Цветные реакции с белками на обнаружение циклических аминокислот.

Задание 1. Ксантопротеиновая реакция.

В ароматических аминокислотах, содержащих бензольные кольца (тирозин, триптофан, фенилаланин), под действием азотной кислоты происходит реакция нитрования бензольного кольца, с образованием окрашенного в желтый цвет нитросоединения.

Ход работы: К 1 мл раствора белка добавляют 3-5 капель концентрированной азотной кислоты. Под влиянием кислоты появляется осадок белка, который при нагревании окрашивается в желтый цвет. Затем, пробирке дают остыть и осторожно прибавляют избыток гидроксида натрия. При этом желтая окраска переходит в оранжевую.

Задание 2. Реакция Вуазене на триптофан.

Триптофан, конденсируясь с формальдегидом, образует окрашенное соединение, которое в присутствии минеральных кислот образует соли, окрашенные в сине – фиолетовый цвет.

Ход работы: В пробирку вносят 2 мл раствора белка и 1 каплю формальдегида. К полученной смеси тщательно перемешивая, добавляют осторожно по каплям 6 мл концентрированной серной кислоты, охлаждая пробирку в ванночке со льдом. Через 10 минут в пробирку вливают, перемешивая, 10 капель раствора нитрита натрия.

Задание 3. Реакция Паули.

При взаимодействии сульфаниловой кислоты в кислой среде с нитритом натрия (калия) происходит реакция диазотирования и образуется диазобензол – сульфоновая кислота, которая в реакции с гистидином (или тирозином) образует комплексное соединение вишнево – красного цвета.

Ход работы: В пробирку вносят 1 мл раствора сульфоновой кислоты в растворе соляной кислоты, 2мл раствора натрия нитрита и после тщательного перемешивания 2мл раствора белка и 6 мл раствора карбоната натрия. Перемешивают.

Задание 4. Обнаружение хромопротеидов.

Хромопротеиды – сложные белки, состоящие из простого типа глобулина и простетической группы, которая является окрашенным веществом – пигментом. Представитель хромопротеидов – белок крови гемоглобин с простетической группой – гемом.

Ход работы: В пробирку вносят 0, 5 мл крови, добавляют 1-2 капли р-ра бензидина. После перемешивания доливаем 1-2 капли раствора перекиси водорода. Наблюдают, окрашивание смеси в синий цвет.

Задание 5. Обнаружения гликопротеидов

Гликопротеиды – сложные белки, состоящие из простых белков и простетической группы, в состав которой входят углеводы типа гомополисахаридов и гетерополисахаридов.

Ход работы: В пробирку вносят кусочек вареного яичного белка и 3 мл концентрированной соляной кислоты. Содержимое пробирки, нагревают. Белок и жидкость приобретают фиолетовое окрашивание.

Реакции осаждения белков

Цель: Изучить физико – химические свойства белков (молекулярный вес, растворимость, осаждение, денатурация, амфотерность).

Нарушение факторов, стабилизирующих структуру молекулы белка, приводит к осаждению белков. Осаждение может быть с денатурацией и без нее. Обратимое осаждение (высаливание) достигается добавлением к водным растворам белков нейтральных солей щелочных металлов (NH₄Cl, Na₂SO₄, KCl). Необратимое осаждение достигается ионами тяжелых металлов, минеральными и органическими кислотами, спиртом, эфиром, алкалоидами.

Реакции осаждения белков используются, в частности, в диагностических лабораториях для исследования биологических жидкостей. Так, моча здоровых животных содержит незначительное количество белка. При некоторых патологических состояниях в моче может появиться белок (альбуминурия). Она может быть истинной (почечной), когда белок примешиваются к моче после выхода ее из почек. Это наблюдается при заболеваниях мочеточников, почечных лоханок, мочевого пузыря. Истинная альбуминурия бывает патологической и физиологической. Последняя наблюдается при сильном мышечном напряжении, переохлаждении, у новорожденных или беременных животных.

Задание 1. Проба с сульфасалициловой кислотой

Ход работы: В одну пробирку наливают 1 мл мочи, в другую 1 мл белка и приливают 2-3 капли 20% сульфасалициловой кислоты. Образование мути свидетельствует о наличии белка.

Задание 2. Проба с кипячением

Лучший способ осаждения белков – кипячение в средах, имеющих значение рН, равное изоэлектрической точке белков. Внесение в раствор белка нейтральных солей облегчает и ускоряет осаждение при кипячении в результате возникновения и дегидратирования белковых частиц.

Ход работы: В 5 пробирок помещают по 5 мл раствора белка. В первой пробирке раствор нейтральный. Во второй создаем слабо – кислую реакцию. Для этого вливаем 1 мл раствора уксусной кислоты. В третью пробирку добавляем 3 мл уксусной кислоты для создания кислой реакции среды. В четвертую пробирку добавляем 5 мл уксусной кислоты и 2 мл насыщенного раствора NaCl. В пятую – добавим 2 мл раствора NaOH, создадим тем самым щелочную среду. Затем все пробирки нагреем до кипения. Нужно обратить внимание на образование осадка белка и сделать выводы.

Задание 3. Кольцевая проба Геллера

Ход работы: В пробирку внесем 1 мл концентрированной азотной кислоты, и наслоить по стенке около 1 мл мочи. При наличии белка на границе раздела жидкостей появиться муть (белковое кольцо), а при отсутствии белка – цветное прозрачное кольцо пигменты мочи.

Задание 4. Осаждение этанолом и ТХУ

Ход работы: В две пробирки вносят по 5 мл яичного белка. В одну добавляют 1 мл этанола и в другую 1 мл раствора ТХУ и наблюдают осаждение белка.

Задание 5. Высаливание белков хлористым натрием

Высаливание белков является обратимой реакцией, т.к. осадок белка может вновь растворяться после уменьшения концентрации солей диализом или разведением водой. Глобулины, имеющие больший молекулярный вес, легче подвергаются высаливанию.

Ход работы: В пробирку наливают 2 мл капель раствора белка и прибавляют тонко измельченный порошок хлористого натрия до полного насыщения раствора. Через несколько минут появляться осадок глобулинов.

Содержимое пробирки отфильтровывают. В фильтрате остаются альбумины, которые в нейтральных растворах не выпадают даже при полном насыщении NaCl. К фильтрату прибавляют по каплям 1% раствор уксусной кислоты (15-20 капель), в слабо – кислой среде альбумины выпадают в осадок. Через несколько минут альбумин отфильтровывают и проверяют фильтрат на отсутствие белка при помощи биуретовой реакции.

Словарь терминов

Авитаминоз - заболевания, развивающиеся в последствие длительного качественно неполноценного питания, в котором отсутствуют соответствующие витамины.

Аденозинтрифосфорная кислота (АТФ) – нуклеотид, молекула которая состоит из пуринового основания, связанного через рибозу с тремя остатками фосфорной кислоты. АТФ – основной носитель химической энергии в клетке. Он служит для переноса высокоэнергетических фосфатных групп и является связующим звеном между процессами, сопровождающимися выделением энергии, и процессами, протекающими с потреблением энергии.

Азотистые основания – гетероциклические соединения, к которым относятся пиримидин и пурин, входящие в состав нуклеиновых кислот и нуклеотидов.

Активный транспорт – процесс переноса веществ через плазматическую мембрану против их концентрационных градиентов, идущий с затратой энергии.

Активный центр фермента – участок молекулы фермента, в котором происходит связывание, активирование и каталитическое превращение субстрата.

Аминокислота – альфа-амино-карбоновая кислота, являющаяся мономерным компонентом молекулы белка.

Аминокислоты заменимые (аланин, аспарагиновая кислота, аспарагин, цистеин, глутаминовая кислота, глутамин, глицин, пролин, серин, тирозин) – синтезируются в организме человека в количествах, достаточных для обеспечения синтеза белка.

Аминокислоты незаменимые (аргинин, гистидин, изолейцин, лейцин, лизин, метионин, фенилаланин, треонин, триптофан, валин) – доставляются в организм с пищей, так как не синтезируются в организме или синтезируются медленно и в незначительных количествах.

⇐ Предыдущая 1 2 3 4 5 6 7 8910 Следующая ⇒