в дорожно-транспортном происшествии. Ему были произведены переливание крови и хирургическая операция. За сутки с момента госпитализации он выделил только 500 мл мочи. У пациента наблюдались признаки обезвоживания. При исследовании сыворотки крови:

мочевина = 21, 0 ммоль/л

креатинин = 140 мкмоль/л

Сравните полученные данные с нормой. Объясните механизм возможных нарушений

________________________________________________________________________________________________________________

Контрольные вопросы к занятию № 3

1. Конечные продукты распада аминокислот.

2. Пути обезвреживания аммиака в организме.

3. Синтез мочевины.

4. Определение понятия «остаточный азот». Компоненты остаточного азота.

5. Азотемия: виды ее и характеристика.

6. Определение мочевины в сыворотке крови с диацетилмонооксимом и уреазным методом: принцип методов, ход определения, расчет результатов.

7. Клинико-диагностическое значение определения мочевины.

8. Гипераммониемия.

9. Специфические пути обмена отдельных аминокислот.

Занятие № 4.

Задания к занятию № 4

1. Впишите пропущенные слова в следующий текст:

Синтез креатина происходит в ……………….., кроме того, другим его источником может быть и ………….………. Далее креатин поступает в кровь и транспортируется в ……………………….... Там он соединяется с …………………., превращается в ……………………… и используется для …………………………..……. В виде …………..…… происходит его выведение в кровь и через почки выводится из организма с мочой.

2. Заполните предлагаемую таблицу:

Показатель	Где образуется показатель	В каких биол. жидкос-тях опреде-ляется	Норм. значение показателя в сыворотке крови	При патологии каких органов имеет диагностическое значение
Креатин
Креатинин

3. Каким методом проводят определение креатинина: название метода, принцип метода, особенности методики для разных биологических жидкостей

________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

4. Назовите источники ошибок при определении креатинина

5. Раскройте метаболизм и клинико-диагностическое значение определения мочевой кислоты:

a) где образуется - ……………………………………………...............

b) при распаде каких веществ - ……………………………………….

c) в каких биологических жидкостях определяется - ……………….

…………………………………………………………………………

d) нормальные величины - …………………………………………….

e) как называется повышение концентрации мочевой кислоты? ……………………………………………………………………..….

f) при каких патологических процессах возможно повышение мочевой кислоты и почему?

1) ……………………………………………………………….................

………………………………………………………………….................

2) ………………………………………………………………................

………………………………………………………………….................

3) ………………………………………………………………................

………………………………………………………………….................

6. Какими методами определяют мочевую кислоту в сыворотке крови?

1) ……………………………………………………………….................

2) ……………………………………………………………….................

3) ……………………………………………………………….................

4) ……………………………………………………………….................

7. Заполните недостающие слова в тексте (метаболизм индикана):

При гниении аминокислоты ……………………… происходит образование …………..……. ………..………… поступает в кровь и с током крови поступает в …………..……. Там происходит его обезвреживание за счет …………………………….…. и образуется ………….………, который выводится из организма.

8. Составьте сравнительную таблицу по компонентам остаточного азота.

Компонент остаточного азота	Где образуется	Из чего образуется	Где определяется	Нормальные величины в крови
1.
2.
3.
4.
5.

9. Укажите состояния, для которых характерен тот или иной вид азотемии:

А. относительная азотемия	1. краш-синдром
Б. внепочечная ретенционная азотемия	2. ОПН
В. почечная ретенционная азотемия	3. ХПН
Г. продукционная азотемия	4. распад опухоли
	5. неукротимая рвота
	6. профузный понос
	7. мочекаменная болезнь
	8. сужение почечной артерии

10. Задача № 1.

Мужчина 56 лет обратился к врачу с жалобами на снижение массы тела, общую слабость и апатию на протяжении последних 6 месяцев. Все это время мочевыделение у него было более обильным, чем обычно, особенно по ночам. В моче обнаруживался белок, но не было глюкозы. Для анализа была взята проба крови:

мочевина – 43 ммоль/л

креатинин – 640 мкмоль/л

общий белок – 41 г/л

альбумин – 28 г/л

Оцените полученные данные. Объясните, с поражением какого органа могут быть связаны данные изменения и их механизм?

____________________________________________________________________________________________________________________

11. Задача № 2.

При плановом обследовании спортсменов у пациента были получены следующие данные исследования сыворотки крови:

общий белок – 71 г/л

альбумин – 45 г/л

мочевина – 7, 9 ммоль/л

креатинин – 120 мкмоль/л

Накануне исследования молодой человек интенсивно тренировался.

Оцените полученные данные. Есть ли необходимость в дальнейшем обследовании? Ответ поясните.

________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Контрольные вопросы к занятию № 4

1. Креатин и креатинин: биологическое значение и метаболизм.

2. Клинико-диагностическое значение определения креатина и креатинина в сыворотке крови и моче.

3. Методики определения креатинина по цветной реакции Яффе с депротеинированием и без депротеинирования: принцип метода, ход определения, расчет результатов.

4. Метаболизм мочевой кислоты и клинико-диагностическое значение ее определения.

5. Метаболизм индикана и клинико-диагностическое значение его определения.

6. Роль печени в белковом обмене.

7. Патология обмена белков: белковое голодание, квашиоркор.

8. Аминоацидурии.

9. Наследственно обусловленные нарушения обмена отдельных аминокислот.

Занятие № 5.

Задания к занятию № 5

1. Составьте сводную таблицу по методикам исследования белкового обмена.

Название показателя	Методы определе-ния	Принцип метода	Условия колоримет-рирования	Нормаль-ные величины	Клинико-диагнос-тическое значение

Сводную таблицу лучше начать делать в отдельной ученической тетради на развернутом листе с тем, чтобы далее продолжить внесение показателей по другим видам обмена. В графе «Условия колориметрирования» укажите окраску, развивающуюся в процессе цветной реакции (цветной квадрат). В графе «Нормальные величины» - коэффициент пересчета в другие единицы измерения.

2. Вспомните факторы, влияющие на определение общего белка сыворотки крови биуретовым методом:

________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

3. Укажите патологические состояния, соответствующие гипер- и гипопротеинемии:

А. гиперпротеинемия	1. нефротический синдром
Б. гипопротеинемия	2. миеломная болезнь
	3. заболевания желудка и кишечника
	4. вирусный гепатит

4. Проведите анализ показателей содержания общего белка в сыворотке крови и укажите изменения по отношению к норме.

При обследовании пациентов получены следующие цифры содержания общего белка:

40 г/л –

94 г/л –

67 г/л –

102 г/л –

58 г/л –

5. Укажите значения нормальных величин в сыворотке крови для каждого показателя:

Показатель	Нормальные величины
общий белок
альбумин
мочевина
креатинин
индикан
мочевая кислота

6. Выберите реактивы, используемые для определения каждого показателя:

А. общий белок	1. пикриновая кислота
Б. альбумин	2. сульфат меди
В. мочевина	3. NaOH
Г. креатинин	4. ТXУ
Д. индикан	5. диацетилмонооксим
Е. Мочевая кислота	6. уреаза
	7. уриказа
	8. р-р Фолина
	9. H2SO4
	10. бромкрезоловый зеленый

7. Правильны ли нижеприведенные высказывания (после каждого предложения напишите «да», если согласны с высказыванием, или «нет», если высказывание неправильно):

Азотемия – это изменение компонентов остаточного азота в моче.

Большую часть остаточного азота составляет мочевина.

Относительная азотемия может наблюдаться при вливании большого количества жидкости.

Азотемия может подразделяться на продукционную и почечную.

Почечная азотемия наблюдается при нарушении выделительной функции почек при острой или хронической почечной недостаточности.

Продукционная азотемия может быть связана с усиленным распадом тканей, например, при краш-синдроме.

Какой вид азотемии не указан в тексте, его возможные причины?

________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

8. Изучите пробу клиренс эндогенного креатинина.

Какую функцию почек отражает проба? _____________________

________________________________________________________

Выпишите возможные варианты проведения пробы:

I вариант (с водной нагрузкой)	II вариант

Что такое клиренс? _______________________________________

________________________________________________________

Как подсчитывают КФ -?

________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

КР -?

________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Какие показатели нужно иметь для расчета пробы?

1. ________________________________________________________

2. ________________________________________________________

3. ________________________________________________________

Какие дополнительные показатели нужно иметь для более точной оценки клиренса?

________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

9. Объясните следующую запись:

Триптофан индол индикан

10. Прочитайте алгоритм определения биохимического показателя в сыворотке крови. Какой это показатель и какой методикой он определяется?

1) Вносят в химическую пробирку рабочий раствор, смешивая р-р реагента и раствор H2SO4 в соотношении 1: 1.

2) В опытную пробирку добавляют сыворотку крови, в стандарт – стандартный раствор данного вещества. Контролем служит контроль реактивов.

3) Выдерживают пробы 10 минут на кипящей водяной бане.

4) Охлаждают 2-3 минуты в струе холодной воды.

5) Колориметрируют.

6) Рассчитывают содержание вещества в пробе по концентрации стандартного раствора.

…………………………………………………………………………………………………………………………………………………………

11. Задача № 1

Подсчитайте клубочковую фильтрацию и канальцевую реабсорбцию по следующим данным, сделайте вывод.

Суточный диурез – 1600 мл

Креатинин сыворотки – 0, 084 ммоль/л

Креатинин мочи – 7, 6 ммоль/л

__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

12. Задача № 2

После проведения пробы «клиренс эндогенного креатинина» были получены следующие данные:

клубочковая фильтрация – 72 мл/мин

канальцевая реабсорбция – 95 %

Оцените данные, полученные у пациента. Что можно сказать о выделительной функции почек?

______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Контрольные вопросы к занятию № 5

1. Схема исследования белкового обмена.

2. Определение общего белка сыворотки крови биуретовым методом: принцип метода, нормальные показатели, клинико-диагностическое значение.

3. Принципы построения калибровочных графиков.

4. Построение калибровочного графика для определения общего белка биуретовым методом.

5. Определение альбумина в сыворотке крови: принцип метода, нормальные показатели, клинико-диагностическое значение.

6. Определение мочевины в биологических жидкостях: основные методы, принцип методов, особенности проведения методик, нормальные показатели, метаболизм мочевины, клинико-диагностическое значение определения.

7. Определение креатинина по цветной реакции Яффе: принцип метода, нормальные показатели, метаболизм креатинина, клинико-диагностическое значение определения. Источники ошибок при проведении методики.

8. Клиренс эндогенного креатинина.

9. Построение калибровочного графика для определения креатинина.

Занятие № 6.

Задания к занятию № 6

1. Дополните схему катаболизма гема:

Гемоглобин

О2 СО2

Вердоглобин

Биливердин

Билирубин ……………..

альбумин

кровь

Печень

Билирубин ……………..

Кишечник

Уробилиноиды

кал моча печень

……… …..…… ….…….

2. Проведите сравнительный анализ свойств непрямого и прямого билирубина:

	Непрямой билирубин	Прямой билирубин
1. Место образования
2. Токсичность
3. Отношение к солнечному свету
4. Растворимость в воде
5. Растворимость в липидах
6. Через почечный фильтр (проходит или нет)
7. Отношение к реакции с диазореактивом
8. Связывается в печени с
9. Нормальные показатели

3. Перечислите функции, выполняемые гепатоцитом по отношению к билирубину:

· ________________________________________________________

4. Ознакомьтесь с методикой определения билирубина по методу Иендрашика и выпишите особенности данной методики

5. Внимательно прочитайте текст. Отметьте неточности или ошибки в изложении:

Время жизни эритроцитов составляет – 110-120 дней. Состарившиеся эритроциты распадаются, преимущественно в кровеносном русле. Освобождающийся из гемоглобина гем повторно не используется: он распадается с образованием железа и желчных пигментов. Железо и желчные пигменты выводятся из организма.

12 3 4 5 6 7 Следующая ⇒