Тема 7 «Лабораторная диагностика сибирской язвы»

Цель – формирование практических умений проводить лабораторную диагностику сибирской язвы, формирование знаний о сущности и технике проведения бактериологических и серологических методов исследований, умений выделять биологические особенности возбудителя, работая с лабораторным оборудованием, делать заключение по изученному материалу, навыков работы с источниками информации, сопоставление биологических особенностей сибиреязвенных бацилл

План

1. Патологический материал для лабораторного исследования.

2. Бактериологические методы диагностики сибирской язвы.

3. Серологические методы диагностики сибирской язвы.

Материальное обеспечение: микроскоп, толстые мазки крови, марлевые повязки, краски по Граму, спиртовки, сибиреязвенный антиген, сибиреязвенная преципитирующая сыворотка, экстракт из кож, уленгутовские пробирки и воронки, пастеровские пипетки, культура возбудителя сибирской язвы на МПА, МПБ, МПЖ, спички, тампоны с 70 %-ым спиртом, пробы кожевенно-мехового сырья, набор для постановки реакции преципитации (РП). Биологические препараты: антиген сибиреязвенный, преципитирующая сибиреязвенная сыворотка, вакцины, гипериммунная сыворотка. Таблицы (Морфология возбудителя сибирской язвы; Характер роста на питательных средах МПБ, МПЖ, МПА; РП).

Теоретический материал

Сибирская язва (Anthrax) – зооантропоноз. К ней восприимчивы животные многих видов, особенно травоядные, и человек. Инфекционный процесс протекает преимущественно остро с явлениями септицемии или с образованием различной величины карбункулов. Возбудитель сибирской язвы – Bacillus anthracis (Koch, 1872) – типичный представитель патогенных бацилл. Относится к семейству Bacillaceae и роду Bacillus. Этот микроб часто называют бациллой антракса.

В случае гибели животных с подозрением на сибирскую язву трупы вскрывать запрещено – их сжигают. Для лабораторного исследования отправляют ушную раковину с нижней стороны (на которой лежал труп). Предварительно ухо перевязывают в двух местах крепким шпагатом, отрезают, место отреза немедленно прижигают, чтобы предотвратить истечение крови и обсеменение почвы возбудителем (споры сибиреязвенных бацилл сохраняются в почве сотни лет). Ухо заворачивают в марлю, пропитанную 3%-ным раствором борной кислоты, помещают в двойной полиэтиленовый мешочек и транспортируют в герметичной емкости.

В лабораторию можно направлять толстые мазки крови из надреза сосудов уха, мазки кладут в чашки Петри или другую емкость, на которой делают надпись: «Мазок не фиксирован!».

При возникновении подозрения на сибирскую язву во время убоя и переработки туш, убой немедленно приостанавливают, берут пробу из измененных органов и тканей и немедленно направляют в лабораторию.

От свиней направляют заглоточные и подчелюстные лимфоузлы, отечную ткань в области шеи, так как у них болезнь протекает в ангинозной форме. Таким же образом поступают при поступлении туш мяса на рынки.

В лаборатории из доставленного материала немедленно готовят мазки, окрашенные по Граму и специальным методом на капсулу (Ольта, Михина). При обнаружении в мазках цепочек крупных Гр+ палочек, окруженных капсулой, немедленно дают предварительный ответ по месту гибели животных, убоя или экспертизы, ставят в известность ветеринарную и медицинскую службу.

Сибиреязвенную тушу со шкурой и органами отправляют на утилизацию. Утилизируют также и продукты убоя.

Исследованию на сибирскую язву подлежит также мясо, полученное от вынужденно убитых животных.

При необходимости исследуют пробы почвы (особенно в местах старых скотомогильников), пробы воды и других объектов внешней среды.

Порядок исследования.

1. Микроскопия мазков из исследуемого материала, окрашенных по Граму и специальным методом на капсулу. В мазках из патологического материала, из крови, органов обнаруживают короткие цепочки Гр+ палочек, окруженных капсулой. (Необходимо иметь в виду, что капсула образуется только в организме!). Для обнаружения (индикации) возбудителей сибирской язвы во внешней среде используют метод флюоресцирующих антител (МФА).

2. Выделение чистой культуры возбудителя проводят путем посева на обычные питательные среды МПБ, МПА, МПЖ, на которых наблюдается характерный рост.

На МПБ – бульон прозрачный, на дне осадок в виде комочка ваты из переплетенных длинных цепочек палочек.

На МПА – крупные шероховатые колонии с бахромчатыми краями. Под малым увеличением напоминают гриву льва, локоны волос, голову медузы Горгоны.

На МПЖ – при посеве уколом рост в виде «перевернутой» елочки, так как микроб является аэробом. При необходимости выделенную культуру дифференцируют от почвенных спорообразующих бацилл, имеющих схожие морфологические и культуральные свойства. Это Bacillus anthracoides, Bac. pseudoanthracis и др, которые не патогенны.

3. Биопроба проводится путем заражения белых мышей эмульсией из материала в дозе 0,2 – 0,5 мл, подкожно, в области корня хвоста, кроликам 0,3 мл. Гибель наблюдается в течение 1 – 3-х суток. Из органов павших животных делают мазки и посев на питательные среды.

4. Серологический метод – РП, основан на обнаружении в материале сибиреязвенного антигена, образующегося при гибели и разрушении микробных клеток. При этом, из патологического материала или кожевенного сырья готовят экстракт (вытяжку) путем кипячения в течение 30 мин или настаивания в течение 16 – 18 ч. Если требуется срочный ответ, то путем кипячения. Полученный экстракт фильтруют и используют в качестве материала для обнаружения сибиреязвенного антигена. РП ставят методом наслаивания или подслаивания.

Предварительный ответ ставят на основании микроскопии, окончательный – на основании выделения чистой культуры возбудителя и положительной биопробы. Срок исследования при положительном ответе до 3-х суток, при отрицательном – до 10 суток.

Теоретический материал по теме занятия студенты конспектируют в тетрадь и выполняют практические задания.

Практическое задание 1: Составьте схему проведения лабораторного исследования на сибирскую язву.

Этапы выполнения задания:

1 Отберите патологический материал для бактериологического и серологического исследований.

2 Определите последовательность и технику выполнения бактериологических методов диагностики.

3 Определите необходимость и порядок выполнения серологического исследования биоматериалов.

4 Схему исследования зарисуйте в тетрадь.

Практическое задание 2: Определите морфологические и тинкториальные свойства микробной культуры.

Этапы выполнения задания:

1 Приготовьте мазки-препараты (3 штуки) из биоматериала (толстый мазок крови), зафиксируйте их.

2 Окрасьте первый мазок-препарат по методу Грама.

3 Окрасьте второй мазок по Михину.

4 Окрасьте третий мазок по Пешкову или Златогорову.

5 Микроскопируйте окрашенные препараты, зарисуйте и опишите морфологические особенности возбудителя в тетрадь, отчитайтесь преподавателю.

Практическое задание 3: Определите культуральные свойства микробной культуры.

Этапы выполнения задания:

1 Опишите характер роста микробной культуры на среде МПБ.

2 Опишите характер роста микробной культуры на среде МПА.

3 Опишите характер роста микробной культуры на среде МПЖ.

4 Проанализируйте культуральные свойства изученной микробной культуры и сделайте заключение о соответствии ее сибириязвенным бациллам

Практическое задание 4: Проведите серологическое исследование кожевенно-мехового сырья на сибирскую язву.

Этапы выполнения задания:

1 Подготовьте компоненты реакции преципитации к исследованию.

2 Поставьте реакцию преципитации (РП) по Асколи и проведите ее учет.

3 Зарисуйте результаты реакции в контрольной и опытной пробирках, обозначив компоненты реакции.

Практическое задание 5: Проведите контроль биологических препаратов, применяемых при сибирской язве.

Этапы выполнения задания:

1 Определите назначение биологического препарата (диагностические, профилактические, лечебные), способ применения.

2 Определите пригодность препарата к использованию, обратите внимание на срок годности препарата, целостность упаковки, соответствие содержимого ампулы (флакона и др.) описанию в наставлении к препарату.

3 Полученные результаты внесите в таблицу рабочей тетради, проанализируйте и сделайте заключение по каждому препарату.

Вопросы и задания для контроля знаний. 1 Какими морфологическими особенностями обладает возбудитель сибирской язвы. 2 Чем обусловлена высокая устойчивость возбудителя во внешней среде. 3 Назовите методы лабораторной диагностики сибирской язвы. 4 Какие лабораторные животные восприимчивы к возбудителю сибирской язвы? 5 Назовите биологические препараты, применяемые при сибирской язве. 6 При каких условиях и где возбудитель образует спору и капсулу? 7 На основании результатов каких исследований, устанавливают окончательный диагноз на сибирскую язву? 8 Какой биоматериал берут от трупа животного при подозрении на сибирскую язву? 9 В каком случае обязательно проводить исследование кожевенно-мехового сырья на сибирскую язву?

⇐ Предыдущая45678910111213Следующая ⇒

Поделиться: