Преимущества иммерсионной системы

1. Большее увеличение (увеличивает в 90 раз вместо 40 в сухой системе микроскопии)

2. Лучшая освещенность за счет создания однородной среды для прохождения лучей света с помощью иммерсионного масла

Правила работы с микроскопом при использовании иммерсионной системы:

1. Настроить освещение микроскопа, используя вогнутое зеркало и объектив.
2. На приготовленный и окрашенный мазок на предметном стекле нанести каплю иммерсионного масла и поместить его на предметный столик, укрепив зажимами.
3. Повернуть револьвер до отметки иммерсионного объектива 90 х.
4. Осторожно погрузить объектив в каплю масла под углом бокового зрения.
5. Установить ориентировочный фокус при помощи макрометрического винта.
6. Провести окончательную фокусировку препарата микрометрическим винтом, вращая его в пределах только одного оборота. Нельзя допускать соприкосновения объектива с препаратом, так как это может повлечь поломку покровного стекла или фронтальной линзы (свободное расстояние иммерсионного объектива 0, 1-1мм).
7. По окончании работы микроскопа необходимо вытереть масло с иммерсионного объектива и перевести револьвер на малый объектив 8х.

 

- Фазово-контрастное устройство может быть установлено на любом микроскопе. Фазово-контрастная микроскопия основана на явлении интерференции света, прошедшего и не прошедшего через объект, и позволяет наблюдать прозрачные объекты, отличающие­ся от окружающей среды (или других структур клетки) по показателю преломления или по толщине и вызывающие изменение фазы прошедшего через них света. Благодаря специ­альному приспособлению в объективе (фазовая пластинка) и в конденсоре (кольцевая диафрагма) эти объекты выглядят более темными (позитивный фазовый контраст) или более светлыми (негативный фазовый контраст) по сравнению с окружающей средой.

- Темнопольная микроскопия (ультрамикроскопия) основана на явлении светорас­сеивания. При темнопольной микроскопии в объектив попадают только лучи, рассеянные объектом, и не попадают прямые лучи от осветителя. Поэтому наблюдаемые микроорга­низмы кажутся ярко светящимися на темном фоне.

 

Темнопольную микроскопию применяют для прижизненного изучения лептоспир, спиро­хет, а также микроорганизмов слишком мелких, чтобы их можно было различить при обычном светлопольном освещении. Для темнопольной микроскопии используют обыч­ные объективы и специальные темнопольные конденсоры.

- Люминесцентная микроскопия основана на использовании явления флюоресцен­ции. Применяют специальные люминесцентные микроскопы или приспособления к обыч­ным микроскопам. Так как большинство микроорганизмов не обладает собственной люминесценцией, то их предварительно окрашивают (флюорохромируют) сильно разве­денными растворами специальных красителей (флюорохромы), которые связываются с определенными структурами клетки.

Люминесцентную микроскопию применяют также для выявления антигенов и антител. С этой целью используют метод иммунофлюоресценции (люминесцентно-серологический метод). Этот метод позволяет выявить в препарате микробы, содержащие определенные антигены. Для их обнаружения необходимо иметь антисыворотки, содержащие антитела к этим антигенам (к антисывороткам химическим путем присоединены молекулы флюоро-хромов - люминесцирующие сыворотки). На фиксированный препарат во влажной камере наносят люминесцирующую сыворотку, инкубируют, промывают раствором хлорида натрия, высушивают и рассматривают в люминесцентном микроскопе. Если в препарате есть микробы, содержащие антиген, антитела к которому были в люминесцирующей сыворотке, они ярко светятся. Остальные микробы не люминесцируют.

- Электронная микроскопия. Изображение в электронном микроскопе образуется не с помощью световых лучей и стеклянных линз, а с помощью потока электронов, который фокусируется электрическим или магнитным полем. Разрешающая способность примерно в 2000 раз больше, чем светового (0, 2 мкм), и с его помощью можно увидеть даже крупные молеку­лы. Применение электронного микроскопа значительно расширило знания о вирусах, фагах и других микроорганизмах.

Теоретическая справка

К Работе№3

Морфология грибов и методы их изучения

I. Грибы – эукариоты. Они имеют хорошо оформленное ядро, митохондрии и вакуоли. Грибная клетка содержит одно или несколько ядер. Клеточная стенка грибов состоит на 80-90% из полисахаридов (45% приходится на хитин) и 10-20% приходится на белки и липиды. Соотношение химических ингредиентов клеточной стенки различных грибов определяет их вирулентность. Строение клеточной стенки определяет выбор антибиотических средств.

II. Выделяют 2 вида грибов: плесени и дрожжи.

1. Основа вегетативного тела плесневых грибов – мицелий, состоящий из ветвящихся гиф. У простейших грибов – зачаточный мицелий, представленный единичной клеткой с тонкими гифообразными отростками. У низших грибов (мукора) – мицелий одноклеточный, обильно ветвящийся, со множеством ядер. У высших грибов (пенициллиума, аспергилла) мицелий разделен перегородками (септами) на отдельные клетки. Гифы плотно переплетаясь образуют ложную ткань. Мицелий гриба, погруженный в субстрат (питательная среда, ткани человека, животных) – вегетативный. Его функция – питание микроорганизма.

2. Более высоко организованными считаются дрожжи и дрожжеподобные грибы. У них мицелий отсутствует, тело в вегетативном состоянии представляет округлую клетку. Дрожжеподобные грибы образуют псевдомицелий. Он отличается от мицелия плесневых грибов тем, что не имеет общей оболочки и перегородок, а состоит из длинных клеток, образующихся путем последовательного бокового или концевого почкования.

3. Важнейшей особенностью грибов является диморфизм. Диморфизм – способность расти в 2 морфологических формах: дрожжевой или мицелиальной.

Трансформация гриба затрудняет диагностику.

1.Грибам присуще 3 типа размножения: вегетативное, бесполое, половое.

 

1). Вегетативное размножение.

На начальном этапе инфекционного процесса, когда необходимо быстро колонизировать поражаемую ткань, гриб размножается почкованием или частями мицелия. Наблюдается фрагментация гиф на отдельные клетки, каждая из которых дает начало новому организму.

При снижении влажности среды, исчерпании питательного субстрата (питательная среда, ткани человека и животных), многие грибы начинает «искать» новый источник питательных веществ и приступают к бесполому размножению.

2). Бесполое размножение осуществляется с помощью экзо- и эндоспор.

Для облегчения распространения споры выносятся над субстратом, формируя репродуктивный мицелий.

Большинство патогенных грибов размножаются экзоспорами или конидиями. Конидии образуются по бокам или на концах обычных, не специализированных гиф из гифальных клеток, либо на специализированных конидиофорах. Морфологические особенности конидий лежат в основе классификации грибов.

Например:

У мукора, споры формируются эндогенно в специализированных органах – спорангиях, расположенных на вершине спорангиеносца. При разрыве спорангия споры высвобождаются, попадают в благоприятные условия и прорастают. У Aspergilla конидиеносцы несептированные, в форме лейки, у Penicilla - септированные в виде кисти рук.

При неблагоприятных условиях гриб формирует хламидоспоры. Хламидоспора – гифальная клетка увеличенных размеров, покрытая плотной оболочкой. Она необходима для сохранения гриба. Образование хламидоспор затрудняет лечение микозов.

3). Половое размножение. Оно дает преимущества грибам: возникают неидентичные особи, способные лучше адаптироваться к условиям обитания и осваивать новые экологические ниши.

 

Методы изучения

 

1. Микроскопический – изучение морфологических и тинкториальных свойств.

 

Методики:

а) Нативные мазки

Для приготовления препаратов, берут волосы, соскобы кожи, обработанный щёлочью, материал помещают на предметное стекло в каплю глицерина. При микроскопии обращают внимание на строение мицелия и органов спороношения.

б) Окрашенные мазки.

Для окраски мазков чаще всего используют простые методы окраски (метиленовый синий), а также методы Грама, Циля – Нильсена, Романовского-Гимза. Приготовление мазков даёт возможность изучить строение мицелия и органов плодоношения, форму дрожжевых клеток. В препарате-мазке, окрашенном метиленовым синим, обращают внимание на форму дрожжевых клеток, наличие почковидных выпячиваний, а также на внутреннее строение клеток. Окончательное заключение видовой принадлежности гриба можно сделать только после культуральных исследований.

1. Бактериологический – изучение культуральных, биохимических и антигенных свойств.
2. Кожно-аллергический – постановка кожной пробы.
3. Серологический – выявление титра антител.
4. Биологический - постановка биопробы на белых мышах.

 

 

Подпись преподавателя_________________________________________________________

ЗАНЯТИЯ № 2 Дата____________

⇐ Предыдущая123456Следующая ⇒

Поделиться:

Популярное:

1. ERP II – ERP-системы второго поколения.
2. I. 49. Основные принципы разработки системы применения удобрений.
3. II. Травматические повреждения нервной системы
4. V2: Тема 7.5 Плащ. Центры первой и второй сигнальных систем. Функциональные системы головного мозга.
5. Абсолютное движение - движение тела относительно условно неподвижной системы отсчета.
6. Автоматизация ресторанов, гостиниц, кинокомплексов, баров, культурно-оздоровительных, бильярдных и боулинг центров на базе системы R-Keeper
7. Автоматизированные системы регистрации
8. Аксиома статики о равновесии системы двух сил. Аксиома параллелограмма сил.
9. Анализ мажоритарной избирательной системы
10. Анализ одноканальной системы массового обслуживания с ожиданием.
11. Анализ рынка и конкурентные преимущества предприятия
12. Анализ устойчивости по ЛАЧХ и ЛФЧХ разомкнутой системы.