Определение спор сульфитредуцирующих клостридий

Сульфитредуцирующие клостридий (Closridium perfringens) – спорообразующие анаэробные палочковидные микроорганизмы, редуцирующие сульфит натрия на железо-сульфитном агаре при температуре 44°С в течение 24-х часов.

Наличие спор сульфитредуцирующих клостридий определяют двумя методами: прямым посевом и мембранной фильтрации.

Прямой посев. Принцип метода. Метод основан на посеве установленного o6ъема воды в пробирки с железо-сульфитным агаром, инкубации посевов при температуре 44°С в течение 24-х часов и подсчете черных колоний.

Техника проведения. Из каждой пробы делают посев в 20 мл железо-сульфитного агара. В стерильные пробирки вносят:

- по 10 мл в 2 пробирки (объем пробирки не менее 30 мл)

- по 5 мл воды в 4 пробирки (объем пробирки не менее 15 мл)

Посевы заливают горячим 75-80°С железо-сульфитным агаром в количестве, превышающем объем воды в 2 раза. Среду заливают по стенке пробирки, избегая образования пузырьков воздуха. Пробирку сразу охлаждают, помещая ее в емкость с холодной водой. Культивируют при 44°С в течение 24 часов.

Учет результатов. Подсчитывают черные колонии (только выросшие изолированно на фильтре или в толще среды). Предварительный учет результатов через 16 – 18 ч, окончательный через 24 ч.

Если не отмечен рост черных колоний в протоколе анализа дают ответ «спор сульфитредуцирующих клостридий не обнаружено» в 20 мл воды.

При наличии колоний, после их подсчета, результат вычисляют по формуле:

 

Х = , где

х – число клостридий в 20 мл

А – число подсчитанных колоний в сумме

V – фактический объем воды

При невозможности учета колоний из-за сливного роста результат оценивается как качественный, в протоколе отмечают «обнаружено» в 20 мл. Для получения количественного результата анализ повторяют.

Метод мембранной фильтрации. Принцип метода. Метод основан на фильтрации исследуемого объема воды через мембранные фильтры, выращивании посевов в железо-сульфитном агаре, в условиях, приближенных к анаэробным, и подсчете числа черных колоний.

Определение колифагов

Колифаги – бактериальные вирусы, способные лизировать кишечную палочку и формировать зоны лизиса (бляшки) через 18±2 часа при температуре (37±1)°С на газоне питательного агара. Колифаги – индикаторы очистки питьевой воды в отношении энтеровирусов.

Наличие колифагов в воде определяют прямым и титрационным методами.

Прямой метод выделения колифагов из воды применяют:

- по эпидемиологическим показаниям

- при необходимости получения быстрого результата анализа.

Принцип метода заключается в исследовании нормируемого объема воды (100 мл) путем его прямого посева и последующего учета зон лизиса (бляшек) на газоне Е. coli в чашках Петри с питательным агаром. Для контроля используют чашку с чистым газоном Е. coli на питательном агаре. Единица измерения – 1 БОЕ (бляшкообразующая единица) в 100 мл воды (нижний предел).

Техника проведения. Накануне проведения анализа проводят посев Е. coli на скошенный МПА. Выросшую культуру смывают 5 мл стерильной водопроводной воды и по стандарту мутности готовят взвесь Е. сoli в концентрации 10⁹ бактериальных клеток в 1 мл.

Исследуемую воду 100 мл вносят в 5 стерильных чашек Петри по 20 мл в каждую. В расплавленный и охлажденный до 45⁰С 2% МПА добавляют смыв Е. coli из расчета 1,5 мл смыва бактерий на 150 мл агара и осторожно перемешивают. Полученной смесью по 30 мл заливают сначала пустую чашку Петри (контроль), а затем все чашки, содержащие исследуемую воду. Содержимое чашек осторожно перемешивают и оставляют до полного застывания агара при комнатной температуре (на 30 минут), затем вверх дном помещают в термостат для инкубирования при температуре 37⁰С.

Учет результатов. Проводят подсчет и суммирование бляшек, выросших на 5-ти чашках Петри. Результаты выражают в бляшкообразующих единицах (БОЕ) на 100 мл пробы воды. В контрольной чашке бляшки колифагов должны отсутствовать.

При наличии бляшек в контрольной чашке необходимо получить новый штамм Е. coli из бактериологической лаборатории областного центра госсанэпиднадзора и анализ повторить.

⇐ Предыдущая11121314151617181920Следующая ⇒

Поделиться: