Медицинская микробиология, вирусология, иммунология

Стр 1 из 6Следующая ⇒

Медицинская микробиология, вирусология, иммунология

Раздел 1

Общий курс

специальность «Лечебное дело»

Студент(а, ки)________________________________________________________

Группа №__________________________________________________________

Преподаватель______________________________________________________

Принятые сокращения и условные обозначения

Аг - антиген

Ат - антитело

БАК - бактерицидная активность кожи

БАСК - бактерицидная активность сыворотки крови

БГКП - бактерии группы кишечная палочка

ВИЧ - вирус иммунодефицита человека

ВОЗ - Всемирная организация здравоохранения

ВСА - висмут- сульфит агар

ГНТ - реакция гиперчувствительности немедленного типа

ГЗТ - реакция гиперчувствительности замедленного типа

ДРТ - доза рабочего титра

ЖСА - желточно-солевой агар

ИФА - иммуноферментный анализ

ЛС - лекарственное сырьё

М.Е. - международная единица

МПА - мясопептонный агар

МПБ - мясопептонный бульон

ОМЧ - общее микробное число

РА - реакция агглютинации

РИФ - реакция иммунной флюоресценции

РН - реакция нейтрализации

РПГА - реакция пассивной гемагглютинации

РП - реакция преципитации

РСК - реакция связывания комплемента

СПИД - синдром приобретенного иммунодефицита

ЦНС - центральная нервная система

ЦПМ - цитоплазматическая мембрана

Ig - иммуноглобулин

Уважаемые студенты, внимательно прочитайте

Правила техники безопасности

Правила поведения в микробиологической лаборатории

Правила работы с исследуемым материалом

СТУДЕНТ ОБЯЗАН соблюдать правила противопожарной безопасности:

КАТЕГОРИЧЕСКИ ЗАПРЕЩАЕТСЯ:

- зажигать одну спиртовку от другой;

- переносить горящую спиртовку;

- оставлять спиртовку горящей после окончания пользования.

В случае воспламенения спирта огонь тушить асбестовой тканью, полотенцем.

СТУДЕНТ ОБЯЗАН соблюдать правила работы с инфицированным материалом:

КАТЕГОРИЧЕСКИ ЗАПРЕЩАЕТСЯ:

- находиться в учебной, микробиологической лаборатории без спецодежды (халат, шапочка, сменная обувь); выпускать из-под одежды волосы, воротнички; класть на столы портфели, сумки

- принимать пищу в учебных лабораториях кафедры; курить строго запрещено!!!

- класть на стол бактериологические петли и другие инструменты;

- оставлять открытыми чашки Петри с культурами микроорганизмов;

- оставлять открытыми пробирки с инфицированным материалом;

- переливать исследуемый материал из одной ёмкости в другую;

- насасывать жидкость в Пастеровскую пипетку ртом;

- разводить дезинфицирующие растворы без перчаток и маски;

- выносить из лаборатории микробные культуры;

ВО ВРЕМЯ РАБОТЫ НЕОБХОДИМО:

- при проведении посевов – не разговаривать и не ходить по лаборатории;

- на всех пробирках и чашках с посевами написать название и дату;

ПО ОКАНЧАНИИ РАБОТЫ НЕОБХОДИМО:

- привести в порядок рабочее место;

- использованные пипетки, предметные и покровные стекла, шпатели, ватные тампоны поместить в сосуд с дезинфицирующим раствором; пинцеты, бактериологические петли, иглы после работы с исследуемым материалом прожигать в пламени горелки;

- все засеянные пробирки и чашки сдать по счету дежурному студенту для помещения в термостат;

- отработанный материал (культуры, микробный материал, трупы зараженных животных) сдать дежурному лаборанту для стерилизации;

- привести в порядок микроскоп;

В случае загрязнения заразным материалом поверхности стола и других предметов, кожи рук и лица – обработать дезинфицирующим раствором, вымыть руки с мылом и, немедленно сообщить о случившимся преподавателю.

ОБЯЗАННОСТИ ДЕЖУРНОГО:

- подготовить кабинет к работе: проверить состояния рабочих мест и дефекты уборки; проветрить помещение;

- пробирки и чашки, засеянные учебной культурой, зарегистрировать в «Журнале учета культур» и сдать лаборанту;

- по окончанию занятия: проверить состояния рабочих мест и дефекты уборки; выключить свет, проветрить помещение;

Порядок хранения, обращения и отпуска патогенных микробов осуществляется преподавателями и учебно-вспомогательтным персоналом кафедры в соответствии со специальной инструкцией Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации

ЗА НЕСОБЛЮДЕНИЕ ПРАВИЛ ТЕХНИКИ БЕЗОПАСНОСТИ СТУДЕНТ ОТСТРАНЯЕТСЯ ОТ ЗАНЯТИЯ

С правилами техники безопасности ознакомлен(а) и обязуюсь выполнять

_________________(подпись)

______________(дата)

Методы антисептической обработки рук лабораторных работников, контаминированных исследуемым материалом, культурами патогенных микробов:

- по окончании работы – руки обрабатывают дезинфицирующим раствором, используют ватные тампоны или марлевые салфетки, смоченные в 70% этиловом спирте;

- последовательность обработки: тыл кисти, ладонная поверхность, межпальцевые пространства т ногтевые ложа, таким образом, с учетом первоначальной обработки менее, а потом наиболее загрязненных мест, вначале обрабатывают левую, а потом правую кисть руки;

- при загрязнении рук культурой патогенного микроба или патологическим материалом сразу же обрабатывают данный участок кожи, покрывая его на 3-5минут ватой, смоченной в дезинфицирующем растворе, после обработки рук раствором их моют теплой водой с мылом.

Дата____________

Тема №1. Морфология микроорганизмов

ЗАНЯТИЕ №1

Правила организации и оборудования микробиологической лаборатории. Морфология эукариотов (грибы, простейшие)

Цель занятия

1. Ознакомиться с принципами организации и оборудования бактериологической лаборатории, правилами работы и соблюдением техники безопасности при работе с микробами.

2. Ознакомиться с основными методами микроскопии, используемыми в микробиологии.

3. Изучить принципы классификации микробов; морфологию грибов.

4. Изучить морфологию грибов и простейших.

СТУДЕНТ ДОЛЖЕН ЗНАТЬ:

1. Предмет и задачи микробиологии в их историческом развитии.

2. Связь микробиологии с другими дисциплинами. Значение микробиологии и иммунологии в подготовке врача.

3. Принципы организации, назначение микробиологической лаборатории.

4. Типы современных микроскопов. Иммерсионная микроскопия.

5. Основные принципы классификации микробов. Грибы (морфология).

6. Методы изучения морфологии грибов и простейших.

СТУДЕНТ ДОЛЖЕН УМЕТЬ:

· обеззараживать отработанный инфицированный материал и контаминированные патогенными микробами объекты внешней среды;

· проводить антисептическую обработку рук;

· работать с иммерсионной системой микроскопа.

СТУДЕНТ ДОЛЖЕН ИМЕТЬ ПРЕДСТАВЛЕНИЕ:

о методах микроскопии:

- люминесцентной

- темнопольной

- фазово-контрастной

- электронной

Работа №1. Структура бактериологической лаборатории, ее оборудование. Техника безопасности

Цель работы: ознакомиться со структурой бактериологической лаборатории и правилами техники безопасности.

Индивидуальная работа: анализ фильма «Структура бактериологической лаборатории»; прочитать теоретическую справку.

Теоретическая справка

Структура бактериологической лаборатории

Работа на кафедре микробиологии и в бактериологической лаборатории требует соблюдения специальных правил, так как исследования проводятся с использованием культур патогенных микроорганизмов и заразного материала от больных и экспериментальных животных.

Соблюдение этих правил необходимо для обеспечения не только личной безопасности, но и безопасности окружающих.

В структуру любой бактериологической лаборатории входят:

· лабораторные комнаты и боксы для работы в асептических условиях;

· специально оборудованное помещение для стерилизации питательных сред, посуды, обеззараживания отработанного инфицированного материала;

· моечная, оборудованная для мытья посуды;

· помещение для приготовления питательных сред;

· виварий – помещение, предназначенное для содержания лабораторных животных. Все помещения лаборатории должны иметь высоту не менее 3 м, быть обеспечены вентиляцией, водопроводом, канализацией, электроэнергией и по возможности газом. Стенды должны быть окрашены масляной краской или покрыты кафельной плиткой, пол – линолеумом (экскурсия по кафедре и баклаборатории).

Оборудование рабочего места

На рабочем столе должно быть все необходимое для работы:

· микроскоп

· иммерсионное масло

· бактериологические петли

· спиртовка

· набор красок

· промывалка и ванна для промывки препаратов

· предметные стекла и салфетки для их промывания

· штатив для пробирок с культурами

· пинцет для извлечения стекол

· фильтровальная бумага для высушивания препаратов

· банка для отработанных стекол

На рабочем месте допускается иметь только рабочую тетрадь, в которой делаются записи и зарисовки.

К Работе№2

Системы микроскопии

сухаяиммерсионная

-между объектом и объективом - между объектом и объекти-

находится воздух; вом - жидкость (масло, вода);

- используется для изучения крупных - используется для изучения

биологических объектов (ботанических, микроорганизмов;

гистологических);

- максимальное увеличение объекти- - увеличение объектива ´ 90;

ва ´ 40;

- создает недостаточную освещенность, - достигается лучшая освещен-

т.к. луч света проходит через неоднород- ность, т.к. иммерсионное масло

ную среду: стекло- воздух; коэффициен- и стекло имеют почти одинаковый

ты преломления лучей света которых коэффициент преломления лучей

соответствуют 1, 52 и 1, 0, в результате света (1, 515 и 1, 52), что создает

чего происходит преломление и однородную среду и рассеивания

отклонение лучей света. лучей света не происходит.

Y Y

линза n=1, 52 линза B n=1, 52

воздух C n=1, 0 масло C n=1, 515

B

стекло n=1, 52 стекло n=1, 52

C C

B B

К Работе№3

Методы изучения

1. Микроскопический – изучение морфологических и тинкториальных свойств.

Методики:

а) Нативные мазки

Для приготовления препаратов, берут волосы, соскобы кожи, обработанный щёлочью, материал помещают на предметное стекло в каплю глицерина. При микроскопии обращают внимание на строение мицелия и органов спороношения.

б) Окрашенные мазки.

Для окраски мазков чаще всего используют простые методы окраски (метиленовый синий), а также методы Грама, Циля – Нильсена, Романовского-Гимза. Приготовление мазков даёт возможность изучить строение мицелия и органов плодоношения, форму дрожжевых клеток. В препарате-мазке, окрашенном метиленовым синим, обращают внимание на форму дрожжевых клеток, наличие почковидных выпячиваний, а также на внутреннее строение клеток. Окончательное заключение видовой принадлежности гриба можно сделать только после культуральных исследований.

Бактериологический – изучение культуральных, биохимических и антигенных свойств.
Кожно-аллергический – постановка кожной пробы.
Серологический – выявление титра антител.
Биологический - постановка биопробы на белых мышах.

Подпись преподавателя_________________________________________________________

ЗАНЯТИЯ № 2 Дата____________

СТУДЕНТ ДОЛЖЕН ИМЕТЬ ПРЕДСТАВЛЕНИЕ

о механизмах окраски структурных компонентов бактерий: клеточной стенки кислотоустойчивых бактерий, спор, капсул, жгутиков, включений.

Работа №1 Морфология прокариот

Цель: сравнить формы и размеры микроорганизмов (см. теоретическую справку - Морфология прокариот)

Результат:

Результат:

Результат:

Вывод:

Работа№2. Изучение структуры клеточной стенки

Цель: изучить структуру клеточной стенки бактерий; освоить технику приготовления фиксированных препаратов.

Схема строения бактериальной клетки:

А) Назвать обязательные компоненты бактериальной клетки и охарактеризовать их

Б) Дать характеристику перечисленных структурных компонентов бактериальной клетки, методы их выявления, охарактеризовать участие в процессах метаболизма и значение структур для процессов репродукции, биосинтеза белка, энергетической, регуляторной, адгезивной функциях клетки.

Структурные компоненты бактериальной клетки и их функции:

Постоянные компоненты и их природа	Функции	Метод выявления
Клеточная стенка Гр + (пептидогликан, тейхоевые кислоты) Гр – ( пептидогликан, фосфолипиды, белки, ЛПС)	1) Скелетная 2) Защитная 3) Рецепторная 4) Антигенная 5) Адгезивная 6) Транспортная 7) Нарушение синтеза клеточной стенки ведет к образованию L-форм	Световая микроскопия, окраска по Граму
ЦПМ Двойной слой фосфолипидов с внедрёнными белками	1) Основной осмотический барьер 2) Участвует в регуляции роста и синтезе компонентов клеточной стенки 3) Транспорт питательных веществ в клетку и метаболитов из нее 4) Инвагинации участков ЦПМ - лизосомы - содержат ферменты, обеспечивающие биологическое окисление	Электронная микроскопия
Лизосомы Производные ЦПМ	1) Аналог митохондрий, у эукариот обеспечивают синтез АТФ и процессы дыхания 2) Участвуют в делении клетки 3) Участвуют в спорообразовании	Электронная микроскопия
Цитоплазма Сложная коллоидная система, состоит из воды, растворимых белков, РНК	Обеспечивает функционирование всех органелл	Электронная микроскопия
Рибосомы 70S	Отвечают за биосинтез белка	Электронная микроскопия
Нуклеоид Двунитевая молекула ДНК, замкнута в кольцо, плотно уложена в виде клубка	Расположен в центральной зоне бактерий (одна хромосома) – носитель генетической информации	Электронная микроскопия

Непостоянные компоненты и их природа	Функции	Метод выявления
Капсула Слизистая структура, прочно связана с клеточной стенкой (полисахариды или полипептиды)	1) Защитная 2) Антигенная 3) Адгезивная	Световая микроскопия, окраска по Бурри, Бурри-Гинсу
Жгутики Состоят из белка-флагеллина, являющимся Н-антигеном Пили Состоят из белка	Обеспечивают движение бактерий Пили 1го порядка обеспечивают адгезию к поражаемой микробной клетки. Пили 2го порядка – конъюгационные, обеспечивают перенос частиц генетического материала от донора к реципиенту	В мазках «висячая капля», «раздавленная капля», при фазово -контрастной микроскопии Электронная микроскопия
Плазмиды Дополнительные факторы наследственности в виде замкнутых колец ДНК с небльшой молекулярной массой	1) Регуляторная – компенсация нарушений метаболизма ДНК клетки хозяина 2) Кодирующая – внесение в бактериальную клетку новой генетической информации	Электронная микроскопия
Включения Гликоген, полисахариды, бета-оксимасляная кислота, полифосфаты (валютин)	Запас питательных веществ	Световая микроскопия. Валютин окрашивают по Леффлеру или Нейссеру
Спора Образуют Гр+ бактерии, из одной клетки образуется спора. Плотная многослойная оболочка, с большим содержанием кальция и липидов низким содержанием воды	Сохранение генетической информации, при неблагоприятных условиях. Расположена: - субтерминально - терминально - центрально	Световая микроскопия, окраска по Ожешко.

Схема построения клеточной стенки:

А) Что изображено на схеме?

Б) Охарактеризовать основные компоненты объекта

В) Дать функциональную характеристику компонентов

Г) Основные различия двух типов

Д) Медицинское значение приведенного анализа?

Работа№3. Техника приготовления нативных (живых) препаратов. Изучение подвижности микроорганизмов

Индивидуальная работа: приготовьте мазок из смеси культур стафилококка и кишечной палочки, с окраской по Граму (см. теоретитечскую справку – Техника приготовления препаратов)

Вывод:

Индивидуальная работа: изучение подвижности микроорганизмов

Результат

Вывод:

Теоретическая справка

К Работе№1

Морфология прокариот

Бактерии - это одноклеточные организмы растительного происхождения, но лишенные хлорофилла. Они относятся к прокариотам, видны в световой микроскоп, размеры их измеряются в микрометрах. Бактерии растут на искусственных питательных средах, размножение происходит бинарным делением.

Бактерии делятся

патогенные(паразиты)условно-патогенныенепатогенные (сапрофиты)

вызывают болезни челове- вызывают заболевания не вызывают забо-

ка, животных, растений при определенных усло- леваний

виях

Морфология - это форма, размер бактерий, расположение клеток в препарате. Различают три морфологических формы бактерий:

Различают три морфологических формы бактерий:

1) кокки 2) палочки 3) извитые

1. Кокки: форма - круглая

размер - мелкие

расположение в препаратах - 6 разновидностей:

а) микрококки б) диплококки в) тетракокки

гонококки пневмококки

г) сарцины в) стафилококки д) стрептококки

2. Палочковидные:

· форма - цилиндр

· размер: длина: толщина:

- крупные - толстые

- средних размеров - тонкие

- мелкие

· концы палочек – закругленные (кишечная палочка)

- прямые (сибиреязвенная палочка)

- в виде утолщения (дифтерийная палочка)

· расположение - беспорядочное

- в цепочку (стрептобактерии)

- попарно (диплобактерии)

- в виде римских цифр II, V, X и т.д.

3. Извитые: форма – спиралевидная:

1. спириллы,

2. кампилобактерии

Теоретическая справка

к Работе№3

Техника приготовления нативных (живых) препаратов

1. Приготовление мазка

1) с жидкой питательной среды 2) с плотной питательной среды

культуру берут петлей и каплю наносят на предметное стекло наносят

непосредственно на стекло (без воды) небольшую каплю воды, в ко-

торой эмульгируют исследуемый

материал и распределяют по

площади около 2 см².

№ препарата пишут на лицевой стороне, а с обратной стороны местонахождения мазка обводят восковым карандашом.

2. Высушивание

на воздухе высоко над пламенем спиртовки

мазком вверх

3. Фиксация

Цель: - прикрепить микробов к стеклу

- обеззаразить патогенные микробы

- убитые микробы лучше окрашиваются

Методы

физическийхимический

- над пламенем спиртовки мазком - более щадящий по сравнению

вверх (3 раза круговыми движениями) с физическим: мазок погружа-

ют в фиксатор (этанол, ацетон, формалин и др.) на определенное время

4. Окраска

Методы

простыесложные

(ориентировочные) (дифференцирующие)

1) окрашивают одним красителем 1) используют несколько краси-

анилинового ряда - основным или телей (основная и вспомога-

кислым: - кислый фуксин тельные краски, обесцвечи-

-эозин вающие жидкости (этанол)

- метиленовый синий - метод Грама

- окраска по Нейссеру

- генциановый фиолетовый - Гинса-Бурри (выявление капсул)

- Циля-Нильсена (выявление

спор)

2) используются для изучения 2) используются для определе-

морфологии микроорганизмов ния не только морфологии, но

и химического состава и струк-

туры микробных клеток

Преимущественно для окраски микроорганизмов используют основные красители, в которых красящий ион - катион.

Краситель наливают на поверхность мазка на определенное время, затем мазок промывают до тех пор, пока струи воды не станут бесцветными, осторожно высушивают фильтровальной бумагой. Если мазок правильно окрашен и промыт, то поле зрения абсолютно прозрачно, а клетки микробов интенсивно окрашен.

Методика окраски по Граму:

1 этап. Используется основная краска генциановый фиолетовый, затем раствор Люголя. Образуется прочное комплексное соединение «генциановый фиолетовый+йод». Все микробы окрашиваются в сине-фиолетовый цвет.

2 этап. Обработка этанолом (дифференциация)

одни микробыдругие микробы

сохраняют комплекс генциановый теряют комплекс генциановый

фиолетовый+йод, не обесцвечиваются фиолетовый+йод, обесцвечиваются. это связано с тем, что: объясняется тем, что:

-клеточная стенка толстая, -клеточная стенка микробов тонкая,

-в ее состав входит много пеп- -пептидогликана мало,

тидогликана,

-имеются тейхоевые кислоты - тейхоевых кислот нет

- по строению клеточная стенка - структура клеточной стенки

представляет собой прочное мозаичная, рыхлая, поэтому

образование, поэтому после обра- после обработки этанолом поры

ботки этанолом поры клеточной остаются прежними, краска

стенки суживаются и краска не - вымывается, микробы обесцве-

вымывается. чиваются

3 этап. Окраска фуксином

одни микробыдругие микробы

остаются сине-фиолетовыми, окрашиваются в красный цвет,

грамположительные: грамотрицательные:

1.Все кокки за исключением 1.Гонококки и менингококки

гонококков и менингококков

2.Все спорообразующие палочки 2.Большинство неспорообразующих

палочек

3.Из неспорообразующих бактерий 3.Спириллы

туберкулезная и дифтерийная палочки

4.Актиномицеты 4.Риккетсии

5.Грибы 5.Микоплазмы

Окраска по методу Грама не используется при изучении спирохет, простейших и вирусов.

Сущность метода окраски по Граму: отношение бактерий к окраске по Граму определяется их способностью удерживать образовавшийся в процессе окраски комплекс генцианового фиолетового и йода. У грамположительных бактерий основным веществом клеточной стенки (до 90%) являются мукопептиды-муреин (пептидогликан). У грамотрицательных бактерий однослойный муреин располагается в глубине клеточной стенки, значительно больше содержится белков и липидов, которые вместе с полисахаридами образуют поверхностные слои в виде мозаики, их цитоплазма содержит РНК и ДНК в соотношении 8: 1 и 1: 1 соответственно. Кроме того, проницаемость клеточной стенки у грамположительных бактерий меньше, чем у грамотрицательных. Это объясняется большим содержанием мукопептида в составе клеточной стенки грамположительных бактерий и меньшим диаметром пор, что способствует удержанию образовавшегося комплекса при обработке бактерий этиловым спиртом.

Методика окраски по методу Романовского-Гимзы:

Краска Романовского-Гимзы состоит из метиленового синего, эозина и азура.

1. На мазок наносят рабочий раствор красителя (2 капли красителя на 1 м дистиллированной воды) на 10-20 мин.

2. Препарат промывают водой и высушивают на воздухе.

Трепонемы окрашиваются в бледно-розовый цвет, боррелии - в фиолетовый цвет, лептоспиры - в розовый цвет. Сапрофитные (непатогенные) формы окрашиваются в синий цвет. Морфологию спирохет изучают также в живом состоянии в фазово-контрастном или темнопольном микроскопе. Хорошим методом выявления спирохет является серебрение по Морозову.

Методика окраски по методу Циля- Нильсена:

1. На фиксированный препарат – мазок нанести карболовый раствор фуксина через полоску фильтровальной бумаги и подогреть до появления паров в течении 3-5 мин;

2. Снять бумагу, промыть мазок водой;

3. Нанести 5% раствор серной кислоты или 3% раствор смеси спирта с хлороводородной кислотой на 1-2 мин до обесцвечивания;

4. Промыть водой;

5. Докрасить мазок водным раствором метиленового синего в течении 3-5 мин;

6. Промыть водой, высушить, микроскопировать.

Методика окраски по методу Ожешко:

1. На нефиксированный мазок нанести 0, 5% раствор хлороводородной кислоты и подогреть на пламени в течении 2-3 мин.

2. Кислоту слить, препарат промыть водой, просушить и фиксировать над пламенем. Затем окрасить по Цилю-Нильсену. Споры бактерий приобретают красный цвет, а вегетативные формы- синий.

СТУДЕНТ ДОЛЖЕН ИМЕТЬ ПРЕДСТАВЛЕНИЕ

о методах окраски для выявления актиномицетов, спирохет, микоплазм, риккетсий, хламидий.

Надцарства ВирусыПрокариотыЭукариоты

(доклеточн., доядерн.) (клеточн., доядерн.) (клеточн., ядерн.)

Царства Вирусы Бактерии грибы простейшие

Хламидии

Ультраструктура

Результат:

12 3 4 5 6 Следующая ⇒