Основы санитарной микробиологии

Стр 1 из 8Следующая ⇒

ФЕДЕРАЛЬНОЕ АГЕНТСТВО ПО ОБРАЗОВАНИЮ

Государственное образовательное учреждение
высшего профессионального образования

«ПЕНЗЕНСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ» (ПГУ)

Н.А. Правосудова, В.Л. Мельников

Основы санитарной микробиологии

Учебно-методическое пособие для студентов медицинских вузов

УДК 579.63

П68

Методическое пособие подготовлено на кафедре микробиологии, эпидемиологии и инфекционных болезней медицинского института ПГУ.

Пособие составлено в соответствии с программой по микробиологии, вирусологии для студентов медицинских вузов.

Изложены задачи и методы санитарной микробиологии. Приведены методы санитарно-микробиологического обследования объектов, актуальных в плане возникновения и распространения инфекций

Учебно-методическое пособие рекомендовано для самостоятельной подготовки студентов к практическим занятиям.

Оглавление.

Список сокращений. 4

1. Задачи санитарной микробиологии. 5

2. Методы санитарной микробиологии. 6

2.1. Понятие о санитарно-показательных микроорганизмах. 7

2.2. Характеристика основных групп СПМ.. 9

2.3. Косвенные показатели загрязнения. 11

3. Принципы санитарно-микробиологических исследований. 14

4. Санитарно-микробиологическое исследование воздуха. 16

4.1. Микрофлора воздуха. 16

4.2. Исследование воздуха. 18

5. Санитарно-микробиологическое исследование воды. 27

5.1. Микрофлора воды. 27

5.2. Исследование воды.. 28

6. Санитарно-микробиологическое исследование почвы. 52

6.1. Микрофлора почвы. 52

6.2. Исследование почвы. 54

7. Санитарный режим лечебно-профилактических учреждений. 60

7.1. Организация дезинфекционных и стерилизационных мероприятий в лечебно-профилактических организациях (ЛПО). 62

7.2. Санитарно-микробиологическое исследование оборудования, рук и спецодежды персонала. 85

7.3. Санитарно-бактериологическое исследование перевязочного, шовного и другого хирургического материала. 87

7.4. Исследование на носительство золотистого стафилококка. 88

8. Санитарно-микробиологическое исследование пищевых продуктов. 89

8.1. Микрофлора пищевых продуктов. 89

8.2. Исследование пищевых продуктов. 90

8.3. Санитарно микробиологическое исследование молока и молочных продуктов 96

Список литературы. 103

Список сокращений

СПМ - санитарно-показательные микроорганизмы

БГКП - бактерии группы кишечной палочки

ВБИ - внутрибольничные инфекции

КМАФАМ – количество мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов

КОЕ - колониеобразующие единицы

ЛПО – лечебно-профилактические организации

ЛПУ – лечебно-профилактические учреждения

ЛКП - лактозоположительные кишечные палочки

ОМЧ – общее микробное число

МАФАМ или МАФАнМ – мезофильные аэробные и факультативно-анаэробные микроорганизмы

МПА – мясо-пептонный агар

ОЧС – общее число сапрофитов

ТКБ - термотолерантные колиформные бактерии

Задачи санитарной микробиологии.

Санитарная микробиология – медико-биологическая наука, исследующая закономерности существования потенциально опасных для человека микроорганизмов в окружающей среде и обусловливаемые ими процессы, которые могут непосредственно или косвенно оказывать вредное влияние на здоровье людей.

Санитарная микробиология относится к группе профилактических наук и находится на стыке микробиологии, гигиены и эпидемиологии.

Объектами изучения санитарной микробиологии являются:

· потенциально патогенные и санитарно-показательные микроорганизмы внешней среды,

· физические, химические и биологические факторы внешней среды, способствующие или препятствующие существованию этих групп микроорганизмов во внешней среде и их проникновению в организм человека.

Важнейшими задачами санитарной микробиологии являются:

1) изучение закономерностей взаимообмена (круговорота) потенциально опасных для человека микробов между микропопуляциями людей, животных и совокупностью объектов окружающей среды, включая условия существования микробов в этих трех средах;

2) поиск и использование микробиологических методов оценки безопасности для человека пищевых продуктов, воды, воздуха и разнообразных предметов и материалов;

3) разработка нормативов, устанавливающих соответствие качественного и количественного состава микрофлоры конкретных объектов внешней среды гигиеническим требованиям;

4) оценка путей воздействия человека и животных на окружающую среду. В результате промышленной и индивидуальной деятельности людей происходит контаминация объектов окружающей среды патогенными микроорганизмами, при этом особое внимание уделяется изучению нарушений процессов самоочищения воды, почвы;

5) выдвижение рекомендаций с целью оздоровления внешней среды посредством антимикробных мероприятий и оценки их эффективности.

Методы санитарной микробиологии

Методы, используемые в санитарной микробиологии, можно разделить на 2 группы: прямые и косвенные.

Прямые методы предполагают непосредственное обнаружение возбудителей инфекционных болезней или их токсинов в объектах окружающей среды.

Для определения патогенных микроорганизмов могут быть использованы следующие методы:

• прямой посев исследуемого материала на питательные среды;

• предварительная концентрация патогенных микроорганизмов пропусканием исследуемого объекта (жидкой консистенции) через мембранные фильтры или посевом в среды накопления;

• обнаружение патогенных микроорганизмов методом заражения чувствительных животных (биопроба);

• применение ускоренных методов: серологических, иммунолюминисцентного и радиоиммунного анализов.

Методы прямого обнаружения — наиболее точные и надёжные критерии оценки эпидемиологической опасности внешней среды. Несмотря на то, что в настоящее время разработаны методы прямого, ускоренного и количественного определения потенциально патогенных микробов, данный метод имеет целый ряд недостатков. К ним относятся следующие:

· патогенные микроорганизмы находятся в окружающей среде непостоянно - сравнительно легко их можно обнаружить в период эпидемии той или иной инфекции, но очень трудно - в межэпидемические периоды. Основная же деятельность санитарных микробиологов направлена на предупреждение возникновения эпидемий и поэтому вся работа ведется в межэпидемические периоды;

· концентрация патогенных микроорганизмов в окружающей среде значительно уступает непатогенным и распространение их в объектах неравномерно;

· при выделении патогенных микроорганизмов методами культивирования на питательные среды, даже ингибиторные, они неизбежно страдают от конкуренции сапрофитной флоры.

В связи с вышеизложенным получаемые отрицательные результаты прямого определения патогенных микроорганизмов в объектах окружающей среды еще не говорят с достоверностью об их отсутствии.

Косвенные методы предполагают определение общего числа микробов и обнаружение санитарно-показательных микроорганизмов (СПМ).

Санитарно-микробиологическое исследование воздуха

Микрофлора воздуха

Воздух — среда, не поддерживающая размножение микроорганизмов; это определяется отсутствием питательных веществ и недостатком влаги. Кроме того, в воздухе более выражено микробицидное действие солнечных лучей УФ-спектра.

Загрязнение воздуха микробами происходит из почвы, воды, от животных, людей и растений. Состав микрофлоры воздуха разнообразен и значительно изменяется в зависимости от условий. Воздух верхних слоев атмосферы, а также горный и морской воздух содержит очень мало микроорганизмов. В населенных местах их значительно больше, особенно в летнее время. Особенно сильно микроорганизмами насыщен атмосферный воздух над крупными городами. Это связано с тем, что микроорганизмы в воздухе находятся в состоянии аэрозоля. Выделяют три основные фазы бактериального аэрозоля.

Капельная, или крупноядерная фаза состоит из бактериальных клеток, окружённых водно-солевой оболочкой. Диаметр частиц около 0, 1 мм и более. Частицы оседают довольно быстро: длительность пребывания в воздухе составляет несколько секунд, а скорость перемещения — в среднем 30 см/с.

Мелкоядерная фаза образуется при высыхании частиц первой фазы и состоит из бактериальных клеток, сохранивших только химически связанную воду на своей поверхности и свободную воду внутри клеток. В этой фазе частицы имеют наименьшие размеры, легко перемещаются потоками воздуха, длительное время находятся в нём во взвешенном состоянии. Это наиболее устойчивая фаза, так как диаметр большинства частиц не превышает 0, 05 мм, а скорость оседания частиц составляет, в среднем, 0, 013 см/с. При этом скорость их передвижения превышает 30 см/с, поэтому они могут рассеиваться на большие расстояния. Эта фаза представляет наибольшую эпидемиологическую опасность, так как в её составе распространяется большинство возбудителей воздушно-капельных инфекций, особенно малоустойчивых к внешним воздействиям (например, возбудитель коклюша).

Фаза «бактериальной пыли». Из первых двух фаз бактерии могут переходить в состав более крупных частиц, оседающих в виде пыли на различных предметах, образуя так называемую «бактериальную пыль». Её важное свойство — способность легко диспергироваться под воздействием даже малых токов воздуха. Размер частиц варьирует от 0, 01 до 1 мм. В зависимости от размера частиц и скорости воздушных течений, скорость их перемещения находится в пределах 0, 5-30 см/с. Вследствие длительного пребывания во взвешенном состоянии и способности частиц проникать в дистальные отделы лёгких, мелкодисперсная бактериальная пыль также представляет эпидемиологическую опасность. Эта фаза бактериального аэрозоля преобладает в воздухе жилых помещений и с ней рассеиваются патогенные микроорганизмы, устойчивые к высушиванию (микобактерии, клостридии, стафилококки, стрептококки, грибы).

Микрофлора атмосферного воздуха и микрофлора воздуха жилых помещений различается.

Микрофлора атмосферного воздуха. Среди микроорганизмов атмосферного воздуха доминируют виды, обитающие в почве. Стафилококки и стрептококки обнаруживают лишь в 3, 7% проб, взятых в местах большого скопления людей. В атмосферном воздухе в основном встречают следующие группы микроорганизмов:

· Пигментообразующие кокки в солнечные дни составляют до 70-80% всей флоры (пигмент защищает бактерии от инсоляции).

· Почвенные споровые и гнилостные микроорганизмы. Их содержание резко увеличивается в сухую и ветреную погоду.

· Плесневые грибы и дрожжи. Их содержание увеличивается при повышении влажности воздуха.

В атмосферном воздухе постоянно происходят процессы самоочищения за счет осадков, инсоляции, температурных воздействий и других факторов. В свою очередь атмосферный воздух сам по себе — фактор очищения воздуха жилых помещений.

Микрофлора воздуха закрытых помещений более однообразна и относительно стабильна. Среди микроорганизмов доминируют обитатели носоглотки человека, в том числе патогенные виды, попадающие в воздух при кашле, чихании или разговоре. К ним можно отнести стафилококки, стрептококки, дифтероиды, пневмококки, менингококки, различные вирусы и др. Основной источник загрязнения воздуха патогенными видами — бактерионосители. Уровень микробного загрязнения зависит главным образом от плотности заселения, активности движения людей, санитарного состояния помещения, в том числе пылевой загрязнённости, вентиляции, частоты проветривания, способа уборки, степени освещённости и других условий. Так, регулярные проветривания и влажная уборка помещений снижает обсеменённость воздуха в 30 раз (по сравнению с контрольными помещениями). Самоочищения воздуха закрытых помещений не происходит.

Исследование воздуха

Воздух может служить фактором передачи респираторных вирусных заболеваний (ОРВИ), гриппа, туберкулеза, дифтерии, менингококковой инфекции, туберкулеза, ветряной оспы и др. Задачами санитарно-микробиологического исследования воздуха являются гигиеническая и эпидемиологическая оценка воздушной среды, и, как следствие, разработка комплекса мероприятий, направленных на профилактику аэрогенной передачи возбудителей инфекционных болезней. Объектами санитарно-микробиологического исследования воздуха закрытых помещений являются: воздух больниц (операционные, отделение реанимации, родильные залы роддомов, и т.п.), детских садов, школ, поликлиник, аптек, производственных цехов и вспомогательных помещений на предприятиях различного профиля (пищевых, микробного синтеза и т.п.), а также мест массового скопления людей – кинотеатров, спортивных залов и т. д.

При санитарно-бактериологическом исследовании воздуха проводят:

1) определение общей бактериальной обсемененности воздуха (общее число бактерий в 1 м³);

2) выявление санитарно-показательных микроорганизмов;

3) по эпидемическим показаниям выделение вирусов и патогенных бактерий из воздуха закрытых помещений;

4) при исследовании атмосферного воздуха дополнительное определение качественного состава микрофлоры с учетом наличия спорообразующих аэробов и анаэробов, которые служат показателем загрязненности воздуха микроорганизмами почвы.

Санитарно-микробиологическое исследование атмосферного воздуха в крупных городах проводится в плановом порядке и в некоторых случаях по эпидемическим показаниям. Исследование атмосферного воздуха в местах орошения земледельческих полей сточными водами методом дождевания проводится с целью обнаружения микроорганизмов родов Salmonella, Escherichia.

При оценке санитарного состояния закрытых помещений (табл. 1 и 2) в зависимости от задач исследования определяется общее микробное число, присутствие санитарно-показательных микроорганизмов (стафилококков, α - и β -гемолитических стрептококков), а также непосредственно патогенных микроорганизмов (в зависимости от характера помещений - микобактерий туберкулеза, коринебактерий дифтерии, дрожжей и мицелиальных грибов и пр.). Например, при исследовании воздуха медицинских учреждений определяется присутствие микроорганизмов, относящихся к условно-патогенной флоре (синегнойная палочка, бактерии рода Proteus и ряд других грамотрицательных палочек), вызывающих внутрибольничные инфекции.

Как показатель запылённости и отсутствия влажной уборки расценивают присутствие спорообразующих палочек, а показателем повышенной влажности — плесневых грибов. Показатель плохой освещённости — отсутствие пигментообразующих форм бактерий (иногда этот показатель может быть определён по заданию фтизиатров).

При исследовании воздуха на предприятиях пищевого профиля, общественного питания помимо показателя общей обсемененности определяют те группы микроорганизмов, которые являются характерными возбудителями порчи данных видов продукции или могут встречаться в данном производственном помещении (дрожжи и грибы - в холодильниках, стафилококки - в цехе производства мороженого и т.п.).

На предприятиях микробиологической промышленности, где в производстве используются актиномицеты, грибы, спорообразующие бациллы, дрожжеподобные грибы рода Candida и др., изучается присутствие и количественное содержание в воздухе микробов-продуцентов с целью предупреждения воздействия их на организм работающих людей (возможность заболевания и развития сенсибилизации).

Таблица 1. Нормативные показатели воздуха жилых помещений.

Степень загрязненности	Зима	Лето
Чистый воздух	ОМЧ не более 4500, гемолитических стрептококков - до 35	ОМЧ не более 1500, гемолитических стрептококков - до 16;
Грязный воздух	ОМЧ не более 7000, гемолитических стрептококков – до 124	ОМЧ не более 2500, гемолитических стрептококков - до 36

Таблица 2. Нормативные показатели микробной обсемененности воздуха в некоторых помещениях больницы

	ОМЧ	Золотистый стафилококк (в 250 л)
Операционные до начала работы	не более 500	не допускается
Операционные во время работы	не более 1000	не допускается
Родильные комнаты	не более 1000	не допускается
Палаты для недоношенных детей	не более 750	не допускается

При изучении присутствия микроорганизмов различных физиологических групп в воздухе используют питательные среды разного назначения (как стандартные, так и элективные или дифференциально-диагностические), в зависимости от цели исследования.

Санитарно-микробиологическое исследование воздуха можно разделить на 4 этапа:

1) отбор проб;

2) обработка, транспортировка, хранение проб, получение концентрата микроорганизмов (если необходимо);

3) бактериологический посев, культивирование микроорганизмов;

4) идентификация выделенной культуры (определение патогенных и санитарно-показательных микроорганизмов, ОМЧ).

Правильное взятие проб гарантирует точность исследования. В закрытых помещениях точки отбора проб устанавливаются из расчета на каждые 20 м² площади - одна проба воздуха, по типу конверта: 4 точки по углам комнаты (на расстоянии 0, 5 м от стен) и 5-я точка - в центре. Пробы воздуха забираются на высоте 1, 6—1, 8 м от пола - на уровне дыхания в жилых помещениях. Пробы необходимо отбирать днем (в период активной деятельности человека), после влажной уборки и проветривания помещения. Атмосферный воздух исследуют в жилой зоне на уровне 0, 5—2 м от земли вблизи источников загрязнения, а также в зеленых зонах (парки, сады и т.д.) для оценки их влияния на микрофлору воздуха.

Следует обратить внимание на то, что при отборе проб воздуха во многих случаях происходит посев его на питательную среду.

Методы отбора проб воздуха для бактериологического исследования подразделяют на:

1) аспирационные, основанные на активном просасывании воздуха с помощью различных приборов;

2) седиментационные, основанные на принципе механического оседания микробов.

Седиментационный - наиболее старый метод, широко распространен благодаря простоте и доступности, однако является неточным. Его используют только при исследовании воздуха закрытых помещений. Метод предложен Р. Кохом и заключается в способности микроорганизмов под действием силы тяжести и под влиянием движения воздуха (вместе с частицами пыли и капельками аэрозоля) оседать на поверхность питательной среды в открытые чашки Петри. Чашки устанавливаются в точках отбора на горизонтальной поверхности. При определении общей микробной обсемененности чашки с мясопептонным агаром оставляют открытыми на 5—10 мин или дольше в зависимости от степени предполагаемого бактериального загрязнения. Для выявления санитарно-показательных микробов применяют кровяной агар (для обнаружения стрептококков), молочно-солевой или желточно-солевой агар (для определения стафилококков), суслоагар или среду Сабуро (для выявления дрожжей и грибов). При определении санитарно-показательных микроорганизмов чашки оставляют открытыми в течение 40—60 мин.

По окончании экспозиции все чашки закрывают, помещают в термостат на сутки для культивирования при температуре, оптимальной для развития выделяемого микроорганизма, затем (если этого требуют исследования) на 48 ч оставляют при комнатной температуре для образования пигмента пигментообразующими микроорганизмами.

Седиментационный метод имеет ряд недостатков: на поверхность среды оседают только грубодисперсные фракции аэрозоля; нередко колонии образуются не из единичной клетки, а из скопления микробов; на применяемых питательных средах вырастает только часть воздушной микрофлоры. К тому же этот метод совершенно непригоден при исследовании бактериальной загрязненности атмосферного воздуха.

Аспирационные методы основанны на принудительном осаждении микроорганизмов из воздуха на поверхность плотной питательной среды или в улавливающую жидкость (мясо-пептонный бульон, буферный раствор, изотонический раствор хлорида натрия и др.). Аспирационные методы используют при исследовании воздуха, как закрытых помещений, так и атмосферного.

В настоящее время широко применяется при исследовании воздуха закрытых помещений прибор Кротова (рис. 2). Принцип работы этого аппарата основан на том, что воздух, просасываемый через клиновидную щель в крышке аппарата, ударяется о поверхность питательной среды, при этом частицы пыли и аэрозоля прилипают к среде, а вместе с ними и микроорганизмы, находящиеся в воздухе. Чашку Петри с тонким слоем среды укрепляют на вращающемся столике аппарата, что обеспечивает равномерное распределение бактерий на ее поверхности. Работает аппарат от электросети. После отбора пробы с определенной экспозицией чашку вынимают, закрывают крышкой и помещают на 48 ч в термостат. Обычно отбор проб проводят со скоростью 20-25 л/мин в течение 5 мин.

Таким образом, определяется флора в 100-125 л воздуха. При обнаружении санитарно-показательных микроорганизмов объем исследуемого воздуха увеличивают до 250 л.

Рис. 2. Аппарат Кротова.

В практике санитарной службы при аспирационном взятии проб используются также бактериоуловитель Речменского, прибор для отбора проб воздуха (ПОВ-1), пробоотборник аэрозольный бактериологический (ПАБ-1), бактериально-вирусный электропреципитатор (БВЭП-1), прибор Киктенко, приборы Андерсена, Дьяконова, МБ и др. Для исследования атмосферы могут быть использованы и мембранные фильтры № 4, через которые воздух просасывается с помощью аппарата Зейтца.

При использовании любого из перечисленных приборов получаемые результаты являются приблизительными, однако они дают более правильную оценку обсемененности воздуха в сравнении с седиментационным методом. Во многих случаях отбор проб совмещен с этапом посева.

Определение стафилококков

Отбор проб воздуха проводится с помощью аппарата Кротова в количестве 250 л на 2—3 чашки с желточно-солевым агаром и на чашку с кровяным агаром. Чашки инкубируют при температуре 37°С в течение 48 ч. Изучают культуральные признаки всех видов колоний, из подозрительных готовят мазки и окрашивают по Граму.

Подсчитывают количество выросших колоний стафилококков и определяют число микробов в 1 м³ воздуха.

При возникновении внутрибольничных инфекций стафилококковой этиологии проводят исследования, направленные на выявление источников и путей распространения инфекции: путем фаготипирования определяют идентичность стафилококков, выделенных из объектов окружающей среды, а также от больных и обслуживающего персонала.

Определение стрептококков

Отбор проб воздуха при исследовании на наличие α - и β -гемолитических стрептококков производят с помощью аппарата Кротова на чашки с кровяным агаром. Забирают 200—250 л воздуха, чашки с посевами выдерживают в термостате 18—24 ч и затем еще 48 ч при комнатной температуре (после предварительного просмотра и учета). Подсчет количества выросших колоний проводят на 1 м³ с последующим контрольным микроскопированием и выборочным пересевом колоний на кровяной агар или сахарный бульон.

Микрофлора воды.

В воде формируются определенные биоценозы с преобладанием микроорганизмов, адаптировавшихся к условиям местонахождения. Количественный и качественный состав микрофлоры воды зависит от состава и концентрации минеральных и органических веществ, температуры, рН, скорости движения воды, массивности поступления ливневых, фекально-бытовых и промышленных сточных вод. Количество микробов прямо пропорционально степени загрязненности водоемов. Особенно богаты микроорганизмами пруды, ручьи, озера густо населенных районов. В закрытых водоемах (озера, пруды) наблюдается определенная закономерность в распределении бактерий. Состав микроорганизмов различен на поверхности воды и на дне водоемов. Наиболее обильно заселена микроорганизмами вода на глубине 10-100 см. В более глубоких слоях их количество значительно снижается. Ключевые воды и воды артезианских колодцев наиболее чисты.

Микрофлора воды активно участвует в процессе самоочищения от органических отходов. Утилизация органических отходов связана с деятельностью постоянно обитающих в воде микроорганизмов, т.е. составляющих аутохтонную микрофлору. В пресных водоемах находятся различные бактерии: палочковидные (псевдомонады, аэромонады и др.), кокковидные (микрококки), извитые и нитевидные (актиномицеты). На дне водоемов, в иле увеличивается количество анаэробов. При загрязнении воды органическими веществами появляется большое количество непостоянных (аллохтонных) представителей микрофлоры воды, которые исчезают в процессе самоочищения воды.

Вода – фактор передачи возбудителей многих инфекционных заболеваний. Вместе с загрязненными ливневыми, талыми и сточными водами в озера и реки попадают представители нормальной микрофлоры человека и животных (кишечная палочка, цитробактер, энтеробактер, энтерококки, клостридии) и возбудители кишечных инфекций (брюшного тифа, паратифов, дизентерии, холеры, лептоспироза, энтеровирусных инфекций, криптоспоридиоза и др.). Некоторые возбудители могут даже размножаться в воде (холерный вибрион, легионеллы).

Исследование воды

Поскольку вода используется при производстве любого вида продукции, а также непосредственно в пищу, соответствие ее качества санитарно-микробиологическим показателям чрезвычайно важно. Водным путем могут передаваться кишечные инфекции - холера, брюшной тиф и паратифы, сальмонеллез, дизентерия, гепатит А, а также лептоспирозы, сибирская язва, туляремия, различные грибковые заболевания. В связи с этим основной целью санитарно- микробиологического исследования воды является определение наличия в воде патогенной и условно-патогенной микрофлоры, и, следовательно, источника этого попадания, а также предупреждение распространения инфекционных заболеваний среди населения.

Исследованию подлежит вода централизованного водоснабжения, колодцев, открытых водоемов, бассейнов, сточные воды.

Санитарно-микробиологическое исследование воды проводится в следующих случаях:

1) при выборе источника централизованного хозяйственно- питьевого водоснабжения и периодическом контроле этого источника;

2) при контроле эффективности обеззараживания питьевой воды централизованного водоснабжения;

3) при наблюдении за подземными источниками централизованного водоснабжения, за такими как артезианские скважины, почвенные воды и т.д.;

4) при определении состояния и степени пригодности воды источников индивидуального водопользования (колодцев, родников и т.д.);

5) при наблюдении за санитарно-эпидемиологическим состоянием воды открытых водоемов: водохранилищ, прудов, озер, рек;

6) при контроле эффективности обеззараживания воды плавательных бассейнов;

7) при проверке качества и степени очистки сточных вод;

8) при определении очага водных вспышек инфекционных болезней.

При санитарно-микробиологическом исследовании воды определяются различные показатели в зависимости от поставленной задачи и характера исследуемого объекта (табл. 3)

Таблица 3. Требования к микробиологической чистоте воды

Наименование объекта контроля	Определяемые микробиологические показатели	Требование	Нормативный документ
Вода питьевая централизованных систем водоснабжения	ОМЧ Общие колиформные бактерии Термотолерантные колиформные бактерии Колифаги Споры сульфит-редуцирующих бактерий	Не более 50 (в 1 мл) отсутствие (в 100 мл) отсутствие (в 100 мл) отсутствие (в 100 мл) отсутствие (в 20 мл)	СанПиН 2.1.4.1074-01.
Вода питьевая при нецентрализованном использовании местных источников	Общие колиформные бактерии ОМЧ Дополнительные: Термотолерантные колиформные бактерии Колифаги	отсутствие (в 100 мл) (в 1мл) отсутствие (в 100 мл) отсутствие (в 100 мл)	СанПиН 2.1.4.1175-02
Вода в водных объектах в рекреации	Число лактозоположитель-ных кишечных палочек (ЛКП) Дополнительные: Общие колиформные бактерии Термотолерантные колиформные бактерии Колифаги Возбудители кишечных инфекций	Не более 1000 (в 1 дм3) при использовании объекта для купания Не более 500 (в 100 мл) Не более 100 (в 100 мл) Не более 10 (в 100 мл) отсутствие	ГОСТ 17.1.5.02-80 СанПиН 2.1.5.980-00
Вода купально-плавательных и спортивных бассейнов с пресной и морской водой	Общие колиформные бактерии Термотолерантные колиформные бактерии Колифаги Staphylococcus aureus Дополнительные: Возбудители кишечных инфекций Pseudomonas aeruginosa	не более 1 (в 100 мл) отсутствие (в 100 мл) отсутствие (в 100 мл) отсутствие (в 100 мл) отсутствие отсутствие (в 100 мл)	СанПиН 2.1.2.1188-03
Сточные воды после очистки и обеззараживания, отводимые в водные объекты	Общие колиформные бактерии Колифаги Термотолерантные колиформные бактерии Фекальные стрептококки Патогенные микроорганизмы	не более 100 (в 100 мл) не более 100 (в 100 мл) не более 100 (в 100 мл) не более 10 (в 100 мл) отсутствие	МУ 2.1.5.800-99

Контроль воды бассейнов

Качество пресной воды, поступающей в ванну плавательного бассейна, должно отвечать гигиеническим требованиям, предъявляемым к качеству воды централизованных систем питьевого водоснабжения. Качество морской воды в местах водозаборов для плавательных бассейнов должно отвечать по физико-химическим и бактериологическим показателям гигиеническим требованиям, предъявляемым к прибрежным водам морей в местах водопользования населения.

Отбор проб воды в плавательных бассейнах осуществляют с целью оценки качества воды:

1. поступающей (для бассейнов всех типов);

2. до и после фильтров (для бассейнов рециркуляционного типа и с морской водой);

3. после обеззараживания перед подачей воды в ванну (при наличии этого этапа);

4. в ванне плавательного бассейна.

Отбор проб для целей 1-3 проводят из специальных пробоотборных кранов. Для этого предварительно из крана удаляют дополнительные приспособления и вкладыши, проводят его стерилизацию фламбированием и спускают минимальный объем воды, необходимый для удаления продуктов стерилизации.

При исследовании воды, поступающей в плавательный бассейн после очистки и обеззараживания, пробу отбирают в местах трубопровода, удаленных от места ввода дезинфектанта, там, где его остаточное содержание стабильно.

Отбор проб воды в ванне плавательного бассейна производится не менее чем в 2 точках (глубокой и мелкой части): поверхностный слой толщиной 0, 5 - 1, 0 см и на глубине 25 - 30 см от поверхности зеркала воды в количестве одного литра с соблюдением правил стерильности.

В процессе эксплуатации бассейна определяют основные микробиологические показатели: ОМЧ, количество бактерий семейства Enterobacteriaceae, термотолерантных колиформных бактерий, золотистого стафилококка, колифагов и дополнительные – возбудителей кишечных инфекций, синегнойную палочку (табл. 3).

Основные микробиологические показатели определяют 2 раза в месяц.

Получение неудовлетворительных результатов исследований воды по основным микробиологическим показателям является основанием для полной смены воды в ванне бассейнов с проточной системой водообмена, в т.ч. малых бассейнов с площадью зеркала воды не более 100 м², а также бассейнов с морской водой. Обнаружение в пробах воды возбудителей кишечных инфекционных и (или) синегнойной палочки является основанием для полной смены воды в ванне вне зависимости от вида бассейна и системы водообмена.

Контроль сточных вод.

Сточные воды являются основным источником микробного загрязнения объектов окружающей среды, в т.ч. поверхностных пресных и морских вод, подземных водоносных горизонтов и почвы. Санитарно-микробиологическое исследование сточных вод проводят с целью проверки эффективности их очистки и обеззараживания перед их отведением в водные объекты, используемые для хозяйственно-питьевого, культурно-бытового и рыбохозяйственного водопользования, при применении в промышленном водоснабжении в открытых и закрытых системах, а также при отведении на поля орошения. В ряде случаев исследуют сточные воды неочищенные или на этапах очистки до хлорирования для контроля работы очистных сооружений.

Пробы сточных вод рекомендуется отбирать батометром или другими специальными устройствами, которые должны быть стерильными. Объем каждой пробы может колебаться от 500 до 10 мл в зависимости от места взятия (при проверке отдельных этапов очистки, после обработки, перед сбросом в водоем) и от задач анализа.

В сточных водах, прошедших очистку и обеззараживание, определяют ОМЧ, определение колиформных бактерий, колифагов (таб. 3). В качестве индикаторных микроорганизмов в ряде стран рекомендуется использовать термотолерантные колиформные бактерии, Е.coli, фекальные стрептококки.

Периодичность производственного контроля при обеззараживании сточных вод зависит от их вида и дальнейшего использования.

Определение термотолерантных колиформных бактерий (ТКБ)

ТКБ определяют теми же методами, как и БГКП, кроме последнего этапа идентификации, который проводится по ферментации лактозы на полужидкой питательной среде при 44, 5°С. В случае роста на среде Эндо типичных лактозоположительных колоний, Гр(-), оксидазоотрицательных, способных ферментировать лактозу при 44, 5°С, их учитывают как ТКБ, индекс или титр определяют по таблице 6.

Определение колифагов.

Присутствие колифагов (бактериофагов, паразитирующих на Е. coli) определяют методом агаровых слоев по Грациа.

Для определения используют чувствительные музейные культуры микроорганизмов (тест-организмы): мутант Salmonella tuphimurium, непатогенный для человека, штамм Escherichia coli К-12 Hfr из соответствующей коллекции культур АТСС 23631 или NTCT12486, штамм E.coli рода CN, называемый WG5, а также бактериофаги MS2, NCTC12487 или АТСС 15597 для контроля чувствительности тест-организмов.

За 18-24 часа перед проведением анализа необходимо сделать посев тест-культуры E.coli К₁₂ F+ на скошенный питательный агар (МПА). Перед проведением анализа сделать смыв с «косяка» 5 мл стерильной водопроводной воды и по стандарту мутности приготовить взвесь тест-организма в концентрации 10⁹ бакт. клеток/мл.

Расплавить и остудить до 45°С 2%-ный питательный агар. Исследуемую воду 100 мл внести в 5 стерильных чашек Петри (по 20 мл в каждую). В питательную среду добавить смыв E.coli (из расчета 1 мл на 100 мл агара) и хорошо перемешать. Полученной смесью залить по 30 мл сначала пустую чашку Петри (контроль), а затем все чашки, содержащие исследуемую воду. Содержимое чашек перемешивают вращательными движениями. После застывания питательной среды чашки переворачивают вверх дном и ставят для инкубирования в термостат при 37°С на 18-24 ч.

12 3 4 5 6 7 8 Следующая ⇒