Приготовление питательной среды с лекарствами

⇐ ПредыдущаяСтр 4 из 31Следующая ⇒

Большую важность для получения точных результатов ТЛЧ представляет приготовление среды, содержащей лекарственный препарат. Ниже приведены критические концентрации лекарственных препаратов в среде Л-Й:

Изониазид 0, 2 мкг/мл

Стрептомицин 4 мкг/мл

Рифампицин 40 мкг/мл

Этамбутол 2 мкг/мл

При приготовлении среды с препаратами необходимо учитывать активность препарата, которая может варьировать от одной партии/серии лекарств к другой и в зависимости от его производителя. Эти сведения приводятся на этикетках контейнеров, упаковках или предоставляются компанией-изготовителем.

Изониазид:

Содержание активного вещества 1000 мкг/мл

1) Приготовление растворов лекарственных препаратов:

a) 20 мг изониазида растворить в 10 мл дистиллированной воды - полученный раствор имеет концентрацию 2000 мкг/мл

b) 1 мл приготовленного раствора (2000мкг/мл) растворить в 9 мл дистиллированной воды; полученный раствор имеет концентрацию 200 мкг/мл

c) 1 мл раствора (200 мкг/мл) растворить в 9 мл дистиллированной воды - полученный рабочий раствор имеет концентрацию 20 мкг/мл

2) 2 мл рабочего раствора (20 мкг/мл) добавить к 200 мл среды Л-Й

3) Питательную среду с лекарственным препаратом разлить в пробирки по 6 мл

4) Свертывание среды проводится при 90⁰ C в течение 50 мин.

Стрептомицин:

Содержание активного вещества 780 – 800 мкг/мг

Процедура приготовления среды с 4 мкг/мл (чистое вещество 780мкг/мг)

1) Приготовление раствора лекарственного препарата: 5, 1 мг S растворить в 10 мл дистиллированной воды - полученный раствор имеет концентрацию 400 мкг/мл

2) 2 мл полученного раствора добавить к 200 мл среды Л-Й

3) Питательную среду с лекарственным препаратом разлить в пробирки по 6 мл

4) Свертывание среды проводится при 90⁰ C в течение 50 мин

Рифампицин:

Содержание активного вещества 1, 000 мкг/мл

1) Приготовление раствора лекарственного препарата: 40 мг R растворить в 10 мл пропиленгликоля, встряхивая на водяной бане при 70⁰C - полученный раствор имеет концентрацию 400 мкг/мл

2) 2 мл полученного раствора добавить к 200 мл среды Л-Й

3) Питательную среду с лекарственным препаратом разлить в пробирки по 6 мл

4) Свертывание среды проводится при 90⁰ C в течение 50 мин

Этамбутол:

Содержание активного вещества 1, 000 мкг/мл

Приготовление раствора лекарственного препарата:

1) 20 мг E растворить в 10 мл дистиллированной воды - полученный раствор имеет концентрацию 2000 мкг/мл

2) Добавить 1 мл полученного раствора (2000 мкг/мл) к 9 мл дистиллированной воды – полученный рабочий раствор имеет концентрацию 200 мкг/мл

3) 2 мл рабочего раствор добавить к 200 мл среды Л-Й

4) Питательную среду с лекарственным препаратом разлить в пробирки по 6 мл

5) Свертывание среды проводится пр 90⁰ C в течение 50 мин

Приготовление бактериальной суспензии

Выросшую культуру микобактерий снимают с питательной среды Л-Й с помощью металлической петли и помещают в пробирку с 5-6 стеклянными бусами. При использовании металлической петли в пробирку внести предварительно 2 капли стерильной дистиллированной воды. Пробирку с бактериальной массой гомогенизируют в течение 1- 2 минут на встряхивателе «Vortex», затем добавляют 7 мл дистиллированной воды и снова осторожно встряхивают до образования однородного раствора

Полученную суспензию оставляют на 1-3 минуты до осаждения крупных частиц. Затем гомогенную взвесь (верхнюю часть суспензии) собирают и переносят в стерильную пробирку. Мутность гомогенной взвеси сравнивают со стандартом Мак-Фарланда №1, постепенно добавляя дистиллированную воду до тех пор, пока густота взвеси не сравняется с густотой стандарта. Полученная суспензия называется «рабочей суспензией».

В дальнейшем из рабочей суспензии готовятся последовательные десятикратные разведения: 10^{- 1}; 10^-2; 10^-3; и 10^-4

(для каждой суспензии используются разные 1мл градуированные пипетки).

Посев бактериальной суспензии:

a) в 2 пробирки со средой Л-Й без лекарств (контрольная пробирка) делают посев 0, 1 мл суспензии разведенной до 10^-2, 10^-4и распределяют по всей поверхности среды.

b) в 2 пробирки со средой Л-Й, содержащей каждое лекарство делают посев 0, 1 мл суспензии разведенной до 10^-2и распределяют по всей поверхности среды.

Пробирки в термостате хранят в наклонном положении с неплотно прикрытыми крышками при температуре 37⁰C, до появления видимого роста на среде без лекарств, после чего в течение 4-6 недель с закупоренными пробками.

Интерпретация результатов

Критерием устойчивости является 1% роста бактериальной популяции для всех этих препаратов. Через 4 недели инкубации, рост на среде, не содержащей лекарства, инокулированной из суспензии 10^-4сравнивают с ростом на среде с препаратом, инокулированной из суспензии 10^-2. Если число колоний больше на среде, содержащей лекарство, тестируемый штамм считается устойчивым.

Так как отношение 10^-2 и 10^-4 является как 1: 100, то следующая формула может использоваться для подсчета % устойчивости:

Число колоний на среде с лекарствами в разведении 10^-2= % устойчивости

Число колоний на среде без лекарств в разведении 10^-4

Если рост бактерий на питательной среде, содержащей лекарство, превышает 1%, штамм считается устойчивым.

Контроль качества работы бактериологических лабораторий

3.9.1 Внутренний контроль качества бактериологической лаборатории направлен на:

- размещение лаборатории и организацию работы;

- лабораторное оборудование;

- качество материала;

- обработку материала;

- качество, годность и количество реагентов;

- методика и процедура посева;

- регистрация анализов и выдача результатов.

Внутренний контроль качества – это ответственность всего персонала лаборатории!

3.9.1.1 Размещение лаборатории и организация работы:

- Убедитесь, что двери лаборатории всегда закрыты. Посторонние лица не должны находиться в помещении лаборатории. Рабочие помещения, оборудование и расходные материалы располагаются так, чтобы обеспечить эффективную и безопасную работу

- Уборка помещения проводится в соответствии с утвержденным графиком. Рабочие поверхности столов следует обрабатывать не менее 1 раз в день раствором дезинфектанта

- Лаборатории должны использовать методики утвержденные МЗ РК

- Детальное описание каждой методики, применяемой в лаборатории, должно храниться в доступном месте

- Все лабораторные журналы и картотеку следует хранить не менее 5 лет

3.9.1.2 Лабораторное оборудование:

- Оборудование должно использоваться в соответствии с требованиями и спецификациями производителя

- Руководство по эксплуатации оборудования следует держать в доступном месте

- В паспорта к оборудованию регулярно вносятся даты сервисного обслуживания

- Оборудование должно регулярно проверяться специалистом

3.9.1.2.1 Биологический шкаф безопасности:

- Место установки БШБ должно находиться вдали от входа в лабораторию и располагаться в стороне от проходов (движение воздуха от проходящих мимо людей может нарушать воздушный занавес). Этот занавес весьма хрупкий и открытые окна или оборудование, создающее движение воздуха (центрифуги) не следует располагать вблизи БШБ.

- Особое внимание следует уделять эксплуатации и своевременной замене фильтров.

- Работа в БШБ требует ежедневной проверки скорости воздушного потока (22, 86 м/с для БШБ I класса и 22, 86- 30, 48 м/с для БШБ II класса) и показателей манометра давления воздуха, поступающего на фильтр. В случае минимального превышения отмеченного уровня необходимо заменить фильтр.

Центрифуги

Каждые 6 месяцев необходимо проверять щетки в электродвигателях.

Инкубатор

Регистрировать температуру в термостате ежедневно. Необходимо проверять разницу температур внутри термостата на различных уровнях.

Свертыватель

Ежедневно проверять температуру. После каждой партии сред тщательно обрабатывать свертыватель.

Водяная баня

Контролировать температуру до и во время использования. Ежемесячно производить тщательную обработку и чистку.

3.9.1.2.6 Холодильник (2-8º С):

Ежедневно контролировать температуру. Ежемесячно проводить обработку, каждые 3 месяца удалять лед из морозильной камеры.

Морозильник

Ежедневно проверять температуру, чистить раз в 6 месяцев.

⇐ Предыдущая 1 2 345 6 7 8 9 10 Следующая ⇒