Тема 8 «Лабораторная диагностика колибактериоза и сальмонеллезов»

Цель – формирование практических умений проводить лабораторную диагностику колибактериоза и сальмонеллезов, формирование знаний о сущности и технике проведения бактериологических и серологических методов исследований, умений выделять биологические особенности возбудителей, работая с лабораторным оборудованием, делать заключение по изученному материалу, навыков работы с источниками информации, сопоставление биологических особенностей разных видов сальмонелл и эшерихий.

План

1. Патологический материал для лабораторного исследования кишечных инфекций.

2. Бактериологические методы диагностики колибактериоза и сальмонеллеза.

3. Серологические методы типизации энтеробактерий.

Материальное обеспечение: готовые мазки E. сoli, окрашенные по Граму, культуры E. сoli и Salmonella на агаре Эндо, МПА, МПБ, биопрепараты профилактические, лечебно-профилактические, диагностические, тампоны с 70 % спиртом, исследуемый биоматериал (фекалии), взвесь культуры E. сoli в пробирке, питательные среды Эндо, Левина, Симмонса, кровяной агар, агар с сернокислым железом, кюветы с «мостиком», дистиллированная вода, пипетки градуированные (1, 2 мл), бактериологическая петля, спиртовка, растворы красок (по Граму), физ. раствор. Таблицы (Схема исследования биоматериала на сальмонеллез. Серологическая классификация сальмонелл. Бактериологическая диагностика колисальмонеллезов. Дифференциация кишечных бактерий. Схема диагностики пуллороза-тифа птиц. Ферментативная активность представителей рода Эшерихия и Сальмонелла).

Теоретический материал

Диагностику колибактериоза определяют по клиническим, патологоанатомическим и эпизоотологическим данным, с обязательным подтверждением лабораторным исследованием.

Бактериологическое исследование. Для бактериологического исследования в лабораторию направляют патологический материал: для прижизненной диагностики – фекалии от больных животных, которые берут из прямой кишки в стеклянные пробирки стеклянной палочкой; для посмертной диагностики - свежий труп или трубчатую кость, отрезок кишечника перевязанного с двух концов, кусок печени, селезенки, почку, брыжеечные лимфоузлы. При вскрытии трупа в лаборатории помимо указанного материала исследуют также кровь из сердца и головной мозг. Если в лабораторию не представляется в кротчайший срок доставить материал. Его консервируют: фекалии - раствором стерильного глицерина с NaCl, кусочки внутренних органов в 30%-ном водном растворе глицерина или 10%-ном растворе NaCl.

В лаборатории проводят комплексное исследование поступившего материала.

При микроскопии мазков из органов и крови обнаруживают палочки с закругленными краями, расположенные одиночно, по Граму окрашиваются отрицательно.

Для выделения культур эшерихий используют МПА, МПБ, а также среды специального назначения: Эндо, Левина, Симонса, Кларка и др.

На МПА через 18…20ч вырастают влажные круглые колонии с ровными краями и гладкой поверхностью. В жидкой среде рост эшерихий проявляется равномерным помутнением с образованием осадка. Некоторые штаммы обладают гемолитическими свойствами.

На среде Эндо образует три типа колоний:

1) малиновые с металлическим блеском;

2) малиновые с розовым блеском;

3) розовые.

На среде Левина дает рост в виде колоний темнофиолетового цвета.

На среде Симсона не растут: цвет ее не изменяется. На среде Кларка: розово-красное окрашивание учитывают как положительный результат, желтое как отрицательный. Глюкозу и лактозу сбраживает с образованием кислоты и газа. Обесцвечивают метиленовую синь в молоке, молоко свертывает, образует индол. Реакция с метилротом положительная, проба Фогеса-Проскауэра отрицательная. Основываясь на морфологических и культурально - биохимических свойствах, проводят межвидовую дифференциацию. Выделенную культуру типируют в РА, используя типоспецифические агглютинирующие коли-сыворотки.

Биопроба. Выделенные культуры проверяют на патогенность, заражая внутрибрюшинно белых мышей.

Диагноз на колибактериоз считают установленным, если культуру возбудителя изолируют из селезенки, трубчатой кости или из головного мозга. Болезнь также подтверждается, если выделенная культура эшерихий из других органов вызывает гибель белых мышей. В большинстве случаев E.coli , выделенные из трупа или фекалий больных коли-инфекций животных, патогенны для мышей.

Серологические исследования

Кроме бактериологического исследования, диагноз устанавливают ускоренными методами. В этих целях применяют иммунохимический метод, путем постановки РДП или РИФ. При этом с помощью реакции иммунофлюоресценции можно ставить диагноз через 2-4 часа.

Помимо общепринятого микробиологического исследования существуют также дополнительные методы диагностики. Например, люминесцентно-серологический метод используют как ориентировочный для определения патогенных серотипов E.coli при массовых вспышках желудочно-кишечных заболеваний. Этот метод позволяет за короткий срок получить предварительные результаты.

Колибактериоз следует дифференцировать от диареи незаразного происхождения, сальмонеллеза, стрептококкоза, пастереллёза, некоторых вирусных инфекций.

Бактериологическая прижизненная диагностика сальмонеллезов основана на исследовании крови в первые четыре дня заболевания (для выделения гемокультуры) и фекалий. Начиная с 14-го дня болезни, посылают сыворотку крови для серологического исследования и установления титра специфических антител.

Посмертно в лабораторию направляют паренхиматозные органы или части их (печень с желчным пузырем), мезентеральные лимфатические узлы.

Полученный материал засевают в МПБ, на МПА, дифференциальные и элективные среды – Эндо, Плоскирева или висмут-сульфитный агар. При подозрении на хроническое течение болезни дополнительно высевают материал на одну из сред накопления (селенитовую, Мюллера).

При подтверждении диагноза тушки истощенных птиц, а также внутренние органы, имеющие патологоанатомические изменения, направляют на утилизацию. При поражении только внутренних органов тушки используют после проваривания для переработки на консервы, а внутренние органы утилизируют. Перо и пух дезинфицируют.

Яйца от неблагополучных по сальмонеллезу кур, индеек направляют на пищевые предприятия для приготовления хлебобулочных, кондитерских изделий, выпекаемых при высокой температуре.

Теоретический материал по теме занятия студенты конспектируют в тетрадь и выполняют практические задания.

Практическое задание 1: Составьте схему проведения лабораторного исследования на сальмонеллез и колибактериоз (эшерихиоз).

Этапы выполнения задания:

1 Отберите патологический материал для бактериологического исследования.

2 Определите последовательность и технику выполнения бактериологических методов диагностики.

3 Определите порядок серологического типирования выделенных из биоматериала микробных культур.

4 Схемы исследований зарисуйте в тетрадь.

Практическое задание 2: Определите морфологические и тинкториальные свойства микробной культуры.

Этапы выполнения задания:

1 Приготовьте мазки-препараты из смыва агаровой культуры E. сoli, зафиксируйте их.

2 Окрасьте мазки-препараты по методу Грама.

3 Микроскопируйте окрашенные препараты, зарисуйте и опишите морфологические особенности возбудителя в тетрадь, отчитайтесь преподавателю.

Практическое задание 3: Определите культуральные свойства микробных культур.

Этапы выполнения задания:

1 Опишите характер роста микробной культуры на среде МПБ.

2 Опишите характер роста микробной культуры на среде МПА.

3 Опишите характер роста микробной культуры на дифференциальных средах.

4 Проанализируйте культуральные свойства изученной микробной культуры и сделайте заключение о соответствии ее сальмонеллам или кишечной палочки.

Практическое задание 4: Проведите типизацию микробной культуры.

Этапы выполнения задания:

1 Проведите учет сахаролитических свойств микробных культур.

2 Проведите учет протеолитических свойств микробных культур.

3 Анализируйте полученные результаты, определите вид микроорганизма, отчитайтесь преподавателю.

Практическое задание 5: Проведите посев фекалий на дифференциально-диагностическую среду.

Этапы выполнения задания:

1 Приготовьте взвесь фекалий животных, оставьте их отстояться.

2 Проведите посев надосадочной жидкости фекальной взвеси бактериологической петлей частыми штрихами на агар Эндо.

3 На следующем занятии проведите учет и оценку роста микроорганизмов на агаре Эндо, отчитайтесь преподавателю, пояснив, что дает посев штрихом.

Практическое задание 6: Проведите контроль биологических препаратов, применяемых при кишечных инфекциях.

Этапы выполнения задания:

1 Определите назначение биологического препарата (диагностические, профилактические, лечебные), способ применения.

2 Определите пригодность препарата к использованию, обратите внимание на срок годности препарата, целостность упаковки, соответствие содержимого ампулы (флакона и др.) описанию в наставлении к препарату.

3 Полученные результаты внесите в таблицу рабочей тетради, проанализируйте и сделайте заключение по каждому препарату.

Вопросы и задания для контроля знаний. 1 Перечислите патологический материал, направляемый для бактериологического исследования на эшерихиоз, и требования к нему. 2 Назовите питательные среды, используемые для выделения и дифференциации кишечной палочки. 3 Поясните порядок бактериологического исследования различных видов биоматериала на наличие возбудителя эшерихиоза. 4, Каково практическое использование знаний об антигенной структуре кишечной палочки? 5 В чем заключается серологическая типизация энтеропатогенных штаммов эшерихий по адгезивным и соматическим О-антигенам. 6 По каким признакам дифференцируют кишечную палочку от сальмонелл? 7 Какими штаммами кишечной палочки вызывается отечная болезнь поросят? 8 В каких случаях считается установленным бактериологический диагноз на колибактериоз? 9 Дайте характеристику биопрепаратам, применяемым для диагностики, лечения и профилактики колибактериоза (эшерихиозов) и сальмонеллезов. 10 Какой биоматериал направляют для бактериологического исследования на сальмонеллез? 11 Какие питательные среды используют для выделения и дифференциации сальмонелл? 12 Поясните порядок бактериологического исследования различных видов биоматериала на наличие сальмонелл. 13 Какова антигенная структура сальмонелл, её практическое использование? 14 Каким методом определяют серогруппу сальмонелл? 15 По каким признакам дифференцируют сальмонеллы от эшерихий?

⇐ Предыдущая567891011121314Следующая ⇒

Поделиться: