Расчёт, метрологическая характеристика и интерпретация результатов исследования

Результаты качественного анализа биогенных наноматериалов методом ПЦР получают путем проведения электрофореза в агарозном геле - пробы, полученной в результате ПЦР (30-40 циклов) и визуальной оценки. Результаты количественного анализа биогенных наноматериалов методом ПЦР в реальном времени получают путем мониторинга накопления продуктов реакции с помощью автоматической (компьютерной) регистрации и интерпретации полученных результатов в соответствии с инструкцией, прилагаемой к набору для проведения ПЦР - реакции в реальном времени.

Результаты и заключение иммуноферментного анализа по определению наночастиц в биологических образцах должны содержать информацию о количестве специфических наночастиц в исследуемом материале с приведенным расчетом по формуле и в соответствии с инструкцией, прилагаемой к набору для проведения ИФА, а также -данные печатного протокола измерения калибровочного контрольного стандарта и исследуемого образца. 

X. Порядок анализа биогенных наноматериалов на основе корового белка вируса гепатита В

Для первичного и последующего контроля стандартного образца наноматериала на основе корового белка гепатита В используется метод денатурирующего белкового электрофореза в полиакриламидном геле (метод Laemmli 1970). По его данным проверяют соответствие молекулярной массы стандарта и наличие белковых примесей. Полоса, соответствующая рекомбинантному коровому антигену гепатита В, находится в диапазоне между 15 и 20 кДа.

Требования к используемой аппаратуре

Для подтверждения соответствия и количественного определения наноматериалов на основе корового белка гепатита В используется иммуноферментный анализ, основанный на взаимодействии анализируемого материала с моноклональными антителами против корового антигена вируса гепатита B (HBcAg).

Характеристики планшетного спектрофотометра:

- режимы работы – конечная точка, кинетика;

- возможность подключения к компьютеру;

- режим встряхивания;

- возможность обработки данных и построения стандартных кривых;

- светофильтры 405 и 450 нм.

Требования к вспомогательному оборудованию, помещениям, техническому оснащению

Типовые эксперименты могут проводиться в соответствии со вторым или третьим уровнями биологической безопасности по классификации ФЗ-86 «О Государственном регулировании в области генно-инженерной деятельности» (1996 г.) или III-IV уровнями патогенности микроорганизмов, в соответствии с санитарными правилами для работы с микроорганизмами I-II либо III-IV групп патогенности и правилами по работе с рекомбинантными молекулами ДНК (1989 г.).

Работа с наноматериалами корового белка должна проводиться в соответствии с требованиями по обеспечению биологической безопасности СП 1.2.2322-08.

Руководство лаборатории несет ответственность за обеспечение надежных мер безопасности по защите персонала лаборатории.

2-й уровень (низкий) - Ф2 (ВL2) - 3-й уровень (средний) -Ф3 (ВL3)

Для экспериментов необходима лаборатория, имеющая специальные инженерные конструкции и защитное оборудование:

- Помещения, в которых располагается оборудование, должны отвечать требованиям, предъявляемым к лабораториям общего и аналитического профиля. Температура воздуха в помещении 18-25 °C, влажность – 65±15 %.

- Помещение должно быть оборудовано водопроводом с подачей воды 0, 3 м³/час (15±5°C) с дренажной системой.

- Электропроводка должна соответствовать суммарной мощности электрооборудования.

- Вспомогательное оборудование:

- Система получения высокоочищенной воды (качества MQ);

- Вибромешалка для плашек ИФА;

- Восьмиканальный дозатор для промывки плашек ИФА;

- Механические дозаторы 20, 100, 200 и 1000 мм³;

- На дверях лаборатории, оборудовании, контейнерах и материалах устанавливается знак биологической опасности. Им также помечаются наноматериалы.

- Вход в лабораторию разрешается только тем лицам, чье присутствие предусмотрено программой исследований и утверждено руководителем лаборатории.

- Автоклав следует устанавливать в лаборатории.

- Поверхности стен, столов и потолков должны легко очищаться и деконтаминироваться.

- Режим и условия работы приборов, создающих опасность образования аэрозоля (вибромешалки, водоструйные насосы, лиофилизаторы, дозаторы и т.п.), организуются таким образом, чтобы свести к минимуму поступление частиц аэрозоля в воздух помещения.

-  Должны использоваться боксы с ламинарным потоком воздуха или боксы с вытяжной вентиляцией во всех случаях, когда возможно образование аэрозоля с НЧ. Не допускается рециркуляция воздуха. Применяется правило " Работа вдвоем". Состояние воздуховодов и фильтров ежегодно проверяется работниками специальной ведомственной службы, что оформляется техническим актом.

-   Использованные в опыте материалы, содержащие наночастицы корового белка, обеззараживаются.

       - Непосредственно после завершения экспериментов рабочие поверхности боксов и другого оборудования обеззараживаются.

-  Стеклянная посуда, которая употреблялась при анализах, перед повторным использованием должна стерилизоваться непосредственно в лаборатории или помещаться в прочные герметичные контейнеры до удаления из лаборатории; эти контейнеры и их содержимое следует стерилизовать при повторном применении.

-   Вакуумные линии необходимо защищать фильтрами и ловушками для жидкости, которые периодически подвергаются техническому осмотру персоналом. Периодичность осмотра определяется руководителем исследований.

- Допускается проведение экспериментов, требующих физической защиты уровня Ф3, в лабораториях, где создан направленный поток воздуха, но устройство вытяжной вентиляции не соответствует полностью уровню Ф3.

- При работе с лиофилизованными материалами должны использоваться одноразовые перчатки из 100% нитрила с хорошей целостностью. Перчатки с удлиненным рукавом являются полезными для предотвращения загрязнения лаборатории, халата или костюма. Перчатки необходимо менять после использования наноматериалов или, если подозревается загрязнение. Хранить загрязненные перчатки необходимо в пластиковых пакетах или герметичных контейнерах в накопителе отходов вплоть до их утилизации. Следует тщательно мыть руки и предплечья после работы с наноматериалами. Обязательно использование одноразовых лабораторных халатов и хранение их в специально отведенных шкафах.

- Для защиты органов дыхания необходимо использовать респираторы противоаэрозольные с дополнительной защитой:

Респиратор BLS – 215 ГОСТ 12.4.041-89. 2-ая степень защиты

Респиратор BLS – 225. ГОСТ 12.4.041-89. 2-ая степень защиты

Респиратор BLS – 520A ГОСТ 12.4.041-89 3-я степень защиты

- Исключается пипетирование ртом. При работе необходимо использовать одноразовые наконечники для автоматических пипеток с аэрозольным барьером, при этом обязательно менять наконечники при переходе от одной пробы к другой.

-   Использованные наконечники хранить в одноразовых герметичных контейнерах в накопителе отходов вплоть до их утилизации или сбрасывать в специальную емкость с 1Н раствором соляной кислоты.

Лаборатория должна иметь комплект для ликвидации случайной утечки, рассыпания и пролива наночастиц: огораживающие ленты, нитриловые перчатки, одноразовые респираторы, адсорбирующие материалы, салфетки, пластиковые мешки. Небольшие количества наноматериалов могут быть уничтожены с помощью мокрой очистки поверхностей салфетками из абсорбирующего материала. Рассыпанные лиофилизованные суспензии могут быть удалены с помощью пылесоса, специально оснащенного фильтром HEPA (High Efficiency Particle Absorbption) класса H 13 (эффективность задержания частиц размером около 0, 06 микрон - 99, 95%). Для обеспечения эффективной задержки наночастиц фильтр устанавливается на выпускном клапане в целях предотвращения рассеивания в воздухе лаборатории.

⇐ Предыдущая12345678910

Поделиться: