Определение общего числа микроорганизмов, образующих колонии на питательном агаре

⇐ ПредыдущаяСтр 7 из 7

Метод определяет в питьевой воде общее число мезо-фильных аэробных и факультативно анаэробных микроорганизмов (ОМЧ), способных образовывать колонии на питательном агаре при температуре 37°С в течение 24 часов, видимые с увеличением в 2 раза.

Выполнение анализа

Из каждой пробы отобранной воды должен быть сделан посев не менее двух объемов по 1 мл. После тщательного перемешивания пробы воды вносят по 1 мл в стерильные чашки Петри, сразу же в каждую чашку вливают 6—8 мл расплавленного и остуженного до 45—46°С питательного агара. Затем смешивают содержимое чашек, равномерно распределяя по всему дну, избегая образования пузырьков воздуха, попадания агара на края и крышку чашки.

После застывания агара чашки с посевами помещают в термостат при температуре 37 °С на 24 часа.

Вычисление и представление результатов

Должны быть подсчитаны все выросшие на чашке колонии, наблюдаемые при увеличении в 2 раза. Подсчет следует производить только на тех чашках, на которых выросло не более 300 изолированных колоний.

Подсчитанное количество колоний на каждой чашке суммируют и делят на два. Результат выражают числом колоний образующих единиц (КОЕ) в 1 мл исследуемой пробы воды.

Определение общих и термотолерантных колиформных бактерий титрационным методом

Титрационный метод может быть использован:

- при отсутствии материалов и оборудования, необходимых для выполнения анализа методом мембранной фильтрации; при анализе воды с большим содержанием взвешенных веществ;

- в случае преобладания в воде посторонней микрофлоры, препятствующей получению на фильтрах изолированных колоний общих колиформных бактерий.

Выполнение анализа

При исследовании питьевой воды централизованного водоснабжения засевают 3 объема по 100 мл (анализ качественный). При исследованиях воды с целью количественного определения общих колиформных бактерий и при повторном анализе производят посев: 3 объемов по 100 мл, 3 объемов по 10 мл, 3 объемов по 1 мл. Каждый объем исследуемой воды засевают в лактозо-пептонную среду. Посев 100 мл и 10 мл воды производят в 10 и 1 мл концентрированной лак-тозо-пептонной среды, посев 1 мл пробы проводят в 10 мл среды обычной концентрации.

Посевы инкубируют при температуре 37° С в течение 24— 48 часов. После 24 часов инкубации проводят предварительную оценку посевов. Из емкостей, где отмечено наличие роста и образование газа, производят высев на сектора типичных для лактозоположительных бактерий колоний, дают положительный ответ на присутствие общих колиформных бактерий.

Вычисление результатов

При исследовании трех объемов по 100мл результаты оцениваются качественно, и при обнаружении общих или термотолерантных колиформных бактерий хотя бы в одном из трех объемов делают запись в протоколе «обнаружены» в 100 мл.

При исследовании количественным методом, после определения положительных и отрицательных результатов на наличие общих и термотолерантных колиформных бактерий в объемах воды, посеянных в среду накопления, вычисляют наиболее вероятное число бактерий в 100 мл пробы (таблица).

Расчет наиболее вероятного числа бактерий в 100 мл питьевой воды.

Определение колифагов прямым методом

Проведение анализа

Накануне проведения анализа необходимо сделать посев Е. coli на косяк с питательным агаром.

Перед проведением анализа сделать смыв бактерий с этого косяка 5 мл стерильной водопроводной воды и по стандарту мутности приготовить взвесь Е, coli в концентрации 109 бактериальных клеток в 1 мл.

Расплавить и остудить до 45°С 2%-и питательный агар.

Исследуемую воду (100 мл) внести в 5 стерильных чашек Петри по 20 мл в каждую. В питательный агар добавить смыв Е. coli из расчета 1, 5 мл смыва бактерий на 150 мл агара и осторожно перемешать. Полученной смесью по 30 мл залить сначала пустую чашку Петри (контроль газона Е. coli), а затем все чашки, содержащие исследуемую воду. Содержимое чашек осторожно перемешать. Чашки оставить при комнатной температуре для застывания, а затем вверх дном поместить в термостат для инкубирования при температуре 37°С.

Учет результатов

Учет результатов проводят путем подсчета и суммирования бляшек, выросших на 5 чашках Петри. Результаты выражают в бляшкообразующих единицах (БОЕ) на 100 мл пробы воды. В контрольной чашке бляшки колифагов должны отсутствовать.

Для проведения текущего контроля качества питьевой воды используют метод определения колифагов.

Колифаги — бактериальные вирусы, способные лизиро-вать Е. coli и формировать при температуре 37 + 1°С через 18 + 2 г зоны лизиса бактериального газона (бляшки) на питательном агаре.

Исследуемую пробу воды (100 мл) и чашку Петри с контролем Е. coli помещают в термостат на 18—20 часов при температуре 37 + 1°С.

Для контроля культуры 0, 1 мл смыва бактерий Е. coli (или 0, 2 мл 4-часовой бульонной культуры) помещают в чашку Петри и заливают питательным агаром.

После инкубации из исследуемой пробы воды в пробирку отливают 10 мл и добавляют 1 мл хлороформа. Пробирку закрывают стерильной резиновой или силиконовой пробкой, энергично встряхивают и оставляют при комнатной температуре не менее 15 мин до полного осаждения хлороформа.

В предварительно расплавленный и остуженный до 45— 49° С питательный агар добавляют приготовленный смыв бактерий Е. coli из расчета 1, 0 мл смыва на 100 мл агара.

В стерильную чашку Петри пипеткой из пробирки переносят 1 мл обработанной хлороформом пробы и заливают смесью расплавленного и остуженного до 45—49°С питательного агара объемом 12—15 мл, а также одну дополнительную чашку Петри для контроля культуры Е. coli, перемешивают и оставляют на столе до полного застывания агара, затем чашки Петри ставят в термостат на 18 + 2 ч при 37°С.

Просмотр посевов осуществляют в проходящем свете. Проба считается положительной при наличии полного лизиса, просветления нескольких бляшек, одной бляшки на чашке с пробой воды при отсутствии зон лизиса на контрольной чашке. При наличии зон лизиса в контроле — результат считается недействительным.

Цифровой отчет:

Сеяла на колифаги – 1

Брала отбор проб воды – 3

Посев методом мембранных дисков – 2

Учет результатов -3

Тринадцатый день моей практики. Санитрно-микробиологический исследования почвы включает определение:

1) Общего количества бактерий, растущих на мясопептонном агаре

2) Санитарно-показательных микроорганизмов- БГКП,

3) Термофильных бактерий.

Отбор и предварительная обработка почв. Для изучения микробного загрязнения на каждые 1000 м² территории выделяют два участка по 25 м² каждый. Один из них должен находиться на чистой территории, другой на предпологаемом участке загрязнения. Отбирают средний образец почвы, состоящих из отдельных проб, взятых в 3-5 точках по диагонали, или в 5 точках взятых под углом ив центре участка. Отдельную пробу берут из поверхностного слоя почвы глубиной до 20-25 см, снимая верхний слой. После чего лопатку прожигают, берут кусок почвы и от него в стерильную посуду отделяют пробу почвы массой 200-300 г. Из отдельных хорошо перемешанных проб почвы составляют средний образец, масса которого не должна быть не менее 1 кг. От среднего образца отделяют 200-300 г. и вносят в стерильную посуду. Затем почву дробят в стерильной ступе, просеивают через стерильное сито, отбирают навеску для исследования от 1-30 г.

Определение общего количества бактерий. Этот показатель имеет условное санитарное- гигиеническое значение. Делают разведения почвенной навески от 1: 10 до 1: 10 000-1: 100 000. Из каждого разведения производят посев 1 мл. в стерильную чашку в которой вносят расплавленный и остуженный до 45⁰С агар, а затем перемешивают. После застывания агара посевы помещают в термостат на 48 часов при 28-30⁰С. Для подсчета выросших колоний берут те разведения при которых на чашке выросло от 50 до 150 колоний. После подсчета колоний делают пересчет на 1 г почвы.

Определение БГКП.

Для определения фекального загрязнения почвы используют 2 метода:

1) Титрационный

2) Метод мембранных фильтров

Определение БГКП в почве титрационным методом. Из первого разведения почвенной суспензии (1: 10) 10 мл засевают в 50 мл среды Кесслера, что соответствует посеву 1г почвы. Из следующих разведений засевают по 1 мл в 9 мл той же среды. Посевы выращивают 48ч при 43⁰С. Отсутствие газообразования и помутнения в бродильных сосудах со средой через 48 ч позволяет дать отрицательный ответ. При наличии в средах газообразования и помутнения или только помутнения производят высев на чашку со средой Эндо. Чашки инкубируют 24ч при 37⁰С. Типичными для кишечных палочек являются колонии красного или розового цвета.

Ускоренное определение кишечных палочек методом мембранных фильтров. Этот метод применяют при исследовании малозагрязненных почв. Через мембранные фильтры пропускают 5-10 мл почвенной суспензии из разведения 1: 10. Дальнейший ход аналогичен определению этим методом кишечных палочек в воде. Результат бактериологического исследования выражают коли-индексом или коли-титром. Под коли-индексом подразумевают количество кишечных палочек в 1 г почвы, под коли-титром наименьший объем почвы, в котором еще обнаруживают кишечную палочку.

Определение термофильных бактерий бактерий. Термофильные бактерии попадают в почву вместе с созревшими органическими удобрениями. Сточные жидкости, испражнения, свежий навоз богат кишечной палочкой, но бедны термофилами. Поэтому содержащие много кишечных палочек и мало термофилов, могут рассматриваться как загрязнения фекалиями. Учет термофильных бактерий производят на агаре, который разливают толстым слоем. Посевы делают из разведений почвы 1: 10-1: 100 000 в количестве 1 мл на две чашки с агаром. Выращивают 24 ч при 60⁰С. Пересчет термофильных микробов на 1 г почвы производят аналогично расчету при изучении общей обсемененности.

В случае необходимости по эпидемиологическим показаниям, определяют наличие в почве патогенных энтеробактерий, возбудителей пищевых токсикоинфекций, проводят санитарно-вирусологическое исследование.

Цифровой отчет:

Определение БГКП- 2

Определние термофильных бактерий- 2

Выписка результатов-2

⇐ Предыдущая 1 2 3 4 5 67