Изучение стабильности токоферолов в РМ и МЭ при хранении

⇐ ПредыдущаяСтр 7 из 7

В виду того, что экспериментально было установлено снижение содержания токоферолов в растительных маслах и масляных экстрактах через 6 мес. хранения или их отсутствие в некоторых изучаемых объектах, а также наличия большого количества литературных источников, свидетельствующих о высокой лабильности витамина Е, необходимо было оценить стабильность токоферолов в растительных маслах и масляных экстрактах при хранении. Для определения наличия α -токоферола в исследуемых образцах растительных масел и масляных экстрактов (3 мес. хранения) была использована разработанная методика тонкослойной хроматографии. Токоферолы идентифицировали по значению Rf = 0, 59 ± 0, 02 в сравнении со стандартным раствором α -токоферола, а также по характерному красновато-оранжевому окрашиванию хроматографических зон, полученных после детектирования. Затем в расттительных маслах и масляных экстрактах проводили определение токоферолов через 6 и 9 месяцев хранения в условиях, указанных производителем на упаковке (плотно укупоренными в защищенном от света месте при температуре 15 - 25°С). Параллельно в аналогичных условиях хранили стандартный раствор α -токоферола. По истечении 6 мес. хранения были получены хроматограммы стандартного раствора. В результате установлено, что значение Rf изменилось с 0, 59±0, 02 до 0, 83±0, 02 (рис. 6).

Рис. 6. Хроматограмма стандартного раствора а-токоферола, Rf = 0, 59 ± 0, 02; хроматограмма стандартного раствора а-токоферола после 6 мес. хранения, Rf= 0, 83 ±0, 02

Стандартный спиртовой раствор α -токоферола изменил окраску от светло-желтой до красновато-оранжевой. Затем из растительных масел и масляных экстрактов были выделены токоферолы и проведен ТСХ-анализ. В результате получены зоны со значением Rf=0, 84±0, 02. Очевидно, что токоферолы стандартного раствора и токоферолы масел претерпевают одни и те же изменения при хранении. Было сделано предположение о том, что исследуемые объекты с течением времени подверглись окислительно-восстановительным реакциям, в результате чего образовался о-токоферилхинон. Для доказательства или опровержения данной гипотезы было проведено следующее испытание.

Изучение БАВ РМ и МЭ методом ИКС — спектроскопии

Метод ИКС-спектроскопии можно успешно использовать при изучении химической структуры веществ и их стабильности при хранении. Колебательные спектры стали богатым источником информации о структуре молекул органических соединений. Сложность изучаемой проблемы обусловлена тем, что растительные масла представляют собой целый комплекс биологически активных веществ. Безусловно, данные физиологически активные соединения вступают во взаимодействие между собой, образуя, ассоциаты, конгломераты или др. образования. Актуальность изучаемого вопроса обусловлена недостатком информации в литературе о характере связей между компонентами растительных масел. К одному из видов таких «ассоциативных взаимодействий» принадлежит водородная связь. Важным критерием, подтверждающим образование данной связи, является появление значительных смещений максимумов поглощения в ИК-спектрах изучаемых объектов. Для изучения биологически активных веществ и их взаимодействий в растительных маслах и масляных экстрактах, нами был использован метод инфракрасной спектроскопии (ИКС).

Выводы по главе 3

Третья глава отличается от первых двух своим большим анализом качества растительных масел и масляных экстрактов при хранении.

Известно, что одна из главных причин порчи жиров – это окисление, поэтому очень важно, чтобы РМ и МЭ хранились правильно.

Также показано, что через 9 месяцев хранения органолептические показатели качества, которые изучались в дипломной, не претерпевали изменений, а вот через 18 месяцев хранения у исследуемых объектов был замечен горьковатый вкус и неприятный запах.

Главное в этой главе описание исследования и 3 главных вывода:

1. Установлено, что МЭ и РМ могут отличаться друг от друга по содержанию БАВ из-за разной технологией производства, хотя полученные из одного сырья;

2. В растительных маслах цветное число и количественное содержание суммы каротинойдов на порядок выше по сравнению с масляным экстрактом, полученных из одного сырья.

3. ТСХ-анализ свидетельствует о различии в каротинойдном составе исследуемых объектов.

Общие выводы

1. Исследованы физико-химические показатели качества изучаемых растительных масел и масляных экстрактов во времени до 9 мес. хранения. Установлено, что основные физико-химические параметры масел претерпевают значительные изменения с течением времени при хранении.

2. Изучены свойства и состав каротиноидов и токоферолов с применением методов спектрофотометрии в УФ-, видимой и ИКС-областях.

3. Впервые разработана методика экспресс-анализа растительных масел и масляных экстрактов для оценки их подлинности и степени чистоты с применением тонкослойной хроматографии.

4. Изучены особенности хроматографии α -токоферола в тонком слое сорбента. Впервые разработана унифицированная экспресс-методика количественной оценки данных тонкослойной хроматографии токоферолов с применением компьютерного сканирования. Данная методика были апробирована на исследуемых растительных маслах и масляных экстрактах.

5. Изучена стабильность токоферолов в растительных маслах и масляных экстрактах при хранении до 9 мес. Установлен продукт окислительного превращения токоферолов, образующийся в растительных маслах и масляных экстрактах с течением времени.

6. Определено содержание суммы каротиноидов в пересчете на β -каротин в исследуемых растительных маслах и масляных экстрактах. Установлено, что в процессе хранения в режиме реального времени происходит постепенное снижение содержания данных биологически активных веществ.

7. Изучены особенности хроматографии β -каротина в тонком слое сорбента. Выбраны и обоснованы оптимальные условия хроматографирования. Впервые предложена методика экспресс-анализа β -каротина, как одного из наиболее фармакологически активных веществ группы каротиноидов, присутствующих в маслах методом тонкослойной хроматографии.

8. На основании проведенных исследований, можно сделать заключение, что сроки хранения изученных жирных растительных масел и масляных экстрактах, применяемых в фармации, должны быть пересмотрены и экспериментально установлены для каждого конкретного образца.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Целью данной работы явилась идентификация растительных масел и масляных экстрактов методом тонкослойной хроматографии. Объектами исследования были выбраны жирные растительные масла и масляные экстракты, наиболее широко представленные на фармацевтическом рынке нашей страны: масло плодов облепихи, масло плодов шиповника, масло виноградной косточки и масляные экстракты: цветков ромашки, цветков календулы, листьев крапивы, травы череды и травы тысячелистника.

Доля фитопрепаратов на Российском фармацевтическом рынке значительна, однако, номенклатура и объем предложений ниже потребности, рост которой отмечается в последние годы. Растительные масла и масляные экстракты являются источником БАВ - витаминов, стеринов, полиненасыщенных жирных кислот, эссенциальных фосфолипидов и др. Некоторые масла давно зарекомендовали себя в качестве ценных фармакологически активных самостоятельных препаратов для лечения различных заболеваний. Тем не менее, многие растительные масла и масляные экстракты еще применяются в странах Европы и Северной Америки как биологически активные добавки к пище. Следует отметить, что качественный и количественный состав биологически активных веществ в маслах может варьировать в широких пределах и зависит, во-первых, от места произрастания, климатических условий и условий культивирования растения. Во-вторых, от степени зрелости, способов сбора, сушки, хранения и переработки исходного сырья, а также от условий технологического процесса производства масел и соблюдения всех правил их хранения на этапах доведения конечного продукта до потребителя.

Стабильность жирных масел определяется по нескольким показателям, которые разделяют на две группы: характеристики самого масла и характеристики главных действующих веществ, растворенных в нем, определяющих ценность жирных масел. При этом, контроль стабильности биологически активных веществ в маслах при хранении является весьма актуальной задачей, ввиду высокой лабильности последних под действием факторов внешней среды.

ГЛОССАРИЙ

Высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ) – один из эффективных методов разделения сложных смесей веществ, широко применяемый как в аналитической химии, так и в химической технологии.

Тонкослойная хроматография (ТХС) – хроматографический метод, основанный на использовании тонкого слоя адсорбента(высокодисперсные природные или искусственные материалы с большой удельной поверхностью, на которой происходит адсорбция веществ из соприкасающихся с ней газов или жидкостей) в качестве неподвижной фазы.

Инфракрасный спектроскопический анализ (ИК, ИКС) – раздел спектроскопии, изучающий взаимодействие инфракрасного излучения с веществами.

Перекисное окисление липидов (ПОЛ) – окислительная деградация липидов, происходящая, в основном, под действием свободных радикалов.

Кислотное число (КЧ) — количество миллиграмм гидроксида калия (KOH), необходимое для нейтрализации всех кислых компонентов, содержащихся в 1 г исследуемого вещества.

Перекисным числом (ПЧ) называют количество граммов йода, выделенного из йодида калия перекисными соединениями, содержащимися в 100 г жира.

Йодное число (ЙЧ) — масса иода (в г), присоединяющегося к 100 г органического вещества.

Число омыления (ЧО) – количество миллилитров едкого калия, необходимое для нейтрализации свободных кислот и омыления сложных эфиров, содержащихся в 1 г исследуемого вещества.

Хроматогра́ фия – динамический сорбционный метод разделения и анализа смесей веществ, а также изучения физико-химических свойств веществ.

Метод газожидкостной хроматографии (ГЖХ) – основан на физико-химическом разделении анализируемых компонентов, находящихся в газовой фазе, при их прохождении вдоль нелетучей жидкости, нанесенной на твердый сорбент. Это один из наиболее перспективных методов анализа.

Международная единица – (МЕ, иногда — Единица действия, ЕД) — в фармакологии это единица измерения дозы вещества, основанная на его биологической активности.

Метод дифференциальной вольтамперометрии (ДВА) – способ может быть применен при анализе микроколичеств токоферола как в чистых растворах, так и в сложных по составу фармакологических препаратах, сельскохозяйственных и пищевых продуктах, биосистемах, биологически активных добавках, сточных водах жироперерабатывающих предприятий.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

РМ – растительные масла;

МЭ – масляные экстракты;

ВЭЖХ – высокоэффективная жидкостная хроматография;

Метод ТСХ – тонкослойная хроматография;

ИК-спектроскопический анализ – инфракрасный спектроскопический анализ;

Метод ИКС — спектроскопии - метод инфракрасной спектроскопии;

Метод УФ-спектрофотометрии – метод ультрафиолетовой спектрофотометрии;

БАВ – биологически активные вещества;

ЛП – лекарственные препараты;

ЛС – лекарственные средства;

ПОЛ – перекисное окисление липидов;

НД – нормативная документация;

ПНЖК – полиненасыщенные жирные кислоты;

КЧ – кислотное число;

ЖК – жирные кислоты;

ПЧ – перекисное число;

ЙЧ – йодное число;

ЧО – число омыления;

Метод ГЖХ – метод газожидкостной хроматографии;

МЕ – международная единица;

Метод ДВА – метод дифференциальной вольтамперометрии.

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ ИСТОЧНИКОВ:

1. Анализ показателей качества фитопрепаратов на основе жирных растительных масел / Н.Н Глушенко, Т.А. Лобаева, Т.А. Байтукалов и др. // Фармация. - 2005. - №3. — С.7-9.

2. Анализ растительных масел с использованием ВЭЖХ / В.И. Дейнека, Л.А. Дейнека, Н.Г. Габрук и др. // Журн. аналитической химии. - 2003. - Т.58, № 12.-С. 1294-1299.

3. Анализ хроматографических профилей жирных кислот, токоферолов и стеринов как метод идентификации и прогнозирования свойств растительных масел и продуктов / О.А. Рабина, А.И. Вялков, Е.И. Черняк и др. // Тез. докл. V Всерос. науч. конф. «Химия и технология растительных веществ». -Уфа, 2008.-С. 245.

4. Березкин, В.Г. Количественная тонкослойная хроматография / В.Г. Березкин, Н.С. Бочков. -М.: Наука, 1980. - 183 с.

5. Биологически активные пищевые каротиноидные красители из растительного сырья / В.М. Болотов, Е.В. Комарова, Л.И. Перикова, И.Е. Ильин // Тез. докл. 3-ей Всерос. науч.-метод. конф. «Фармобразование - 2007». -Воронеж, 2007. - С. 77 - 79.

6. «Витамин Е в капсулах». ФС 42-7843-97.

7. Государственный Стандарт СССР. 5472-50. Масла растительные. Определение запаха, цвета и прозрачности. -1990. - С. 9-12.

8. Государственный Стандарт РФ. 50457-92. Масла растительные. Методы определения кислотного числа. — 1992. — С. 177-180.

9. Государственный Стандарт РФ. 51487-99. Масла растительные. Метод определения перекисного числа. - 1999. - С. 89-93.

10. Государственная фармакопея РФ XII изд. - М.: Издво: Научный-центр экспертизы средств медицинского назначения, 2008. — Ч. 1. - 704 с.

11. Дзюба, В.Ф. Биофармацевтические исследования лекарственных форм с маслом амаранта / В.Ф. Дзюба, Е.Ф. Сафонова, И.М. Корейская // Матер, медико-фарм. конгр. «Аптека- 2007». -Москва, 2007. - С. 128-130.

12. Дмитровский, А.А. О возможности участия свободных радикалов в энзиматическом превращении Р-каротина в ретиналь / А.А. Дмитровский, Ю.В. Ершов // Прикладная биохимия и микробиология. — 1993. - Т.29. - С. 125-130.

13. Жиры. Химический состав и экспертиза качества / О.Б. Рудаков, А.Н. Пономарев, К.К. Полянский, А.В. Любарь. - М.: ДелиПринт, 2005. - 351 с.

14. Жмырко, Т.Г. Анализ суммы гидроксиацилглицеринов масла семян облепихи / Т.Г. Жмырко, Я.В. Рашкес, А.И. Глушенкова // Химия природных соединений. - 1991. - № 2. - С. 176-182.

15. Зависимость химического состава плодов шиповника от степени их зрелости и сортовых особенностей / В.Н. Тимофеева, А.В. Черепанова, Т.А. Полякова, Н.В. Лачева // Хранение и переработка сельхоз. сырья. - 2004. - № 12. -С. 49-50.

16. Изучение стабильности биологически активных веществ в растительных маслах и масляных экстрактах при хранении / О.В. Чечета, Е.Ф. Сафонова, А.И. Сливкин, Н.С. Медведева // Труды науч.-практ. конф. «Фармация из века в век. Анализ и стандартизация лекарственных средств». - СПб., 2008. Ч.Ш. —С. 190-195.

17. Исследование биохимических свойств среднеазиатской облепихи, произрастающей в провинции Ганьсу (КНР) / Cheng Tigong, Ni Ming Kang, Li Rong, Ji Fen. II Химия природных соединений. - 1991. - № 1. - С. 135-137.

18. Кирхнер, Ю. Тонкослойная хроматография / Ю. Кирхнер. - М.: Мир, 1981. -С. 402-407.

19. Клюев, С.А. Определение витаминов А и Е методом ВЭЖХ / С.А. Клюев // Журн. аналитической химии- 1996. - Т.51. - № 9. - С 961-963.

20. Количественная тонкослойная хроматография / О.Б. Рудаков, В.В. Хрипушин, Т.А. Железная, Е.Ф. Сафонова // Сорбционные и хроматографические процессы. - 2002. - Вып. 2. - С. 209 - 212.

21. Масло шиповника». ФС 42-42-10179-99.

22. Машковский, М.Д. Лекарственные средства / М.Д. Машковский. - М., 2002. - 14 изд. - Т.2. - С. 105 -107.

23. Оценка качества растительных масел и масляных экстрактов, применяемых в фармации / О.В. Рыбакова, Е.Ф. Сафонова, А.И. Сливкин, О.В. Фролова // Вестник ВГУ, Серия: Химия, Биология, Фармация. - 2007. - № 2. - С. 174 -177.

24. Проблемы стандартизации растительных масел и масляных экстрактов / Е.Ф. Сафонова, А.И. Сливкин, А.А. Назарова и др. // Тез. докл. 2-ой Всерос. науч.-метод. конф. «Фармобразование - 2005». - Воронеж, 2005. — С. 389-391.

25. Рыбакова, О.В. Изучение стабильности токоферолов в растительных маслах и масляных экстрактах при хранении / О.В. Рыбакова, Е.Ф. Сафонова, А.И. Сливкин // Материалы VII Междунар. науч.-практ. конф. «Здоровье и образование в XXI веке». - М., 2006. - С. 598 - 600.

26. Рыбакова, О.В. Выделение токоферолов из растительных масел и масляных экстрактов / О.В. Рыбакова, Е.Ф. Сафонова, А.И. Сливкин // Тез. докл. 3-ей Всерос. науч.-метод. конф. «Фармобразование-2007». - Ч. I. - Воронеж, 2007. -С. 304-305.

27. Хранение растительных масел и жиров / А.В. Луговой, Н.И. Чертков, А.Г. Сергеев, А.Н. Миронова. - М.: Агропромиздат, 1989. - С. 19-23.

28. Чечета, О.В. Идентификация растительных масел и масляных экстрактов ме-тодом ТСХ / О.В. Чечета, Е.Ф. Сафонова, А.И. Сливкин // Сорбционные и хроматографические процессы. — 2008. - Вып. 4. — С. 646 - 6

29. Чечета, О.В. Изучение растительных масел с помощью спектрофотометрии в видимой области / О.В. Чечета, Е.Ф. Сафонова, А.И. Сливкин // Тез. докл. Междунар. конф. «Фармация и общественное здоровье». - Екатеринбург, 2008. -С. 313-316.

30. Чечета, О.В. Изучение степени чистоты растительных масел и масляных экстрактов / О.В. Чечета, Е.Ф. Сафонова, А.И. Сливкин // Тез. докл. межре-гион, науч.-метод. конф. «Проблемы здоровъясбережения школьников и студентов. Новые научные тенденции в медицине и фармации». - Воронеж, 2008. -С. 482-483.

31. Чечета, О.В. Методика определения каротиноидов методом хроматографии в тонком слое сорбента / О.В. Чечета, Е.Ф. Сафонова, А.И. Сливкин // Сорбционные и хроматографические процессы. - 2008. - Вып. 2. - С. 320 — 326.

32. Чечета, О.В. Стабильность каротиноидов в растительных маслах при хранении / О.В. Чечета, Е.Ф. Сафонова, А.И. Сливкин // Фармация. - 2008. - № 2.-С. 12-14.

33. Чечета, О.В. Экспресс-анализ в оценке качества растительных масел и масляных экстрактов / О.В. Чечета, Е.Ф. Сафонова, А.И. Сливкин // Материалы IX Междунар. науч.-практ. конф. «Здоровье и образование в XXI веке». — М., 2008.-С. 199-200.

34. Шиков, А.Н. Растительные масла и масляные экстракты: технология, стандартизация, свойства / А.Н. Шиков, В.Г. Макаров, В.Е. Рыженков. - М.: Из-дат. дом «Русский врач», 2004. - С. 100 - 112.

35. Экспресс-анализ экстрактов каротиноидов из растительного сырья методом ВЭЖХ / В.М. Болотов, О.Б. Рудаков, Е.В. Шершнева и др. // Вестник ВГТА. - 1997. - №2. - С. 56-59.

ПРИЛОЖЕНИЕ 1

Рис. 1. УФ-спектр спиртового раствора МЭ цветков календулы

Рис. 2. УФ-спектр спиртового раствора РМ виноградной косточки

⇐ Предыдущая 1 2 3 4 5 67