Тема 10 «Лабораторная диагностика туберкулеза»

Цель – формирование практических умений проводить лабораторную диагностику туберкулеза, формирование знаний о сущности и технике проведения прижизненной и посмертной диагностики, умений выделять биологические особенности возбудителя, работая с лабораторным оборудованием, делать заключение по изученному материалу, навыков работы с источниками информации, сопоставление биологических особенностей микробактерий.

План

1. Патологический материал для лабораторного исследования.

2. Бактериологические методы диагностики туберкулеза.

3. Аллергическая диагностика туберкулеза.

Материальное обеспечение: пробы биоматериала (лимф. узел, молоко, вода, почва), стерильная ступка с пестиком, градуированные пипетки стерильные емкостью1 и 2 мл, пробирка со стерильным песком, пробирка стерильная центрифужная, весы для уравновешивания пробирок, спиртовка, набор растворов красителей для окрашивания по методу Циля-Нильсена, кювета с «мостиком», вода дистиллированная, биопрепараты (туберкулин ППД для млекопитающих и птиц, вакцина из штамма БЦЖ), стерилизатор со стерильными инструментами, бикс с марлевыми повязками, колба с физ. раствором, колба с 3%-ным раствором серной кислоты, готовые мазки микобактерий, окрашенные по Цилю-Нильсену, предметные стекла. среда Левенштейна-Йенсена в пробирках и флаконе, спиртовые тампоны, марлевые повязки. Таблицы (Морфология микобактерий (окраска по Цилю- Нильсену); Схема лабораторной диагностики туберкулеза).

Теоретический материал

Туберкулез – хронически протекающая инфекционная болезнь многих видов сельскохозяйственных, диких животных, в том числе птиц, а также человека. Патолого-анатомически болезнь характеризуется образованием в органах и тканях туберкул, склонных к творожистому распаду. Возбудитель: Myc. tuberculosis - человека, Myc. bovis – крупного рогатого скота, Myc. avium – птиц.

Диагностика туберкулеза подразделяется на прижизненную и посмертную. Диагноз на туберкулез устанавливают комплексно, применяют клинический, патолого-анатомический, гистологический, аллергический и лабораторные методы. Разработаны методики и современных методов диагностики туберкулеза ДНК-ДНК гибридизация и ПЦР. Первичный диагноз на туберкулез установить сложно. У человека применяют флюорографию. У животных основным прижизненным методом массовой диагностики служит аллергический.

Лабораторная диагностика. Выделить возбудителя туберкулеза в чистом виде трудно. Успех во многом зависит от характера исследуемого материала. В качестве последнего можно использовать пораженные органы и ткани, гной, молоко, масло, творог, мочу, фекалии, навоз, почву, воду, соскобы с различных объектов животноводческих помещений и т.п. В каждом случае перед посевом необходимо выбирать соответствующий метод обработки исследуемого материала.

Для освобождения от посторонней микрофлоры исследуемый материал (молоко, мочу, слизь, пораженные органы и ткани) обрабатывают 6-10%-ным раствором серной кислоты (метод Гона). Общее воздействие раствора серной кислоты на материал не должно превышать 25-30 мин.

Для обработки жидкого, полужидкого материала и соскобов с объектов среды обитания животных используют метод флотации. Сущность метода заключается в том, что исследуемый материал взбалтывают в колбе с углеводородами (бензол, бензин и др.) и всплывающий слой пены, то есть флотат, содержащий микобактерии туберкулеза, используют для приготовления мазков, посевов на питательные среды, заражения лабораторных животных.

При убое животных, положительно реагирующих на туберкулин, и отсутствии патологоанатомических изменений в лимфатических узлах, тканях и органах туберкулезного характера, туши выпускают без ограничений, шкуры – без дезинфекции.

Молоко от коров неблагополучных по туберкулезу, обезвреживают в хозяйстве при 90⁰С в течение 5 мин или при 85⁰С в течение 30 мин, после чего отправляют на молокозавод, где его подвергают повторной пастеризации при обычном режиме. Запрещается продажа молока и молочных продуктов на рынке из неблагополучных по туберкулезу хозяйств и от клинически больных и положительно реагирующих на туберкулез животных частного сектора.

Полностью туша и все другие продукты убоя направляются на утилизацию в двух случаях: первый – когда туши имеют тощую упитанность, любую форму поражения туберкулезом органов или лимфатических узлов, второй - при обнаружении генерализованного туберкулезного процесса независимо от упитанности.

Аллергическая диагностика туберкулеза. В практике ведущее значение для прижизненного распознавания туберкулеза у животных и птиц имеет аллергическая диагностика при помощи туберкулина (Р.Кох, 1890). Следует указать, что еще до сообщения Коха в России Гельман в 1888-1889 гг. изготовил экстракт из туберкулезных бактерий и испытал его с диагностической целью на больных туберкулезом коровах, получив при этом положительный результат. Диагностика с помощью туберкулина завоевала прочное положение в медицине и ветеринарии. В настоящее время основным методом проверки животных на туберкулез является внутрикожная туберкулиновая проба. Для изготовления туберкулинов для млекопитающих используют штаммы только одного бычьего вида. Применяют сухой очищенный туберкулин (протеин-пурифиед-дериват – ППД) или раствор туберкулина.

Теоретический материал по теме занятия студенты конспектируют в тетрадь и выполняют практические задания.

Практическое задание 1: Составьте схему проведения лабораторного исследования патологического материала на туберкулез.

Этапы выполнения задания:

1 Отберите патологический материал для бактериологического исследования.

2 Определите последовательность и технику выполнения бактериологических методов диагностики.

3 Определите необходимость и порядок выполнения серологического исследования биоматериалов.

4 Схему исследования зарисуйте в тетрадь.

Практическое задание 2: Подготовьте представленный биоматериал (лимф. узлы, молоко, вода, почва) к бактериологическому исследованию.

1 Измельчите биоматериал в ступке, разотрите его со стерильным песком.

2 Залейте 3%-ным раствором серной кислоты на 15-20 минут.

3 Удалите кислоту с помощью пипетки, отмойте материал стерильным физиологическим раствором.

4 Перенесите материал в центрифужные пробирки и центрифугируйте.

5 Повторите обработку физиологическим раствором 2-3 раза. Полученный осадок используйте для посева и микроскопического исследования.

Практическое задание 3: Определите морфологические и тинкториальные свойства микробной культуры, обнаруженной в мазках.

Этапы выполнения задания:

1 Приготовьте мазки-отпечатки из лимфатических узлов и мазок из осадка (центрифугата), зафиксируйте их.

2 Окрасьте мазки по методу Циля-Нильсена.

3 Микроскопируйте окрашенные препараты, зарисуйте и опишите морфологические особенности возбудителя в тетрадь, отчитайтесь преподавателю.

Практическое задание 4: Проведите контроль биологических препаратов, применяемых при туберкулезе.

Этапы выполнения задания:

1 Определите назначение биологического препарата (диагностические, профилактические, лечебные), способ применения.

2 Определите пригодность препарата к использованию, обратите внимание на срок годности препарата, целостность упаковки, соответствие содержимого ампулы (флакона и др.) описанию в наставлении к препарату.

3 Полученные результаты внесите в таблицу рабочей тетради, проанализируйте и сделайте заключение по каждому препарату.

Вопросы и задания для контроля знаний. 1 Назовите морфологические и тинкториальные особенности М.bovis, M. tuberculosis, M. avium. 2 Какие питательные среды применяют для культивирования микобактерий? 3 Назовите отличительные особенности культуральных свойств видов микобактерий. 4 Как проводят идентификацию видов микобактерий туберкулеза при лабораторной диагностике? 5 В чем заключаются особенности биопробы при диагностике туберкулеза? 6 Какой биологический материал используют при бактериологическом исследовании на туберкулез? 7 С какой целью обрабатывают патологический материал слабыми растворами кислот перед исследованием? 8 Какие правила асептики и личной профилактики необходимо выполнять при работе с биоматериалом, инфицированным патогенными микобактериями? 10 Как проводят прижизненную диагностику туберкулеза у животных?

⇐ Предыдущая78910111213141516Следующая ⇒

Поделиться: