Помощник медицинского лаборанта

Стр 1 из 7Следующая ⇒

ПРОИВОДСТВЕННОГО ОБУЧЕНИЯ

Помощник медицинского лаборанта

По предмету: «Микробиология, вирусология с техникой микробиологических исследований»

По специальности: 0305000 «Лабораторная диагностика»

Квалификация: 0305013 «Медицинский лаборант»

обучающегося Государственного медицинского

колледжа им Д. Калматаева

группы 3 лабораторная диагностика 1

Садыковой Гулим

Место прохождения практики – РГКП ВКО ЦСЭЭ по г.Семей

Время прохождения практики - с 13.04.15 по 02.05.15

Методический руководитель преподаватель- Омарбаева Ж.Т.

Непосредственный руководитель- Жунусова Л.К.

Пояснительная записка

Цель учебно-производственной практики:

- профессиональная ориентация учащихся,

- ознакомление с оборудованием и объемом работы баклаборатории

- иметь навыки соблюдения правил противоэпидемического режима и ТБ в бактериологических лабораториях

- уметь производить забор материала для бактериологических исследований - иметь навыки приготовления микроскопических препаратов и окрашивать их различными методами окраски

- уметь приготовить различные питательные среды

- иметь навыки посева как патологического материала от больных, так и методы посева: воздуха, продуктов, воды, почвы и смывов из внешней среды.

При прохождении практики расширяются, углубляются и закрепляются знания и практические навыки, полученные при изучении предмета микробиология, вирусология c техникой микробиологических исследований. особое внимание должно уделяться вопросам этики медицинских работников. Во время прохождения УПП ответственному руководителю необходимо обеспечить рабочие места практикантам, контролировать их работу и по окончании практики подписывать их дневники и характеристики. B период прохождения практики учащиеся обязаны подчиняться правилам внутреннего распорядка, установленным в лаборатории, принимать в общественно-полезном труде, в производственных совещаниях и семинарах.

Практиканты должны ежедневно вести дневник, где записывается вся проводимая работа (методика каждого исследования). Подробная запись проводится один раз, когда это выполняется впервые, последующие аналогичные исследования учитываются только количественно.

При прохождении практики в лаборатории непосредственный руководитель обязан ознакомить учащихся с применением унифицированных методов лабораторной диагностики в соответствии c приказом №535 от 22.04.85г., приказом N 113 от 11.03.96г. Приложение 5А, . МУК №70 МЗ РК от 20.04.2009г. МУ 10.05.031.97г. МУ 10.05.041.02г МУК 10.05.045.03 приказ 299 по ТС ГОСТы 10444.2-94, 104444.15-94, 10444.9-94, 10444.12-88, ГОСТы 30518-30519-97, 28560-90

По окончании УП непосредственный руководитель дает краткую характеристику о работе учащихся и оценивает поз бальной системе.

График прохождения практики

№	Наименование разделов	Количество дней
	Средоварочная
	Автолавная
	Регистратура
	Отдел по кишечным инфекциям
	Отдел по капельным инфекциям
	Отдел по серологий
	Отдел санитарно-бактериологических исследований воды и почвы
	Отдел санитарно-бактериологических исследований продуктов и молока
	Отдел санитарно-бактериологических исследований воздуха и смывов
	Отдел санитарно-бактериологических исследований лекарственных форм и стерильности.
	ИТОГО

Содержание программы.

Работа в средоварне и автоклавной:

1.Соблюдение правил работы в микробиологической лаборатории (соблюдение техники безопасности).

2.Приготовить дезинфецирующие растворы: 1-3 % растворы хлорамина, 3-6 % растворы перикиси водорода, лизоформина и др. Знать их применение, сроки использования, меры предосторожности при приготовлении..

3.Стерилизация в сушильном шкафу и в автоклаве.

4.Готовить основные питательные среды: МПА, МПБ, 1% пептонную воду, кровяной и сывороточный агар, ЖСА, КТА, КБА; дифференциально диагностические среды (Эндо, Левина, Плоскирев, висмут сульфит агар); среды обогощения (селенитовый, магниевый бульоны, 6, 5% солевой бульон) и среды для выращивания анаэробов (Вильсон Блер, Китт-Тароцци).

5.Фильтрование, разлив питательных сред в пробирки, флаконы и чашки, определение pH питательных сред, определение стерильности питательных сред, хранение сухих и жидких питательных сред.

6.Ведение дневников.

Регистратура.

1.Прием и регистрация анализов.

2.Выписка результатов исследования и распределение анализов по отделам.

3.Взятие материала на кишечную группу: эширихии, сальмонеллы, шигеллы.

4.Взятие матриала на носительство стафилакокка.

5.Взятие материала на носительство дифтерии.

6.Взятие материала на холеру (форма №30)

7.Взятие клинического материала для бактериологического исследования

8. Подготовка биологического субстрата (кровь, ликвор, кал, моча, отделяемое из ран, ушей, влагалища, уретры, рвотные массы, промывные воды, мокроту, ) к бактериологическому исследованию и первичный посев на питательные среды.

Исследование на кишечную группу.

1. Прием и регистрация анализов.

2.Провести обеззараживание инфицированного материала, рабочего места, случайно загрязненных участков тела, одежды, предметов рабочего стола.

3.Подготовка биологического субстрата( кал, моча, отделяемое из ран, ушей, влагалища, уретры, рвотные массы, промывные воды, ) к бактериологическому исследованию и первичный посев на твердые питательные среды и среды накопления.

4.Работа с термостатом и центрифугой. Техника безопасности.

5.Выделение чистой культуры микроорганизмов и изучение ее основных свойств (морфологических, культуральных, биохимических, антигенных свойств).

6.Приготовить микропрепараты из микробных культур и патологического материала, окраска их простыми и сложными методами окраски (по Граму, окраска капсул по Бурри по Цилю Нильсену и т.д.).

7.Микроскопирование с иммерсионной системой и в «темном поле».

8.Приготовить нативные препараты висячей и «раздавленной» капли. Микрокопирование.

9.Постановка и учет иммунологических реакций: агглютинации на стекле и объемным методом, РПГА.

10. Регистрация и выдача результатов.

11. Ведение дневников

Исследование на капельную группу.

1.Взятие материала на дифтерию, коклюш и менингит и стафилакокк.

2.Правила доставки и регистрация.

3.Первичный посев на питательные среды по нозологии.

4.Приготовление мазков со среды и микрокопирование.

5.Выделение чистой культуры.

6..Выдача результатов. Выписка протоколов. Ведение дневников

Серогические исследования.

1 Подготовка сыворотки крови для серогического исследования.(инактивирование, осаждение эритроцитами барана, разведение сыворотки 1: 5, 1: 10)

2. Постановка иммунологических реакций: агглютинации на стекле и объемным методом, РПГА, реакций Хедельсона и Райта.

3. Учет иммунологических реакций.

4. Выдача результатов. Выписка протоколов. Ведение дневников

Санитарно-микробиологические исследования.

1.Отбор проб питьевой воды и посев по ГОСТу методом мембранных дисков и бродильным методом.

2. Отбор проб воды из открытых водоемов и определение индекса ЛКП.

3. Отбор проб воды из бассейнов и определение показателей: ОМЧ, ОКБ, коли фагов и стафилококка

4. Отбор проб почвы и определение показателей: ОМЧ, БГКП, термофилов и патогенной флоры

5.Отбор проб пищевых и молочных продуктов. Регистрация и подготовка к микробиологическому исследованию.

6. Посев проб пищевых и молочных продуктов на показатели по 299 приказу Таможенного Союза. Выдача результатов и оформление протоколов.

7.Отбор проб смывов на бактериальную обсемененность. Учет и выдача результатов.

8. Отбор проб лекарственных форм и хирургических инструментов и перевязочного материала. Особенности посева на анаэробы.

5. Выдача результатов и оформление протоколов.

6. Ведение дневников.

Взятие материала на холеру

Методы первого, второго, третьего, четвертого дня исследования при выделении и идентификации холерного вибриона. Тесты, применяемые для идентификации культуры холерного вибриона.

Алгоритм действия:

1. Материал засейте в 1% пептонную воду объемом 50-100мл.

2. Параллельно засейте материал на щелочной агар

3. Из материала приготовьте мазки, зафиксируйте в смеси Никифорова

4. Мазки из материала окрасьте фуксином и по Граму

5. Проверьте подвижность в раздавленной и висячей капле

6. Через 6-8 часов исследуйте пептонную воду на наличие пленки на поверхности среды

7. Пересейте на вторую пептонную воду

8. Приготовьте мазок из посева, окрасьте по Граму и фуксином

9. Поставьте с культурой ориентировочную реакцию агглютинации на стекле с О сывороткой

10. Поставьте с культурой ориентировочную реакцию агглютинации на стекле с О сывороткой

11. Колонии с щелочного агара изучите в РА

12. При положительной РА ставьте реакцию с типовыми сыворотками Огава и Инаба

13. При положительно РА изучите типичные морфологию и культуральные свойства

14. Типичную культуру высейте на полиуглеводную среду и бульон

15. После инкубации в течении 3-4 часов с бульонной культурой ставьте развернутую РА

16. Полиуглеводная среда изменяет цвет столбика (расщепление сахарозы), скошенная часть не меняется

17. Сделайте тест, идентифицирующий культуру холерного вибриона – морфология

18. Сделайте тест, идентифицирующий культуру холерного вибриона – подвижность в висячей или раздавленной капле

19. Сделайте тест, идентифицирующий культуру холерного вибриона – культуральные свойства

20. Сделайте тест, идентифицирующий культуру холерного вибриона – сахаралитические свойства

21. Сделайте тест, идентифицирующий культуру холерного вибриона – протеолитические свойства

22. Сделайте тест, идентифицирующий культуру холерного вибриона – гемолитические свойства

23. Сделайте тест, идентифицирующий культуру холерного вибриона – уреазная активность

24. Сделайте тест, идентифицирующий культуру холерного вибриона – восстановительные свойства (реакция холера-рот) восстанавливают нитраты в нитриты

25. Сделайте тест, идентифицирующий культуру холерного вибриона – диастатическая активность (расщепляет крахмал)

26. Сделайте тест, идентифицирующий культуру холерного вибриона – реакция Фогес-Проскауэра (красное окрашивание культуры при добавлении специального химического ингредиента)

27. Сделайте тест, идентифицирующий культуру холерного вибриона – проба на оксидазу (культура при добавлении специального химического ингредиента окрашивается в ярко-синий цвет)

Цифровой отчет:

Прием мазков из зева на холеру-6

Прием мазков из носа-6

Выписка направленный-6

Заполнение журнала-1

Выписка результатов-6

Седьмой день практики. День началсяв отделе по кишечным инфекциям.Цель: Прием и регистрация анализов.

Провести обеззараживание инфицированного материала, рабочего места, случайно загрязненных участков тела, одежды, предметов рабочего стола.Подготовка биологического субстрата( кал, моча, отделяемое из ран, ушей, влагалища, уретры, рвотные массы, промывные воды, ) к бактериологическому исследованию и первичный посев на твердые питательные среды и среды накопления.

Работа с термостатом и центрифугой. Техника безопасности.Выделение чистой культуры микроорганизмов и изучение ее основных свойств (морфологических, культуральных, биохимических, антигенных свойств).Приготовить микропрепараты из микробных культур и патологического материала, окраска их простыми и сложными методами окраски (по Граму, окраска капсул по Бурри по Цилю Нильсену и т.д.).Микроскопирование с иммерсионной системой и в «темном поле».

Приготовить нативные препараты висячей и «раздавленной» капли. Микрокопирование.Постановка и учет иммунологических реакций: агглютинации на стекле и объемным методом, РПГА. Регистрация и выдача результатов. Ведение дневников

Микробиологическое исследование.

Цель исследования: выделение возбудителей заболевания и определение серовара сальмонелл.

Материалом для исследования могут быть: испражнения, кровь, моча, рвотные массы, промывные воды, дуоденальное содержимое. В данном случае материалом для исследования служит испражнения взятые с помощью тампона из прямой кишки(ректальный метод).Доставка материала в лабораторию должна осуществляться в течение 2 ч.После сбора материала, тампон помещают в селенитовый бульон(среда обогащения- для накопления сальмонелл) и ставят в термостат при температуре 37 градусов на 24 ч.Посев материала на дифференциальные среды Плоскирева, Эндо и ВСА (висмут-сульфит агар)

Посев на ВСА:

1. Подписала чашку Петри со средой- поделила на две части и подписала каждую сторону.

2. Взяла тампон с материалом- сначала сделала площадку, а затем произвела посев штрихами до половины чашки.

3. Следующий посев произвожу на другой половине чашки Петри.(18 чашек)

4. Чашки ставлю в термостат при температуре 37 градусов на 24 ч.

Колонии сальмонелл на среде ВСА- мелкие, черные, блестящие, когда снимают петлей оставляют черное дно.

Колонии сальмонелл на среде Плоскирев - мелкие нежные, полупрозрачные, с ровными краями.

Колонии сальмонелл на среде Эндо - мелкие нежные, розовые, полупрозрачные.

Обработала стол дез.средством.

5. Просмотр чашек, отсев подозрительных колоний на среду Клиглера (трехсахарная среда).Изменение цвета среды в скошенной части при расщеплении сахарозы и лактозы, а изменение цвета в столбике- при расщеплении глюкозы. Сами бактерии при ферментации углеводов образуют газ (водород и углекислый газ), происходит скопление газа на дне пробирки. Эта среда позволяет определить образование сероводорода, при этом агар чернеет.

6. Постановка биохимического ряда- ПБДЭ(см.табл.)

7. Фаготипирование(делается параллельно с биохимией)

Приготовление мазка

1.На подготовленное предметное стекло наносят пастеровской пипеткой или петлей каплю изотонического раствора натрия хлорида(0, 9%).

2.Культуру осторожно снимают петлей и агара в пробирке или чашке Петри и эмульгируют в капле на стекле.

3.Приготовленный мазок должен быть равномерным и не густым. При его высыхании на предметном стекле остается слабый налет.

4.Мазок высушивают при комнатной температуре.

Окраска по Грамму

1.Мазок фиксированный на огне окрашивают через фильтровальную бумагу по Синеву.

2.Прокрашивание длится 1-2 мин.

3.Снимают фильтровальную бумагу по Синеву.

4.Сливают избыток красителя и не промывая препарат водой, наливают раствор Люголя на 1-2 мин до почернения препарата. 5.Раствор Люголя сливают.

6.Предметное стекло с мазком, для обесцвечивания мазка, погружают несколько раз в стаканчик со спиртом 30 секунд. 7.Препарат тщательно промывают водопроводной водой. 8.Докрашивают спиртовым раствором фуксина.

9.Промывают водой и высушивают.

Грамположительные окрашиваются в фиолетовый цвет, а грамотрицательные окрашиваются в красный цвет.

Если грамположительные, то выдаем отрицательный результат, если грамотрицательные, то ставим оксидазный тест(с помощью полосок или дисков).Если оксидаза- положительная, то выдаем отрицательный результат, если оксидаза- отрицательная, то считаем колонии, делаем мазок и красим по Грамму. Если грамотрицательные, то пересеваем на другую среду (среда полужидкая с глюкозой), ставим в термостат на 4-5 ч при температуре 37 градусов и наблюдаем образование кислоты газа.

Если нет газообразования, то ставим в термостат на 24 ч в термостат при температуре 37 градусов. Через сутки смотрим, если есть газообразование, значит результат положительный и считаем коли-индекс (количество E.coli в 1 литре воды).

Выявление сальмонелл

25 мл полученной взвеси засевают во флакон, содержащий 100 мл селенитового бульона. Затем инкубируют в термостате при температуре 37 градусов. На следующий день производят посев на среды Эндо и ВСА в чашках Петри, затем проводят дальнейшую идентификацию.(посев-8 чашек)

Определение протея

0, 5 мл взвеси вносят в конденсат свежескошенного агара(метод Шукевича).На следующий день определяют наличие протея по ползучему росту, затем микроскопируют и определяют подвижность методом висячей капли.

Метод висячей капли

Для приготовления препарата необходимы: стекло с лункой, покровное стекло и вазелин. Края лунки покрывают тонким слоем вазелина. На покровное стекло наносят каплю культуры. Затем осторожно накрывают покровное стекло с лункой так, чтобы капля оказалась в центре. Склеившиеся стекла быстро переворачивают покровным стеклом вверх. При микроскопии сначала при малом увеличении находят край капли, а затем проводят изучение препарата при большом увеличении.

Затем выдала результаты исследования.

Цифровой отчет:

Приготовление мазка-7

Окраска по Грамму-7

Окраска по Бури-5

Метод висячей капли-3

Девятый день практики. Цель: Взятие материала на дифтерию, коклюш и менингит и стафилакокк. Правила доставки и регистрация. Первичный посев на питательные среды по нозологии. Приготовление мазков со среды и микрокопирование. Выделение чистой культуры.Выдача результатов. Выписка протоколов. Ведение дневниковпрактики в отделе по капельным инфекциям.

Начало рабочего дня в 9 часов.

Десятый день практики.

Методы культивирования
и выделения чистой культуры бактерий.

Для успешного культивирования, помимо правильно подобранных сред и правильно произведенного посева, необходимы оптимальные условия: температура, влажность, аэрация (снабжение воздухом). Культивирование анаэробов сложнее, чем аэробов, для удаления воздуха из питательной среды используют различные способы.
Выделение отдельных видов бактерий ( чистой культуры ) из исследуемого материала, содержащего, как правило, смесь различных микроорганизмов, является одним из этапов любого бактериологического исследования. Чистой культурой микробовполучают из изолированной микробной колонии.
При выделении чистой культуры из крови ( гемокультуры) ее предварительно «подращивают» в жидкой среде: 10-15 мл стерильно взятой крови засевают в 100-150 мл жидкой среды. Соотношение засеваемой крови и питательной среды 1: 10 не случайно - так достигается разведение крови (неразведенная кровь губительно действует на микроорганизмы).

Этапы выделения чистой культуры бактерий
I этап (нативный материал)
Микроскопия (ориентировочное представление о микрофлоре).
Посев на плотные питательные среды (получение колоний).
II этап (изолированные колонии)
Изучение колоний (культуральные свойства бактерий).
Микроскопическое изучение микробов в окрашенном мазке
(морфологические свойства бактерий).
Посев на скошенный питательный агар для выделения чистой культуры.
III этап (чистая культура)
Определение культуральных, морфологических, биохимических
и других свойств для идентификации культуры бактерий

Особенность микроскопирования микробов — применение исключительно иммерсионной системы, состоящей из исследуемого объекта, иммерсионных масла и объектива. Преимущество этой системы заключается в том, что между объектом на предметном стекле и фронтальной линзой объектива находится среда с одинаковым показателем преломления (кедровое, вазелиновое масло и др.). Благодаря этому достигается наилучшее освещение объекта, так как лучи не преломляются и попадают в объектив. При обычной световой микроскопии наблюдаемый объект (в том числе и микробы) рассматриваются в проходящем свете. Поскольку микробы, как и другие биологические объекты, малоконтрастны, то для лучшей видимости их окрашивают. С целью расширения границы видимости применяют другие виды световой микроскопии.

Цифровой отчет:

Выделения чистой культуры бактерий-5

Микроскопия-2

Выписка результатов-2

Одиннадцатый день практики. Подготовка сыворотки крови для серогического исследования.(инактивирование, осаждение эритроцитами барана, разведение сыворотки 1: 5, 1: 10)Постановка иммунологических реакций: агглютинации на стекле и объемным методом, РПГА, реакций Хедельсона и Райта. Учет иммунологических реакций. Выдача результатов. Выписка протоколов. Ведение дневников

Подготовка посуды к серологическому исследованию.

Обработка планшет: 1. Выдерживают в 1% растворе соляной кислоты не менее 1 ч.

2. Промывают в теплой мыльной воде, протирая каждую лунку тампоном с ватой.

3. Прополаскивают 20 раз в проточной воде.

4. Заливают дист. водой и оставляют до утра.

5. Утром сливают воду с планшет.

6. Подсушивают при комнатной температуре.

7. Перед постановкой реакции каждую лунку протирают тампоном с ватой, смоченной в физиологическом растворе.

Цифровой отчет

Подготовка сыворотки крови-6

РПГА-1

Реакций Хедельсона и Райта-1

Учет иммунологических реакций-1

Выдача результатов-1

Выписка протоколов-1

Двенадцатый день практики.

Метод мембранных фильтров.

Первый день исследования

В воронку смонтированного и простерилизованного фильтровального прибора Зейтца наливают отмеренный объем исследуемой воды. С помощью насоса создают вакуум в приемном сосуде (обычно воду фильтруют через фильтры № 2 и 3). По окончании фильтрации стерильным или обожженным в огне пинцетом снимают фильтр и накладывают его на среду Эндо в чашке Петри так, чтобы поверхность с осевшими на ней микробами была обращена вверх (на одну чашку можно помещать 3-4 мембранных фильтра). Посевы инкубируют в термостате при температуре 37° С 18-24 ч.

Второй день исследования

Чашки с посевами (фильтрами) вынимают из термостата. Отсутствие подозрительных колоний дает право дать отрицательный ответ. Учету подлежат все красные и розовые колонии с металлическим блеском или без него. Из выросших колоний делают мазки, окрашивают по Граму (рис. 56).

Рис. 56. Определение коли-индекса воды методом мембранных фильтров

При наличии грамотрицательных палочек ставят пробу на оксидазу. Положительная оксидазная проба дает право дать отрицательный ответ. При отрицательной оксидазной пробе производят посев на полужидкую среду с глюкозой и индикатором или на среду ГПС с бродильными трубками - для выявления ферментации углевода до кислоты и газа. При наличии кислоты и газа вычисляют коли-индекс. Например, на всех фильтрах, находящихся на среде Эндо, выросло 3 колонии, пропущено через фильтр было 300 мл воды.

Расчет. 300 мл - 3 колонии

100 мл - х

х = 1; коли-индекс 1

Отбор пробы воды

Для отбора проб воды используют специально предназначенную для этих целей одноразовую посуду или емкости многократного применения, изготовленные из материалов, не влияющих на жизнедеятельность микроорганизмов. Емкости должны быть оснащены плотно закрывающимися (силиконовыми, резиновыми или из других материалов) пробками и защитным колпачком (из алюминиевой фольги, плотной бумаги). Многоразовая посуда, в том числе пробки, должны выдерживать стерилизацию сухим жаром или автокла-вированием.

Пробу отбирают в стерильные емкости с соблюдением правил стерильности. Емкость открывают непосредственно перед отбором, удаляя пробку вместе со стерильным колпачком. Во время отбора пробка и края емкости не должны чего-либо касаться. Ополаскивать посуду запрещается.

При исследовании воды из распределительных сетей отбор проб из крана производят после предварительной его стерилизации обжиганием и последующего спуска воды не менее 10 минут при полностью открытом кране. Если отбирают воду после обеззараживания химическими реагентами, то для нейтрализации остаточного количества дезинфектанта в емкость, предназначенную для отбора проб, до стерилизации вносят натрий серноватистокислый в виде кристаллов или концентрированного раствора из расчета 10 мг на 500 мл воды.

После наполнения емкость закрывают стерильной пробкой и колпачком. Отобранную пробу маркируют и сопровождают актом отбора проб воды с указанием названием пробы, места забора, даты (год, месяц, число, час), цель исследования, куда направляется проба для исследования, подпись лица, взявшего пробу.

Выполнение анализа

Из каждой пробы отобранной воды должен быть сделан посев не менее двух объемов по 1 мл. После тщательного перемешивания пробы воды вносят по 1 мл в стерильные чашки Петри, сразу же в каждую чашку вливают 6—8 мл расплавленного и остуженного до 45—46°С питательного агара. Затем смешивают содержимое чашек, равномерно распределяя по всему дну, избегая образования пузырьков воздуха, попадания агара на края и крышку чашки.

После застывания агара чашки с посевами помещают в термостат при температуре 37 °С на 24 часа.

Выполнение анализа

При исследовании питьевой воды централизованного водоснабжения засевают 3 объема по 100 мл (анализ качественный). При исследованиях воды с целью количественного определения общих колиформных бактерий и при повторном анализе производят посев: 3 объемов по 100 мл, 3 объемов по 10 мл, 3 объемов по 1 мл. Каждый объем исследуемой воды засевают в лактозо-пептонную среду. Посев 100 мл и 10 мл воды производят в 10 и 1 мл концентрированной лак-тозо-пептонной среды, посев 1 мл пробы проводят в 10 мл среды обычной концентрации.

Посевы инкубируют при температуре 37° С в течение 24— 48 часов. После 24 часов инкубации проводят предварительную оценку посевов. Из емкостей, где отмечено наличие роста и образование газа, производят высев на сектора типичных для лактозоположительных бактерий колоний, дают положительный ответ на присутствие общих колиформных бактерий.

Вычисление результатов

При исследовании трех объемов по 100мл результаты оцениваются качественно, и при обнаружении общих или термотолерантных колиформных бактерий хотя бы в одном из трех объемов делают запись в протоколе «обнаружены» в 100 мл.

При исследовании количественным методом, после определения положительных и отрицательных результатов на наличие общих и термотолерантных колиформных бактерий в объемах воды, посеянных в среду накопления, вычисляют наиболее вероятное число бактерий в 100 мл пробы (таблица).

Расчет наиболее вероятного числа бактерий в 100 мл питьевой воды.

Проведение анализа

Накануне проведения анализа необходимо сделать посев Е. coli на косяк с питательным агаром.

Перед проведением анализа сделать смыв бактерий с этого косяка 5 мл стерильной водопроводной воды и по стандарту мутности приготовить взвесь Е, coli в концентрации 109 бактериальных клеток в 1 мл.

Расплавить и остудить до 45°С 2%-и питательный агар.

Исследуемую воду (100 мл) внести в 5 стерильных чашек Петри по 20 мл в каждую. В питательный агар добавить смыв Е. coli из расчета 1, 5 мл смыва бактерий на 150 мл агара и осторожно перемешать. Полученной смесью по 30 мл залить сначала пустую чашку Петри (контроль газона Е. coli), а затем все чашки, содержащие исследуемую воду. Содержимое чашек осторожно перемешать. Чашки оставить при комнатной температуре для застывания, а затем вверх дном поместить в термостат для инкубирования при температуре 37°С.

Учет результатов

Учет результатов проводят путем подсчета и суммирования бляшек, выросших на 5 чашках Петри. Результаты выражают в бляшкообразующих единицах (БОЕ) на 100 мл пробы воды. В контрольной чашке бляшки колифагов должны отсутствовать.

Для проведения текущего контроля качества питьевой воды используют метод определения колифагов.

Колифаги — бактериальные вирусы, способные лизиро-вать Е. coli и формировать при температуре 37 + 1°С через 18 + 2 г зоны лизиса бактериального газона (бляшки) на питательном агаре.

Исследуемую пробу воды (100 мл) и чашку Петри с контролем Е. coli помещают в термостат на 18—20 часов при температуре 37 + 1°С.

Для контроля культуры 0, 1 мл смыва бактерий Е. coli (или 0, 2 мл 4-часовой бульонной культуры) помещают в чашку Петри и заливают питательным агаром.

После инкубации из исследуемой пробы воды в пробирку отливают 10 мл и добавляют 1 мл хлороформа. Пробирку закрывают стерильной резиновой или силиконовой пробкой, энергично встряхивают и оставляют при комнатной температуре не менее 15 мин до полного осаждения хлороформа.

В предварительно расплавленный и остуженный до 45— 49° С питательный агар добавляют приготовленный смыв бактерий Е. coli из расчета 1, 0 мл смыва на 100 мл агара.

В стерильную чашку Петри пипеткой из пробирки переносят 1 мл обработанной хлороформом пробы и заливают смесью расплавленного и остуженного до 45—49°С питательного агара объемом 12—15 мл, а также одну дополнительную чашку Петри для контроля культуры Е. coli, перемешивают и оставляют на столе до полного застывания агара, затем чашки Петри ставят в термостат на 18 + 2 ч при 37°С.

Просмотр посевов осуществляют в проходящем свете. Проба считается положительной при наличии полного лизиса, просветления нескольких бляшек, одной бляшки на чашке с пробой воды при отсутствии зон лизиса на контрольной чашке. При наличии зон лизиса в контроле — результат считается недействительным.

Цифровой отчет:

Сеяла на колифаги – 1

Брала отбор проб воды – 3

Посев методом мембранных дисков – 2

Учет результатов -3

Тринадцатый день моей практики. Санитрно-микробиологический исследования почвы включает определение:

1) Общего количества бактерий, растущих на мясопептонном агаре

2) Санитарно-показательных микроорганизмов- БГКП,

3) Термофильных бактерий.

Отбор и предварительная обработка почв. Для изучения микробного загрязнения на каждые 1000 м² территории выделяют два участка по 25 м² каждый. Один из них должен находиться на чистой территории, другой на предпологаемом участке загрязнения. Отбирают средний образец почвы, состоящих из отдельных проб, взятых в 3-5 точках по диагонали, или в 5 точках взятых под углом ив центре участка. Отдельную пробу берут из поверхностного слоя почвы глубиной до 20-25 см, снимая верхний слой. После чего лопатку прожигают, берут кусок почвы и от него в стерильную посуду отделяют пробу почвы массой 200-300 г. Из отдельных хорошо перемешанных проб почвы составляют средний образец, масса которого не должна быть не менее 1 кг. От среднего образца отделяют 200-300 г. и вносят в стерильную посуду. Затем почву дробят в стерильной ступе, просеивают через стерильное сито, отбирают навеску для исследования от 1-30 г.

Определение общего количества бактерий. Этот показатель имеет условное санитарное- гигиеническое значение. Делают разведения почвенной навески от 1: 10 до 1: 10 000-1: 100 000. Из каждого разведения производят посев 1 мл. в стерильную чашку в которой вносят расплавленный и остуженный до 45⁰С агар, а затем перемешивают. После застывания агара посевы помещают в термостат на 48 часов при 28-30⁰С. Для подсчета выросших колоний берут те разведения при которых на чашке выросло от 50 до 150 колоний. После подсчета колоний делают пересчет на 1 г почвы.

Определение БГКП.

Для определения фекального загрязнения почвы используют 2 метода:

1) Титрационный

2) Метод мембранных фильтров

Определение БГКП в почве титрационным методом. Из первого разведения почвенной суспензии (1: 10) 10 мл засевают в 50 мл среды Кесслера, что соответствует посеву 1г почвы. Из следующих разведений засевают по 1 мл в 9 мл той же среды. Посевы выращивают 48ч при 43⁰С. Отсутствие газообразования и помутнения в бродильных сосудах со средой через 48 ч позволяет дать отрицательный ответ. При наличии в средах газообразования и помутнения или только помутнения производят высев на чашку со средой Эндо. Чашки инкубируют 24ч при 37⁰С. Типичными для кишечных палочек являются колонии красного или розового цвета.

Ускоренное определение кишечных палочек методом мембранных фильтров. Этот метод применяют при исследовании малозагрязненных почв. Через мембранные фильтры пропускают 5-10 мл почвенной суспензии из разведения 1: 10. Дальнейший ход аналогичен определению этим методом кишечных палочек в воде. Результат бактериологического исследования выражают коли-индексом или коли-титром. Под коли-индексом подразумевают количество кишечных палочек в 1 г почвы, под коли-титром наименьший объем почвы, в котором еще обнаруживают кишечную палочку.

Определение термофильных бактерий бактерий. Термофильные бактерии попадают в почву вместе с созревшими органическими удобрениями. Сточные жидкости, испражнения, свежий навоз богат кишечной палочкой, но бедны термофилами. Поэтому содержащие много кишечных палочек и мало термофилов, могут рассматриваться как загрязнения фекалиями. Учет термофильных бактерий производят на агаре, который разливают толстым слоем. Посевы делают из разведений почвы 1: 10-1: 100 000 в количестве 1 мл на две чашки с агаром. Выращивают 24 ч при 60⁰С. Пересчет термофильных микробов на 1 г почвы производят аналогично расчету при изучении общей обсемененности.

В случае необходимости по эпидемиологическим показаниям, определяют наличие в почве патогенных энтеробактерий, возбудителей пищевых токсикоинфекций, проводят санитарно-вирусологическое исследование.

Цифровой отчет:

Определение БГКП- 2

Определние термофильных бактерий- 2

Выписка результатов-2

Цифровой отчет

Отбор пищевых продуктов-4

Выписка направленный-4

Заполнение журнала-1

Выписка результатов-4

Цифровой отчет

Отбор проб молока-3

Выписка направленный-3

Заполнение журнала-1

Выписка результатов-3

Цифровой отчет

Определение бактерии из рода сальмонелл в 25 гр продукта-13

Выписка направленный-13

Заполнение журнала-1

Выписка результатов-13

Исследование на БГКП

Первый день исследования

Взятые смывы засевают на среду Кода. При росте кишечной палочки среда изменяет цвет. При изменении цвета среды исследуемый материал пересевают на среду Эндо.

Второй день исследования

Изучают колонии на среде Эндо. Из подозрительных колоний делают мазки и микроскопируют. Дальше исследование ведут по обычной схеме.

Выявление S. aureus

12 3 4 5 6 7 Следующая ⇒