Техника безопасности при работе в биохимической лаборатории.

⇐ ПредыдущаяСтр 7 из 10Следующая ⇒

1. Являться на занятия в лабораторию подготовленными в соответствии с учебным планом, имея тетрадь для ведения записей. Неподготовленные к занятиям студенты к лабораторным работам не допускаются.

2. Соблюдать тишину и порядок. Следить за чистотой в лаборатории, не курить, не пить из химической посуды.

3. Работать на предоставленном рабочем месте, которое содержать в порядке во время работ и оставлять чистым по окончании работы. Дежурный по учебной группе перед уходом из лаборатории проверяет чистоту рабочих мест и сдает лабораторию преподавателю или лаборанту.

4. Осторожно обращаться с реактивами и экономить их. Реактивы с одной полки на другую не переносить. После взятия реактива, склянку с ним сразу же поставить на место, предварительно закрыв ее пробкой. Реактивы взятые с общего стола, немедленно возвращать на место, после пользования. Не накапливать на рабочем месте склянки с реактивами. Пробирки ставить на стол только тыльной стороной во избежании загрязнения растворов. Взятый из склянки раствор обратно в туже склянку не выливать. Запрещается переносить пипетки из одного раствора в другой. При ожоге щелочью место ожога следует быстро промыть водой, а затем слабым раствором уксусной кислоты. Кислоту, попавшую на кожу или слизистую оболочку, следует быстро смыть водой, а затем 2-% раствором соды.

5. Соблюдать особую осторожность при работе с концентрированными кислотами и щелочами и огнеопасными веществами – спиртом и эфиром. Не наклоняться над пробиркой, чашкой или сосудом, в котором нагревается концентрированная кислота, щелочь или другой реактив.

6. Пробирку при нагревании направлять отверстием от себя, но не на товарищей. Прогревать жидкость в пробирках равномерно, не допуская перегрева в одном месте и выбрасывания. Не нагревать в месте перевода жидкости к стеклу. Нельзя нагревать в месте перевода жидкости к стеклу. Нельзя нагревать жидкость в закрытых сосудах. Огнеопасные жидкости (эфир, бензол, другие) нельзя пользоваться при наличии открытого огня.

7. Сухие реактивы не брать руками, только ложкой, совком, шпателем.

8. Никакие реактивы не пробывать на вкус.

9. Бережно обращаться с химической посудой, трубочками, палочками. Особенно следить за целостностью кончиков пипеток, бюреток и за сохранностью мерной посуды.

10. Не засорять раковины осколками стекла, использованными фильтрами, лакмусовыми бумагами и т.п., которые бросать в ящик для мусора.

11. Не использованные остатки кислот и щелочей сливать в специально поставленные в вытяжном шкафу банки, и ни в коем случае в раковину.

12. Выпаривание, прокаливание, а также работы с концентрированными кислотами, сильно пахнущими и газообразными веществами проводить в вытяжном шкафу с исправно действующей вентиляцией. Так же в вытяжном шкафу выполнять все реакции, имеющие указание проводить под тягой.

13. Правильно обращаться с электронагревательными приборами и немедленно выключать их по окончании нагревания.

14. Включать и выключать мотор в вытяжном шкафу студентам строго воспрещается. О необходимости включения вентиляции студенты должны сказать преподавателю или лаборанту.

15. Лабораторные работы выполнять стоя.

16. Химические реакции выполнять строго по методике.

17. Не отвлекать товарищей от работы.

18. Все пролитое, разбитое на столах убирать немедленно.

19. Не ходить без надобности по лаборатории.

20. Запрещается работать без халата.

21. Все работы в лаборатории проводить с максимальной осторожностью, аккуратно, внимательно, чтобы не навлечь несчастный случай.

22. Студенты, не выполняющие этих правил, подвергаются взысканию, вплоть до запрещения дальнейшей работы в лаборатории.

Тема: Углеводы

Задание 1. Реакция на обнаружение углеводов.

Реакция с λ -нафтолом и тимолом является общей для углеводов, что используется для открытия углеводов в биологическом материале. Химизм реакции сводится к тому, что при действии концентрированной серной кислоты из пентоз образуется фурфурол, а из гексоз – 5-оксиметилфурфурол:

Фурфурол

При взаимодействии последних с λ -нафтолом возникает характерное окрашивание (фиолетовое), а с тимолом – красное.

Ход работы: В две пробирки наливают по 2 мл 1%-ного раствора сахарозы. В первую пробирку добавляют 5 капель нафтола, а в другую – столько же тимола. В обе пробирки осторожно по стенкам наливают по 1-2 мл серной кислоты, не смешивая ее с водным слоем. На границе слоев появляется фиолетовое или красное окрашивание.

Задание 2. Реакция Троммера.

Моносахариды, благодаря наличию свободной кетонной или альдегидной группировки, способны окисляться до соответствующих кислот, одновременно восстанавливают соли металлов.

В щелочном растворе редуцирующие моно – и – дисахариды восстанавливают гидроксид меди (II) и оксид меди (I).

С О

// //

С₅Н₁₁О₅─ С + 2CuSO₄ + 5NaOH---→ С₅Н₁₁О₅─ С +2CuOH+2Na₂SO₄+H₂O

\ \

Н ОН

2CuOH---→ Cu₂O+H₂O

Ход работы: в пробирку наливают 1-2 мл раствора глюкозы, равный объем раствора гидроксида натрия и при встряхивании добавляют по каплям раствор сульфата меди. В присутствии глюкозы образующийся осадок гидроксида меди растворяется, окрашивая жидкость в голубой цвет. Верхний слой жидкости нагревают до кипения. Появление желтого (гидроксид

меди I), а затем красного (оксид меди I) осадка указывает на положительную реакцию Троммера. В другой пробирке смешивают 2 мл гидроксида натрия с несколькими каплями раствора сульфата меди (II) голубого цвета, при нагревании выпадает осадок черного цвета (оксид меди II).

Задание 3. Реакция Феллинга.

В реактив Феллинга ионы меди (II) находятся в виде комплексного соединения с тартратами. Механизм реакции гексоз (и всех редуцирующих углеводов) с реактивом Феллинга таков же, как и в реакции Троммера. Преимуществом реактива Феллинга является то, что медь при избытке реактива не выпадает в виде окиси меди (II) и не затемняет реакцию.

Ход работы: В пробирку вносят 1 мл раствора глюкозы и 1 мл реактива Феллинга. Смесь нагревают в пламени спиртовки до кипения. Наблюдают образование красного осадка окиси меди (I) – Cu₂O.

Задание 4. Реакция Селиванова.

Эта реакция применяется специально для распознавания кетоз, особенно хорошо идет с фруктозой и теми сложными сахарами, которые при гидролизе дают фруктозу (сахароза, инулин). Реакция основана на образовании из фруктозы при нагревании с кислотой 5-оксиметилфурфурола, который с резорцином дает продукт конденсации красного цвета. Альдогексозы также дают эту реакцию, но она протекает медленнее и в особых условиях (температура, кислотность среды).

Ход работы: В пробирку наливают 1-2 мл реактива Селиванова, добавляют 2-3 капли раствора фруктозы и нагревают 1-2 минуты, в кипящей водяной бане. Наблюдают окрашивание жидкости в красный цвет.

Задание 5. Реакция Биаля.

Под влиянием концентрированной соляной кислоты при нагревании пентозы, дегидратируясь, превращаются в фурфурол. Последний, конденсируется с орцином (метил – диоксибензол) в присутствии следов хлорида железа (III) и образует соединение, окрашенное в зеленый цвет.

Ход работы: В пробирку наливают 1 мл раствора пентозы, равный объем орцинового реактива. Смесь нагревают на кипящей водяной бане в течение 20 минут. Появляется зеленое окрашивание раствора.

Задание 6. Реакция с флороглюцином.

При нагревании с соляной кислотой пентозы превращаются в фурфурол, который, конденсируясь с флороглюцином (триоксибензолом), дает вишнево-красное окрашивание.

Ход работы: В пробирку наливают 1-2 мл раствора пентозы или немного древесных опилок, прибавляют равный объем концентрированной соляной кислоты и несколько кристаллов флороглюцина. Пробирку ставят в горячую водяную баню. Возникает красное окрашивание.

Задание 7. Реакция на сахарозу.

Сахароза не обладает восстанавливающей способностью, это объясняется связанным состоянием карбонильных групп гексоз, образующих ее молекулу.

Ход работы: В 2 пробирки наливают по 2 мл раствора сахарозы. В одну прибавляют несколько капель НCl, перемешивают, кипятят 3-5 минут на голом огне. Жидкость охлаждают, нейтрализуют по лакмусу путем прибавления 10%-ного р-ра NaOH. С двумя пробами проводят реакцию Троммера.

Отрицательная реакция Троммера в первой пробирке указывает на отсутствие свободных карбонильных групп. Положительная реакция Троммера во второй (кипяченной) – выпадение красного осадка, указывает на то, что при кипячении произошел, гидролиз сахарозы и освободились карбонильные группы.

Задание 8. Реакция крахмала с йодом.

При взаимодействии крахмала с йодом образуются комплексные адсорбционные соединения, окрашенные в синий цвет. При нагревании окраска исчезает, но появляется опять при охлаждении, что свидетельствует об образовании нестойких комплексов крахмала с йодом. Обесцвечивание происходит также при добавлении гидроксида натрия.

Ход работы: В пробирку наливают 2-3 мл раствора крахмала, приливают 1 каплю раствора Люголя. Жидкость окрашивается в синий цвет. Содержимое пробирки делят на 3 части. К первой части 1-2 мл раствора гидроксида натрия, ко второй 2-3 мл этилового спирта, третью часть нагревают. Во всех случаях окраска исчезает, что говорит о том, что пробу с йодом необходимо проводить только с холодным раствором крахмала.

Тема: Жиры

Задание 1. Обнаружение жиров

Реакцией на обнаружение жиров служит, так называемая акролеиновая проба. Этой пробой открывают в жирах глицериновый осадок, который при нагревании жира частично переходит в свободный глицерин. Далее глицерин теряет воду и образует ненасыщенный альдегид – акролеин, легко обнаруживаемый по специфическому раздражающему запаху (от его присутствия в значительной мере зависит удушливый запах кухонного чада). Акролеиновую пробу проводят, нагревая жир в присутствии бисульфата К или Na (в качестве водоотнимающего средства). Липиды, не содержащие глицерина (воск, стериды) акролеиновой реакции не дают.

Ход работы: Помещают в сухие пробирки 1-2 капли жира, добавляют щепотку сухого кислого сернокислого калия и нагревают до появления белых густых паров. Резкий раздражающий запах говорит об образовании акролеина. Результаты заносят в следующую таблицу:

№ пробирки	Содержание пробирок	Результат
	Говяжий жир
	Рыбий жир
	Подсолнечное масло
	Воск
	Минеральное масло

Задание 2. Качественная реакция на лецитин

Лецитин является одним из представителей фосфатидов, входящих в состав биологических мембран.

Лецитины входят в состав клеток животного и растительного организмов. Особенно богаты ими мозг, нервная ткань, печень, почки, желток яйца, сперма, кровь. Фосфатиды различаются способностью растворяться в органических растворителях. Большинство фосфатидов плохо растворимо в ацетоне, что используется при выделении их из биологических объектов.

СН2─ О─ СО─ С17Н35

│

СН─ О─ СО─ С17Н33 СН3

│ │

СН2─ О─ ─ Р─ О─ СН2─ СН2─ N─ СН3

/ \

НО СН3

Ход работы: В пробирку помещают 50-100 мг яичного желтка, добавляют 3-5 мл кипящего спирта. Содержимое пробирки тщательно перемешивают стеклянной палочкой в течении 5-10 минут. После этого жидкость фильтруют в сухую пробирку. В другую пробирку наливают 2-3 мл ацетона и каплями добавляют фильтрат. Наблюдают появление мути, а затем выпадение осадка лецитина. К оставшемуся фильтрату добавляют каплями дистилированную воду и наблюдают образование стойкой эмульсии.

Задание 3. Качественные реакции на холестерин

Холестерин относится к стеринам, представляет собой вторичный циклический спирт.

Много холестерола содержится в нервной ткани, в желчи, сперме, ланолине. Это важнейший структурный компонент клеток, он служит исходным веществом при биосинтезе стероидных гормонов, витаминов группы Д, желчных кислот и других важных соединений. Холестерол и его эфиры не растворимы в воде, но хорошо растворимы в органических растворителях: хлороформе, эфире, горячем спирте и других.

Ход работы: В ступке растирают около 3 г измельченного мозга с 6-10г гипса до гомогенной массы. Полученную густую массу с помощью шпателя наносят тонким слоем на стеклянную пластину и высушивают в сушильном шкафу (60º С). Высушенную массу очищают скальпелем в сухую ступку и растирают в порошок. К сухому порошку в пробирке добавляют 6 мл хлороформа, тщательно взбалтывают в течении 5 минут и фильтруют. Фильтрат разливают в 3 пробирки и используют для проведения цветных реакций.

а) Реакция Сальковского

К фильтрату добавляют такой же объем серной кислоты и осторожно встряхивают. После расслоения фаз наблюдают за изменением окраски: верхний слой, содержащий холестерин в хлороформе, окрашивается в пурпурно – красный цвет, а нижний слой серной кислоты – в темно – красный цвет с зеленой флуоресценцией. Раствор холестерола в хлороформе сливают в сухую пробирку. Окраска раствора со временем переходит в фиолетовую, затем в зеленую и, наконец, в желтую.

б) Реакция Либермана – Бурхарда

В сухую пробирку с фильтратом добавляют 10 капель уксусного ангидрина и 2 капли концентрированной серной кислоты. Содержимое пробирки тщательно встряхивают и наблюдают образование красной окраски, которая переходит в красно – фиолетовую, фиолетовую, синию и зеленую. При незначительном содержании холестерина в растворе образуется сразу зеленая окраска.

в) Реакция Виндауза

В пробирку к раствору холестерола в хлороформе осторожно прибавляют каплями несколько мл 5%-го раствора брома в ледяной уксусной кислоте до появления бурого окрашивания, которое не исчезает в течении нескольких минут. Образующийся в ходе реакции дибромхолестерол выделяется в виде кристалликов игольчатой формы.

Задание 5. Эмульгирование жиров

Действию ферментов желудочно – кишечного тракта и тканей доступны жиры, находящиеся в эмульгированном состоянии. В желудочно – кишечном тракте есть условия для превращения жиров в эмульсию, а основным ее стабилизатором (эмульгатором) является соли желчных кислот, белки, фосфолипиды, мыла и гидрокарбонаты щелочных металлов.

Ход работы: Берут 5 пробирок. В первую наливают 1 мл воды, во вторую – 1 мл желчи, в третью 1 мл раствора белка, в четвертую 1 мл раствора мыла, в пятую 1 мл раствора карбоната натрия. В каждую пробирку добавляют по 5 капель подсолнечного масла, энергично встряхивают и оставляют на 5 минут. Во всех пробирках кроме первой, образуется стойкая эмульсия.

⇐ Предыдущая 1 2 3 4 5 678 9 10 Следующая ⇒