Исследование материала на патогенную флору

⇐ ПредыдущаяСтр 4 из 7Следующая ⇒

Цель исследования: выявление и идентификация шигелл для постановки диагноза; выявление бактерионосителей; обнаружение шигелл в пищевых продуктах.

Материалом для исследования могут быть: рвотные массы, промывные воды кишечника, секционный материал, пищевые продукты.В данный момент материалом для исследования служит-испражнения.

1. Сбор материала осуществляется двойной алюминиевой петлей. Петлю вводят в прямую кишку, тампон с материалом промывают в изотоническом растворе натрия хлорида и наносят на дифференциальные среды: Плоскирев, Эндо и Левина.

2.Колонии шигелл на среде Плоскирев -светло-розовые, полупрозрачные, мелкие, нежные, блестящие;

Колонии шигелл на среде Эндо -розовые, нежные, блестящие;

Колонии шигелл на среде Левина -нежные, мелкие, блестящие, с синеватым оттенком.

3. Красят по Грамму и микроскопируют

(видим грамотрицательные палочки с нежными и ровными краями)

4. Проведение ПБДЭ(см.табл)

5. Тест на подвижность(метод висячей капли)

6. Фаготипирование с использованием дезинтерийного бактериофага

7. Дифференциация(для определения вида)-РА с шигеллезными сыворотками. 8. Выдача результатов

Термоста́ т — прибор для поддержания постоянной температуры.

Можно выделить два основных способа работы термостатов:

В термостате поддерживается постоянной температура теплоносителя, заполняющего термостат. Исследуемое тело при этом находится в контакте с теплоносителем и имеет его температуру. В качестве теплоносителя обычно используют воздух, спирт (от − 110 до 60 °C), воду (10—95 °C), масло (− 10 — +300 °C) и др.
Исследуемое тело поддерживается при постоянной температуре в адиабатических условиях (теплоноситель отсутствует). Подвод или отвод теплоты осуществляется специальным тепловым ключом (в термостатах низких температур) или же используются электропечи с терморегулятором и массивным металлическим блоком, в который помещается исследуемое тело (в термостатах высоких температур).

Центрифуги в лабораториях условиях используют с целью разделения твердых фракций от жидкости, а также более тяжелых частиц от менее тяжелых применяется прибор, который называется центрифуга. Помимо этого лабораторная центрифуга используется для разделения нескольких жидкостей, имеющих разные удельные значения веса. основным рабочим элементом данного оборудования является барабан, который содержит несколько отверстий для пробирок. Количество таких отверстий, их размеры и диаметры могут быть различными. Кроме этого лабораторные центрифуги имеют крышку, которая плотно закрывает барабан и имеет, как правило, закручивающий винт. Работа данного оборудования обеспечивается за счет действия мотора, расположенного в основании центрифуги.
Перед началом работы в отверстия барабана, которым оснащена лабораторная центрифуга, вставляют пробирки с исследуемым раствором или сыпучей массой. Мотор прибора обеспечивает вращение его барабана, за счет чего образуется центробежная сила. В результате этого частицы или жидкость с большим удельным весом оседает на дне и по бокам пробирки, а остальная часть раствора или сыпучей массы перемещается к ее центру.
В зависимости от области применения и специфики проводимых анализов лабораторные центрифуги могут обладать различными параметрами, среди которых частота, с которой вращается их барабан, а также размещение барабана в корпусе прибора. Так, центрифуга может иметь горизонтально установленный в ее корпусе барабан или размещенный под каким-либо определенным углом.

Цифровой отчет:

Приготовление мазков-8

Реакция аглютинации-3

Посев на питательную среду Плоскирева-4

Посев на питательную среду Эндо-4

Посев на питательную среду ВСА-6

Центрифугирование-6

Восьмой день практики. Он так же прошел в отеле по кишечным инфекциям .
Изучение свойств микроорганизмов

1)Культуральные свойства - это внешний вид колоний В процессе эксперимента выращивали культуры на плотной питательной среде. Для изучения свойств колоний микробы культивируют на 1, 5-2% мясо-пептонном агаре в чашках Петри. Если выращиваемый микроб на простом агаре не растёт, пользуются специальными зом или через лупу, затем помещают их на столик микроскопа вверх дном и просматривают колонии в проходящем свете с объективом малого увеличения и с суженной диафрагмой. Колонии характеризуют по следующим признакам: величина колонии, её форма, характер контура края, рельеф, поверхность, цвет, структура, консистенция.

2) Ставили опыт на изучение ферментативной активности с целью установления не только типовой и видовой принадлежности микроба, но и определения его вариантов (так называемых биоваров). Основные изучаемые свойства: а)сахаролитическая активность (способность расщеплять углеводы); б)протеолитические свойства (способность расщеплять белки, полипептиды и т.д.); в)гемолитические свойства (способность разрушать эритроциты).

3)Морфологические свойства определяются после окрашивания и микроскопирования фиксированного препарата:

а)основными формами бактерий принято считать шаровидную; палочковидную; извитую;

б)подвижность бактерий обусловлена наличием или отсутствием жгутиков- пилей, наличием или отсутствием скользящего движения.;

в) наличие или отсутствие спор или капсул является характерным морфологическим признаком;

г) Окраска по Грамму является одним из основных морфологических свойств, определяющих ту или иную принадлежность по систематике.

Для выращивания чистых культур микроорганизмов использовались различные питательные среды. Например: желточно -солевой бульон, молочно-солевой агар, трёхсахарный агар, мясо- пептонный агар, среды Кода, Эндо, ВСА ( висмут- сульфид агар ), лактоза с ВР.

Приготовление мазка

1.На подготовленное предметное стекло наносят пастеровской пипеткой или петлей каплю изотонического раствора натрия хлорида(0, 9%).

2.Культуру осторожно снимают петлей и агара в пробирке или чашке Петри и эмульгируют в капле на стекле.

3.Приготовленный мазок должен быть равномерным и не густым. При его высыхании на предметном стекле остается слабый налет.

4.Мазок высушивают при комнатной температуре.

Окраска по Грамму

1.Мазок фиксированный на огне окрашивают через фильтровальную бумагу по Синеву.

2.Прокрашивание длится 1-2 мин.

3.Снимают фильтровальную бумагу по Синеву.

4.Сливают избыток красителя и не промывая препарат водой, наливают раствор Люголя на 1-2 мин до почернения препарата. 5.Раствор Люголя сливают.

6.Предметное стекло с мазком, для обесцвечивания мазка, погружают несколько раз в стаканчик со спиртом 30 секунд. 7.Препарат тщательно промывают водопроводной водой. 8.Докрашивают спиртовым раствором фуксина.

9.Промывают водой и высушивают.

Грамположительные окрашиваются в фиолетовый цвет, а грамотрицательные окрашиваются в красный цвет.

Если грамположительные, то выдаем отрицательный результат, если грамотрицательные, то ставим оксидазный тест(с помощью полосок или дисков).Если оксидаза- положительная, то выдаем отрицательный результат, если оксидаза- отрицательная, то считаем колонии, делаем мазок и красим по Грамму. Если грамотрицательные, то пересеваем на другую среду (среда полужидкая с глюкозой), ставим в термостат на 4-5 ч при температуре 37 градусов и наблюдаем образование кислоты газа.

Если нет газообразования, то ставим в термостат на 24 ч в термостат при температуре 37 градусов. Через сутки смотрим, если есть газообразование, значит результат положительный и считаем коли-индекс (количество E.coli в 1 литре воды).

⇐ Предыдущая 1 2 345 6 7 Следующая ⇒