Фильтрование воды. В верхнюю часть прибора для фильтрования наливают точно отмеренный объем воды, затем создают вакуум в нижней части прибора.

При посеве нескольких объемов одной пробы следует фильтровать через один фильтровальный аппарат сначала меньшие, а затем большие объемы воды, меняя каждый раз фильтры.

При фильтровании 1 мл исследуемой воды или ее разбавления следует в воронку налить предварительно не менее 10 мл стерильной водопроводной воды, а затем внести анализируемую воду.

После окончания фильтрования воронку снимают, фильтр осторожно приподнимают за край фламбированным пинцетом при сохранении вакуума для удаления излишка воды на нижней стороне фильтра, а затем переносят его, не переворачивая, на питательную среду, разлитую в чашки Петри, избегая пузырьков воздуха между средой и фильтром. Поверхность фильтра с осевшими на ней бактериями должна быть обращена вверх. Вакуум отключают до внесения следующей порции анализируемой воды.

Под каждым фильтром на дне чашки делают надпись с указанием объема профильтрованной воды, даты посева и номера пробы. На одну чашку можно поместить 3 – 4 фильтра с условием, чтобы фильтры не соприкасались.

Если исследуемая вода содержит большое количество взвешенных веществ, то ее фильтруют сначала через предварительный мембранный фильтр для удаления крупной взвеси, который помещают в фильтровальный прибор, накладывая на фильтр для бактериологического анализа. После окончания фильтрования фильтры переносят на плотную питательную среду раздельно и при выведении результатов анализа учитывают колонии, выросшие на обоих фильтрах.

Бактериологический анализ воды включает в себя определение:

- общего числа микроорганизмов

- общих и термотолерантных колиформных бактерий

- спор сульфитредуцирующих клостридий

- колифагов

1 Определение общего числа микроорганизмов, образующих колонии на питательном агаре.

Сущность метода. Метод определения общего микробного числа (ОМЧ) основан на способности мезофильных аэробных и факультативно анаэробных микроорганизмов расти на питательном агаре при температуре 37^˚С в течение 24 часов, с образованием видимых колоний при увеличении в 2 раза (под лупой).

Из каждой пробы делают посев не менее двух объемов по 1 мл в стерильные чашки Петри, слегка приоткрывая крышку. Сразу после внесения воды в каждую чашку вливают 6 – 8 мл расплавленного и остуженного до 45˚С МПА после фламбирования края пробирки, в которой он содержится. Содержимое быстро смешивают круговыми вращениями чашки на столе и оставляют до застывания агара. Попадание агара на крышку и края чашки не допускают.

После застывания агара чашки с посевами помещают в термостат вверх дном при температуре 37 ± 1˚С на 24 ± 2 часа.

Оценка результатов. Подсчет выросших колоний проводят на всех чашках при увеличении в 2 раза (под лупой), на которых выросло не более 300 колоний.

Количество колоний на каждой чашке суммируют и делят на 2. Результат выражают в колониеобразующих единицах (КОЕ) в 1 мл исследуемой воды.

Если на одной из чашек подсчет колоний невозможен, ответ дают по результатам одной чашки.

В случае роста расплывчатых колоний на всех чашках, не распространяющихся на всю поверхность чашки, или выросло более 300 колоний и анализ нельзя повторить, подсчитывают сектор чашки с последующим пересчетом на всю поверхность. В протоколе отмечают «КОЕ в 1 мл – ориентировочно».

При обильном росте и невозможности подсчитать количество колоний в протоколе отмечают «сливной рост».

При проведении исследований необходимо учитывать, что на качество результата влияет соблюдение техники анализа (срок хранения проб, температура и время инкубации посевов, качество питательного агара, правильность учета результатов).

2 Определение общих и термотолерантных колиформных бактерий

Наличие общих и термотолерантных колиформных бактерий проводят двумя методами: титрационным и мембранной фильтрации.

К колиформным бактериям относят грамотрицательные не образующие спор палочки, не обладающие оксидазной активностью, ферментирующие лактозу или маннит с образованием альдегида, кислоты и газа при температуре 37°С в течение 24 часов.

Термотолерантные колиформные бактерии обладают всеми признаками общих колиформных бактерий, которые ферментируют лактозу до кислоты и газа при температуре 44°С в течение 24 часов.

Титрационный метод применяют:

- при отсутствии материалов и оборудования, необходимых для выполнения анализов методом мембранной фильтрации;

- при анализе воды с большим содержанием взвешенных веществ;

- в случае преобладания в воде посторонней микрофлоры, препятствующей получению на фильтрах изолированных колоний общих колиформных бактерий.

Метод основан на накоплении бактерий после посева установленного объема воды в жидкую питательную среду, с последующим пересевом на селективную плотную питательную среду с лактозой и идентификации колоний по культуральным и биохимическим тестам.

Техника выполнения. При исследовании питьевой воды централизованного водоснабжения проводят качественный анализ – засевают 3 объема воды по 100 мл.

С целью количественного определения общих колиформных бактерий и при повторном анализе проводят посев:

- 3 объемов по 100 мл в 10 мл концентрированной лактозо-пептонной среды;

- 3 объемов по 10 мл в 1 мл концентрированной лактозо-пептонной среды;

- 3 объемов по 1 мл в 10 мл среды обычной концентрации.

Посевы инкубируют при температуре 37°C в течение 24 – 48 часов. Через 24 часа проводят предварительную оценку. При наличии роста и образования газа производят высев петлей на секторы среды Эндо, приготовленной с добавлением фуксина. Пробирки без роста и газа оставляют при 37˚С до 48 часов. Через 48 часов посевы при отсутствии роста признают отрицательными и далее не исследуют.

Из посевов, где отмечено помутнение и образование газа или только помутнение, делают посев секторами на среду Эндо. Посевы инкубируют при температуре 37°С в течение 18—20 часов.

В качестве среды накопления можно использовать глюкозо-пептонную среду вместо лактозо-пептонной.

Учет результатов. Положительный ответ – при образовании помутнения и газа в среде накопления и росте на среде Эндо типичных для лактозоположительных бактерий колоний темно-красного или красного цвета с металлическим блеском или без него, выпуклых с красным центром. Отрицательный ответ – не обнаружены в 100 мл.

Метод мембранной фильтрации. Метод основан на фильтрации установленного объема воды через мембранные фильтры и выращивании посевов на селективной питательной среде с лактозой и последующей идентификации колоний по культуральным и биохимическим свойствам.

⇐ Предыдущая11121314151617181920Следующая ⇒

Поделиться: