|
Архитектура Аудит Военная наука Иностранные языки Медицина Металлургия Метрология Образование Политология Производство Психология Стандартизация Технологии |
|
|
Архитектура Аудит Военная наука Иностранные языки Медицина Металлургия Метрология Образование Политология Производство Психология Стандартизация Технологии |
Выбор оптимального режима работы аппаратуры
По результатам проведенных исследований установлены оптимальные режимы функционирования оборудования. Взвешивание всех проб проводят на весах с точностью до 0, 0001 г. Отобранные навески переносят в автоклавы, добавляют10 см3 азотной кислоты – категории ОСЧ 27-5 ГОСТ 11125-84 и минерализуют с помощью системы микроволнового разложения.
Условия разложения: - HNO3 (70%); программа минерализации
После охлаждения полученных растворов в течении 30 минут отбирают аликвоты объемом 2 см3 в контейнеры из полиэтилена низкого давления и добавляют 10 см3 деионизованной воды. В качестве внутреннего стандарта в растворы вводят индий в концентрации 10 мкг/л Для контроля чистоты реактивов проводили контроль содержания элементов в растворе кислот – холостая проба. Полученные растворы анализируют с помощью масс-спектрометра с ионизацией в индуктивно связанной плазме. Пример. Условия анализа и рабочие параметры прибора Agilent 7500: - скорость потока плазменного газа 15, 0 л/мин; - скорость потока вспомогательного газа 1, 0 л/мин; - скорость потока газа-носителя 1, 22 л/мин; - мощность радиочастоты плазмы 1200Вт; - распылитель - PEEK, тип Babington; - камера распыления - стеклянная двойного прохождения, температура камеры распыления 2Со - инжектор горелки кварцевый; - скорость ввода образца 0, 5 см3/мин; - отбирающий конус и конус отражателя – материал никель; - количество точек на ед. массы 3. Расчёт, метрологическая характеристика и интерпретация результатов исследования Полученные данные обрабатываются программным обеспечением с расчетом концентрационных параметров, устанавливаемых в количественном методе. Полученные результаты являются количественной оценкой валового содержания элементов в пробе. Для вычисления количественных значений загрязнения наночастицами необходимо вычитание фоновых значений от заведомо чистой пробы. Суммарная погрешность метода не должна превышать 15% СКО. VIII. Порядок анализа углеродсодержащих наноматериалов (фуллерены) методом ВЭЖХ Требования к используемой аппаратуре Для проведения анализов углеродсодержащих наноматериалов (фуллеренов) рекомендуется использование системы высокоэффективной жидкостной хроматографии, снабженной колонкой размером 4, 6× 150 мм, заполненной С18 фазой с размером гранул 5мкм, насосом высокого давления, детектором с диодной матрицей, петлевым инжектором (или автосемплером), и системой обработки хроматограмм. Требования к вспомогательному оборудованию, помещениям, техническому оснащению Перечень вспомогательного оборудования: 1. Центрифуга для пробирок типа «Эппендорф» 1, 5-2 см3 со скоростью вращения до 3000 об/мин. 2. Встряхиватель вибрационный со скоростью вращения до 3000 об/мин. 3. Весы лабораторные общего назначения по ГОСТ 24104 с погрешностью ±0, 0001 г. 4. Колбы мерные К 1-25-1 или К 1-25-2, К 1-50-1 или К 1-50-2, К 1-100-1 или К 1-100-2 по ГОСТ 1770-74. 5. Пипетки 4-1-1 или 5-1-1, 4-1-2 или 5-1-2, 4-2-10 или 5-2-10, 4-2-5 или 5-2-5 по ГОСТ 29227-91. 6. Виалы (емкость вместимостью 4-6 см3 с герметично завинчивающейся крышкой) с пластиковыми вставками вместимостью 0, 2-0, 3 см3. 7. Одноразовые полипропиленовые микроцентрифужные пробирки с плотно закрывающимися крышками типа «Эппендорф» объемом 1, 5 см3. 8. Штативы микропробирок типа «Эппендорф» объемом 1, 5 см3. Требования к помещениям Помещение лаборатории должно соответствовать санитарным правилам проектирования, оборудования, эксплуатации и содержания производственных и лабораторных помещений, предназначенных для проведения работ с веществами 1-2 класса опасности, органическими растворителями. Аналитическая лаборатория должна быть оснащена вентиляционной системой согласно ГОСТ 12.4.021-75. Температура окружающего воздуха должна быть от 15 до 25°С. Относительная влажность воздуха не более 80% при 25°С. Напряжение электропитания 220±10 В. Частота переменного тока 50, 0±0, 2 Гц. Выброс воздуха из вытяжки должен быть выведен наружу и оборудован воздушным фильтром для улавливания наночастиц. Выбор оптимального режима работы аппаратуры Выбор оптимального режима работы аппаратуры должен соответствовать техническим характеристикам прибора, указанным в прилагаемой к нему документации и инструкциям. Хроматографическая колонка с силикагелем, химически связанным с октадецилсиланом (ODS или C18), размер частиц 5 мкм, длина колонки 150 мм, внутренний диаметр колонки 4, 6 мм или аналогичная. Подвижная фаза: ацетонитрил: толуол (45: 55, по объему). Скорость подачи подвижной фазы: 1, 0 см3/мин. Объем вводимой пробы от 1 до 100 мм3. Детектирование осуществляют при аналитической длине волны 340 нм (при использовании фотодиодноматричного детектора дополнительным подтверждением наличия фуллерена является совпадение УФ-спектра анализируемого вещества в диапазоне от 200 до 400 нм с УФ-спектром фуллерена). Расчёт, метрологическая характеристика и интерпретация результатов исследования Полученные данные обрабатываются программным обеспечением с расчетом концентрационных параметров, устанавливаемых в количественном методе. Результаты являются количественной оценкой содержания соответствующих фуллеренов в пробе. Содержание фуллеренов в образцах рассчитывают методом абсолютной калибровки. Стандартный график строят не менее чем по 5 точкам, рассчитывая его параметры по методу наименьших квадратов (линейная регрессия). Возможно использование встроенной программы обработки данных для построения стандартного графика. Вычисления проводят до третьей значащей цифры. За результат принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных измерений. Контроль качества определений проводят с периодичностью 1 раз в день с использованием метода добавок. Для этого к проанализированной пробе добавляют стандарт фуллерена в количестве 50-150% от открытого количества и анализируют повторно. Количество дополнительно открытого фуллерена в образце при этом должно составлять от 95 до 105% от расчётного добавленного количества. IX. Порядок анализа биогенных наноматериалов методами ПЦР, электрофореза и иммуноферментного анализа Требования к используемой аппаратуре Приборы, оборудование и средства измерения, используемые в работе лаборатории, должны быть технически исправны, иметь технический паспорт и рабочую инструкцию по эксплуатации. Средства измерения регулярно подвергают метрологическому контролю. Используемые приборы должны соответствовать нормам безопасности и электромагнитной совместимости. Требования к амплификаторам для проведения реакции ПЦР Комплект лабораторного оборудования определяют с учетом используемых наборов реагентов для выделения ПК, амплификации и детекции результатов исследований. Помещение для каждого этапа проведения ПЦР обеспечивают своим набором лабораторного оборудования. Для реализации метода применяются амплификаторы со следующими параметрами:
Требования к амплификаторам для проведения реакции ПЦР в реальном времени. Для постановки ПЦР в реальном времени требуется специальный амплификатор, отличительной особенностью которого является возможность возбуждать и детектировать флуоресценцию, отражающую накопление ампликонов, на каждом цикле амплификации. Для реализации метода применяются амплификаторы с компьютерным управлением со следующими параметрами:
Требования к фотометрическим счетчикам для проведения иммуноферментного анализа Для реализации метода иммуноферментного анализа используются 96-луночные планшетные фотометры (счетчики), включающие в комплект: - светофильтры для измерения OD 492 nm, 450nm, 540 nm, 405 nm, 595nm; - компьютерное или ручное программирование и возможность вывода данных на печать. Система программирования и вывода данных на печать может осуществляться как ручным вводом, так и компьютерным управлением. Предпочтительнее использовать приборы, отличающиеся возможностью постоянного автоматического использования введенных программ, позволяющие получать данные непосредственно в компьютерном виде, с возможностью последующей цифровой обработки результатов, графических построений и хранения данных.
Требования к вспомогательному оборудованию, помещениям, техническому оснащению Требования к вспомогательному оборудованию, помещениям, техническому оснащению для проведения анализа биогенных наноматериалов методом ПЦР Требования к вспомогательному оборудованию для проведения анализа биогенных наноматериалов методом ПЦР Перечень вспомогательного оборудования: Автоклав паровой настольный с горизонтальной загрузкой со следующими параметрами: - Стерилизующий агент - Перенасыщенный водяной пар - Каркас стерилизатора и внешние панели выполнены из нержавеющей стали - Материал стерилизационной камеры выполнен из нержавеющей стали - Материал корпуса двери выполнен из нержавеющей стали - Объем стерилизационной камеры не менее 20 литров - Автоматическая блокировка дверей во время выполнения программы - Визуальный контроль давления в камере, рубашке и парогенераторе - Блокировка выполнения программы при аварийных ситуациях и сигнализация аварийных ситуаций - Система управления полуавтоматическая Требования к приборам горизонтального электрофореза Приборы для горизонтального электрофореза должны бытьпредназначены для разделения биомолекул в агарозном геле под действием электрического поля, включая разделение продуктов ПЦР, и должны соответствовать следующим характеристикам: - Электрофоретическая камера должна быть изготовлена из электрохимически нейтрального материала (органического стекла) и снабжена двумя съемными электродами из электрохимически нейтрального сплава - Электронная схема отключения должна предусматривать автоматическое обесточивание камеры при снятии крышки.
Требования к ламинарным шкафам Ламинарный шкаф с вертикальным потоком воздуха должен соответствовать следующим характеристикам:
Требования к помещениям для проведения анализа биогенных наноматериалов методом ПЦР Внутреннюю отделку помещений выполняют в соответствии с их функциональным назначением. Поверхности стен, пола и потолка в лабораторных помещениях должны быть гладкими, без щелей, легко обрабатываемыми, устойчивыми к действию моющих и дезинфицирующих средств. Полы не должны быть скользкими. Помещение должно быть разделено на три зоны — по числу технологических операций:
Все три зоны должны быть изолированными комнатами, снабженными предбоксниками и оснащены устройствами фильтрации воздуха. Должны быть выделены отдельные помещения для переодевания и хранения верхней одежды, приема пищи, складское помещение для лабораторных материалов. Перемещение пробирок, штативов и пр. должно производиться только в одном направлении. При этом потоки не должны пересекаться. Материал, поступивший в лабораторию, должен быть как можно быстрее обработан в комнате пробоподготовки. В эту же комнату должны поступать пробирки с реакционной смесью, приготовленные в комнате подготовки реакционной смеси, для внесения в них подготовленных препаратов ДНК. Готовые пробирки помещают в амплификатор, а после термоциклирования, не открывая крышек, перемещают в комнату для электрофореза. Все операции (подготовка реакционной смеси, пробоподготовка, электрофорез) должны выполнять разные люди. Подготовку реакционной смеси следует проводить в ПЦР-боксе, снабженном электрическими розетками, лампами дневного и ультрафиолетового света. Требования к техническому оснащению помещений для проведения анализа биогенных наноматериалов методом ПЦР Помещения на всех этапах ПЦР-анализа оборудуют бактерицидными лампами в соответствии с " Методическими указаниями по применению бактерицидных ламп для обеззараживания воздуха и поверхностей в помещениях" N 11-16/03-06 от 28.02.95. Бактерицидные лампы в помещениях ПЦР-лаборатории устанавливают из расчета 2, 5 Вт/куб. м. Для обработки материала должны быть установлены ламинарные шкафы, обеспечивающие горизонтальный поток воздуха, а также возможность работы без ламинарного потока и длительную экспозицию облучения внутренних поверхностей ультрафиолетовым светом. Инактивацию биологического материала проводят в автоклаве в течение 1 часа при 1.5 атм. Допускается использование настольных автоклавов. Все производственные комнаты должны быть снабжены необходимым оборудованием и расходными материалами, в том числе халатами, закрепленными за соответствующими помещениями. Лабораторная мебель должна иметь покрытие, устойчивое к действию моющих и дезинфицирующих средств. Поверхность столов не должна иметь трещин и швов. Для проведения исследования используют приборы и расходные материалы (пробирки, наконечники к микродозаторам), исключающие возможность перекрестной контаминации исходного материала, выделенных НК и продуктов ПЦР. Для этого используют: - термостаты с твердотельным термоблоком; Для каждого этапа проведения ПЦР-исследований необходимо предусмотреть наличие холодильников: Обработку помещений проводят в соответствии с требованиями СП 1.2.731-99 " Безопасность работы с микроорганизмами III-IV групп патогенности и гельминтами". В комнатах, в которых проводят работу с выделенными НК, рабочие поверхности, штативы, оборудование следует обеззараживать ежедневно ультрафиолетовым излучением в течение 1 ч. Полы ежедневно подвергают влажной уборке с применением дезинфицирующих средств, регламентированных санитарными правилами. Перед началом работы рабочую поверхность столов дополнительно обрабатывают 70%-ным этиловым спиртом. Ежемесячно проводят профилактическую обработку рабочей поверхности столов и штативов 1 N соляной кислотой. Обеззараживание проб проводят в соответствии с МУ 3.5.5.1034-01 " Обеззараживание исследуемого материала, инфицированного бактериями I-IV групп патогенности, при работе методом ПЦР".
Требования к вспомогательному оборудованию, помещениям, техническому оснащению для проведения анализа биогенных наноматериалов методом иммуноферментного анализа Требования к вспомогательному оборудованию При проведении ИФ-анализа, применяется следующее вспомогательное оборудование: - Автоматические пипетки с переменным объемом для пробоподготовки и 8-канальные автоматические пипетки с переменным объемом для проведения анализа - Холодильники бытовые, имеющие низкотемпературную камеру (-10-18оС) и камеру +2+8 - автоматические промывочные 96-луночные планшетные устройства при массовых исследованиях свыше 100 образцов - термостаты- шейкеры с температурным диапазоном +22 оС + 40оС - дистиллятор или деионизатор воды - ламинарный бокс с вертикальным воздушным потоком - аналитические весы - рН-метр - настольная центрифуга типа «Эппендорф» с охлаждением (1000-20000 об/мин, +4 оС) 9.2.2.2. Требования к помещениям для проведения анализа биогенных наноматериалов методом иммуноферментного анализа Помещения, в которых располагается оборудование для исследований, должны отвечать следующим требованиям: Температура воздуха в помещении 18-25 °C, влажность – (65±15) %, напряженность магнитного поля – не более 0, 2 мкТл, шумоизоляция и вентиляция согласно гигиеническим нормам труда. Электропроводка должна соответствовать мощности приборов и иметь заземляющий контур. Помещение должно быть оборудовано водопроводом с подачей воды 0, 3 м3/час (15±5°C) с системой бактериальной фильтрации и химической дезактивации использованной воды. Выброс воздуха из ламинарного бокса должен быть выведен наружу и оборудован воздушным фильтром для улавливания наночастиц. |
Последнее изменение этой страницы: 2020-02-17; Просмотров: 82; Нарушение авторского права страницы